本发明专利技术涉及优良的有免疫抑制活性的单克隆抗体或其抗原结合片段。更具体而言，本发明专利技术涉及是与由SSVLYGGPPSAA（SEQ?ID?NO:1）所示的氨基酸序列构成的肽或该肽和药学上可容许的载体的结合体结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，相比对组蛋白H1的结合亲和性，对核心组蛋白的结合亲和性更高的单克隆抗体或其抗原结合片段。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】有免疫抑制活性的单克隆抗体或其抗原结合片段【关联申请的参照】本专利申请伴随基于2010年8月20日申请的日本专利申请2010-185406号的优先权的主张，将该在先的专利申请的全部公开内容通过引用作为本说明书的公开之一部分。【
】本专利技术涉及有优良的免疫抑制活性的单克隆抗体或其抗原结合片段及产生它们的杂交瘤。【
技术介绍
】在器官移植医疗中，为了抑制器官移植后的排斥反应，从前使用各种的免疫抑制剂。作为这样的免疫抑制剂，可举出例如，他克莫司(FK506)、环孢菌素A等(Jpn J Pharmaco I，71，89-100，1996 )。但是，从前的免疫抑制剂中，癌细胞的增殖促进、骨髓功能抑制等是强的副作用、感染症、还有永续施用的必要性等成为问题(非专利文献1: Transplantation,58, 170-178，1994)。另外，一般而言，判断免疫抑制剂的退药时期是困难的。例如，有不继续免疫抑制剂的施用也组织植入的情况。这时如果不小心继续免疫抑制剂的施用，则有对患者给单单由毒性的损伤的担忧。另一方面，也有通过中断免疫抑制剂的施用，植入的组织转为排斥的可能性。此时，再开始免疫抑制剂的施用也多免不了排斥的情况。另一方面，进行着与器官移植相关的各种的研究。例如，在大鼠原位肝移植(0LT: orthotopic liver taransplantation)的系中，将移植片的植入率高的供体DA大鼠肝(MHC haplotype RTla)移植到受者PVG大鼠(RTlc)时，被报告不施用免疫抑制剂而植入移植片 (非专利文献 2 transplantation, 35, 304-311, 1983)。另外，通过将移植DA大鼠肝的受者PVG大鼠的血清(post-OLT serum)向发生排斥反应的组合的移植模型系统术前施用I次，报告移殖片的排斥反应被抑制(非专利文献3: J.Surg.Res.,80，58-61，1998)。另外公开，通过将抗组蛋白Hl多克隆抗体向排斥反应必发生的DA (RTla)及LWIS 大鼠(RTll)的心移植系统(in vivo)术后施用，排斥反应被抑制，受者生存(非专利文献4: Transplantation,77, 1595-1603，2004)。另外公开，本专利技术人之一部分通过使用PVG大鼠来源移植后初期血清而混合淋巴细胞培养反应(MLR ；mixed lymphocyte reaction)被抑制,及抗组蛋白Hl抗体示MLR抑制活性(专利文献1:特开2004-149507号公报)。另外公开，本专利技术人之一部分制造了抗组蛋白Hl单克隆抗体，及，杂交瘤16G9(保藏号FERMBP-10413)产生的抗组蛋白Hl单克隆抗体与包含由噬菌体展示法得到的SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的肽结合(专利文献2:W02006/025580号公报)。另外报告，本专利技术人之一部分制造了将包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的肽作为抗原的多克隆抗体(专利文献3:US-2009-0081247-Al)。但是，在器官移植中，依然要求创造可在移植排斥抑制中利用的，有优良的免疫抑制活性的单克隆抗体。【现有技术文献】【非专利文献】非专利文献1: Transplantation, 58, 170-178，1994非专利文献2: Transplantation, 35，304-311，1983非专利文献3: J.Surg.Res.,80, 58-61，1998非专利文献4: Transplantation，77，1595-1603, 2004【专利文献】专利文献1:特开2004-149507号公报专利文献2:W02006/025580号公报专利文献3:US-2009-0081247-Al【专利技术概述】本专利技术人此番、发现了有显著的免疫抑制活性的，新颖的单克隆抗体及其抗原结合片段、及产生它们的杂交瘤。本专利技术便基于这样的见解。从而，本专利技术旨在提供有显著的免疫抑制活性的，新颖的单克隆抗体及其抗原结合片段、及产生它们的杂交瘤。然后，本专利技术的单克隆抗体或抗原结合片段与包含SSVLYGGPPSAA (SEQ ID NO:1) 所示的氨基酸序列的肽或该肽和药学上可容许的载体的结合体结合，并且，特征在于相比对组蛋白Hl的结合亲和性，对核心组蛋白的结合亲和性更高。另外，本专利技术的杂交瘤产生上述单克隆抗体或抗原结合片段。本专利技术的单克隆抗体有显著的免疫抑制活性，可在器官移植中的移植排斥抑制中有利地利用。【【附图说明】】【图1】示本专利技术的单克隆抗体(以下，也称为“SSVmAb”)的同种型的鉴定试验的结果。【图2】关于本专利技术的单克隆抗体(SSVmAb)，示比较对组蛋白H1、组蛋白H2A、H2B、 H3或H4的结合亲和性的试验的结果。【图3】参考例；关于具有保藏号FERMBP-10413的保藏的杂交瘤16G9产生的单克隆抗体(以下，也称为“16G9mAb”)，示比较对组蛋白H1、组蛋白H2A、H2B、H3或H4的结合亲和性的试验的结果。【图4】示使用本专利技术的单克隆抗体(SSVmAb)及16G9mAb的混合淋巴细胞反应 (MLR)试验的结果。【图5】示将本专利技术的单克隆抗体(SSVmAb)及16G9mAb的对T细胞的反应性由流式细胞术比较的结果。【图6】A涉及本专利技术的单克隆抗体(SSVmAb)及对照试剂(IsotypeIgGl)的，示使用ATP合成酶不由SiRNA敲除的脾脏细胞的MLR试验的结果。B涉及本专利技术的单克隆抗体 (SSVmAb)及对照试剂(IsotypeIgGl )，示使用将ATP合成酶由siRNA敲除的脾脏细胞的MLR 试验的结果。【实施方式】【保藏】本专利技术的杂交瘤小鼠-小鼠杂交瘤SSV-C93-3，其原保藏日为2010年8月17日， 在独立行政法人制品评价技术基盘机构专利微生物保藏中心(住所:日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8生物技术本部)，以保藏号NITE BP-972保藏。【单克隆抗体及杂交瘤】本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段与由SSVLYGGPPSAA (SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列构成的肽或该肽和药学上可容许的载体的结合体结合，并且，其特征在于相比对接头组蛋白(组蛋白Hl)的结合亲和性，对核心组蛋白的结合亲和性更高。有涉及的反应性的单克隆抗体或其抗原结合片段有显著的免疫抑制活性是意外的事实。根据本专利技术的优选的实施方式，上述抗体或其抗原结合片段针对由SSVLYGGPPSAA (SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列构成的肽或该肽和药学上可容许的载体的结合体。另外，根据本专利技术的优选的实施方式，核心组蛋白是组蛋白H2A、H2B、H3或H4，更优选为H2A、H3或H4。另外，本专利技术的抗体或其抗体结合片段可含重链及/或轻链。各轻链及重链可在其N-末端有可变区域,各可变区域优选交替含4个框架区域(framework region) (FR) 和3个互补性决定区域(CDR)。可变区域中的残基根据由Kabat等考虑的系统惯用地编号。此系统如 Kabat 等，1987、Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Departement of He本文档来自技高网...
【技术保护点】
单克隆抗体或其抗原结合片段，其与包含SSVLYGGPPSAA（SEQ?ID?NO:1）所示的氨基酸序列的肽或该肽和药学上可容许的载体的结合体结合，所述单克隆抗体或其抗原结合片段相比对组蛋白H1的结合亲和性，对核心组蛋白的结合亲和性更高。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.08.20 JP 2010-1854061.单克隆抗体或其抗原结合片段，其与包含SSVLYGGPPSAA (SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列的肽或该肽和药学上可容许的载体的结合体结合，所述单克隆抗体或其抗原结合片段相比对组蛋白Hl的结合亲和性，对核心组蛋白的结合亲和性更高。2.权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其针对由SSVLYGGPPSAA(SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列构成的肽或该肽和药学上可容许的载体的结合体。3.权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含如下轻链可变区域，所述轻链可变区域包含:由RASSSVSYMH (SEQ ID NO:2)所示的氨基酸序列构成的CDR1、由ATSNLAS (SEQ ID N0:3)所示的氨基酸序列构成的⑶R2、及由QQWSSNPWT (SEQ ID N0:4)所示的氨基酸序列构成的CDR3。4.权利要求1~3之任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中上述单克隆抗体或其抗原结合片段的轻链可变区域包含SEQ ID NO:6的第23位~第128位所示的氨基酸序列。5.权利要求1~4之任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含如下重链可变区域，所述重链可变区域包含:由GYNMN (SEQ ID NO:7)所示的氨基酸序列构成的⑶R1、由NINPYYGSTSYNQKFKG ( SEQ ID NO:8)所示的氨基酸序列构成的CDR2、及由SPYYSNYWRYFDY (SEQ ID NO:9)所示的氨基酸序列构成的CDR3。6.权利要求1~5之任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中上述单克隆抗体或其抗原结合片段的重链可变区域包含SEQ ID NO: 11的第20位~第141位所示的氨基酸序列。7.权利要求1~6之任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤秀次，后藤武，后藤茂，中野敏明，大森直哉，江贵真，岛田弥生，森健二，宫城孝满，
申请(专利权)人：学校法人城西大学，
类型：
国别省市：
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