本发明专利技术公开了一种肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒及其制备方法，属于肝型脂肪酸结合蛋白含量的检测技术领域。试剂盒由彼此独立的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成；其中，试剂Ⅰ的组分包括：缓冲液、防腐剂、表面活性剂和水；所述的试剂Ⅱ的组分包括：包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒、缓冲液、助悬剂、防腐剂、表面活性剂和水。采用本发明专利技术的技术制备的肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒具有操作简单、定量准确、灵敏度高、特异性好、检测范围广等诸多优良的特性，适合于肝型脂肪酸结合蛋白临床检测的推广和应用。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，属于肝型脂肪酸结合蛋白含量的检测
。试剂盒由彼此独立的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成；其中，试剂Ⅰ的组分包括：缓冲液、防腐剂、表面活性剂和水；所述的试剂Ⅱ的组分包括：包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒、缓冲液、助悬剂、防腐剂、表面活性剂和水。采用本专利技术的技术制备的肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒具有操作简单、定量准确、灵敏度高、特异性好、检测范围广等诸多优良的特性，适合于肝型脂肪酸结合蛋白临床检测的推广和应用。【专利说明】
本专利技术属于肝型脂肪酸结合蛋白含量的检测
，特别涉及。
技术介绍
肝型脂肪酸结合蛋白(liverfatty acid binding protein,L-FABP)是脂肪酸结合蛋白家族的成员，它是在肝脏中表达的脂肪酸结合蛋白，主要介导脂质的吸收和转运，并在调节脂肪酸氧化、减少细胞氧化应激和影响细胞生长等方面发挥重要作用。近年来发现L-FABP是有肝、肾损伤的标志分子，并与脂肪肝、肥胖的发生发展关系密切。随着研究的深入，对L-FABP的生理功能、基因调控以及与疾病的关系有了更清楚的认识，对有关疾病的诊治有了更大的帮助。肝型脂肪酸结合蛋白与多种疾病的发生发展有着一定的联系。它可以作为肾病和肝损伤的标志分子，分子量仅为14.4KD的肝型脂肪酸结合蛋白在人肾脏近端小管也有表达，多种病理生理应激作用于近端小管都能诱导L-FABP的表达，导致尿液中L-FABP含量增多，因此成为慢性肾病标志分子。由于L-FABP在肝细胞高表达，可能成为肝损伤的标志分子，肝移植患者发生排斥反应的当天，血清L-FABP水平明显升高，并且早于急性排斥反应。后来进一步研究，L-FABP对评估肝缺血损伤程度以及评估肝切除术中导致肝损害的关键因素等，都具有较高的敏感性和特异性。有文献报道:尿L-FABP水平诊断急性肾损伤敏感度为74.5%，特异性为77.6% ;预测需要透析，敏感度69.1%，特异性42.7% ;预测死亡率，敏感度93.2%，特异性78.8%。鉴于L-FABP的检测可以作为肾损伤的诊断标志物，开发该指标的检测试剂盒有利于该指标检测的临床应用。目前，关于L-FABP的专利技术多集中于该物质作为疾病诊断标志物的应用及研究方面。在检测产品方面，现有的L-FABP诊断试剂产品多采用的是酶联免疫分析技术。酶联免疫分析技术具有检测精确度高、灵敏度好等诸多优良的特性，但该检测方法操作繁琐、检测耗时长，不利于样本的及时检测，同时该检测方法只能批量检测样本，不能实现样本的随到随测，此外，酶联免疫检测方法具有自动化程度低，受人工操作影响较大等方面的不利因素，使得其在未来的检测技术中必然处于被替代的技术。由于L-FABP有着良好的诊断意义，开发一种新型、高效便捷的检测方法及检测产品将为该指标的临床应用提供良好的前提条件。
技术实现思路
本专利技术的目的是为解决上述问题而提供了一种稳定性好、灵敏度高、特异性强、操作简单和线性范围宽的肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒及其制备方法。本专利技术所采用的技术方案是:一种肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒，所述试剂盒由试剂I和试剂II组成，所述试剂I的组分包括:缓冲液、防腐剂、表面活性剂和水；所述的试剂II的组分包括:包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒、缓冲液、助悬剂、防腐剂、表面活性剂和水。优选地，所述包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒的粒径为180?220nm，所述肝型脂肪酸结合蛋白抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。试剂II中胶乳微球颗粒的粒径的选择对试剂盒的稳定性、灵敏度以及检测结果的准确性等有着非常显著的影响，当本专利技术选用的胶乳颗粒的粒径为180?220nm时，制备出的检测试剂盒的稳定性、灵敏度以及检测线性范围等特性要明显优于其它粒径的胶乳颗粒，尤其是当胶乳颗粒的粒径为200nm时，制备的检测试剂盒其各项性能最好。包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳微球颗粒，其肝型脂肪酸结合蛋白抗体包被胶乳颗粒可以采用物理吸附法和化学交联法制备，物理吸附法是利用分子之间的作用力将抗体吸附到胶乳颗粒的表面，化学交联法是通过化学键将抗体与胶乳微球颗粒表面的基团相结合。本专利技术采用化学交联法制备的胶乳颗粒，其配制的试剂盒性能更稳定，产品的货架期、开瓶稳定性以及热稳定性明显优于物理法制备的检测试剂盒。本专利技术中肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体或多克隆抗体采用化学交联法包被胶乳颗粒，其中肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体或多克隆抗体能很好的识别样品中的肝型脂肪酸结合蛋白抗原，从而能很好的提高检测试剂盒的特异性。进一步地，所述化学交联法制备包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒包括以下步骤:(I)取0.2?1.0mL胶乳微球颗粒于离心管中，加入4.0?4.8mL磷酸缓冲液，混匀后离心得胶乳微球颗粒，后用3?IOmL磷酸盐缓冲液重悬胶乳微球颗粒，向重悬的胶乳微球颗粒溶液中加入浓度为0.02mol/L的6-氨基己酸溶液0.5?2mL，再加入I?3mgEDC粉末，搅拌反应20?60min，离心去上清，并用3?IOmL磷酸盐缓冲液重悬胶乳颗粒，既得羧化改性的聚苯乙烯胶乳微球颗粒。聚苯乙烯胶乳微球颗粒的羧化改性是将氨基己酸基团连接到胶乳微球颗粒表面。(2)取50?200ug肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体和多克隆抗体冻干品，用0.05?0.5mL去离子水溶解，后取50?300uL抗体溶液用5mL磷酸盐缓冲液稀释，并将稀释后的溶液加入羧化改性的聚苯乙烯胶乳微球颗粒溶液中，再加入I?5mg的EDC，在4°C搅拌反应6?10小时，加入0.2mL甘氨酸溶液终止反应，离心去上清，并用ImL pH7.0的2- (N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液中分散，既得包被抗体的胶乳微球颗粒溶液。肝型脂肪酸结合蛋白抗体与胶乳微球颗粒的结合，是肝型脂肪酸结合蛋白抗体通过氨基己酸键与胶乳微球颗粒连接。优选地，所述的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、咪唑缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液以及2- (N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液中的一种或任意两种的混合；所述防腐剂为叠氮化钠、Proclin300、硫柳汞、苯酚以及乙基汞硫代硫酸钠中的一种或任意几种的混合；所述表面活性剂为吐温20、吐温40、司盘40以及司盘60中的一种或任意几种的混合；所述助悬剂为乙二醇、丙三醇、海藻酸钠、乳糖以及麦芽糖中的一种或任意几种的混合。本专利技术所述的缓冲剂能够使反应体系维持一定的pH值，各种能使反应体系维持一定PH值的物质均能作为本专利技术的缓冲剂，可选自三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、咪唑缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液和2- (N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲液中的一种或任意两种混合。本专利技术所述的防腐剂是为了防止细菌滋生，避免细菌滋生导致的产品变质从而对检测结果造成的不良影响。各种能阻止细菌繁殖的物质均能用作本专利技术检测试剂盒的防腐剂组分，本专利技术检测试剂盒中所用的防腐剂选自叠氮化钠、Proclin300、硫柳汞、苯酚和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或任意几种混合。本专利技术试剂盒中的表面活性剂有利于反应试剂盒的各种组分均匀分散，有利于维持试剂盒各组分储存过程中的稳定性，同时表面活性剂有利于检测样本均匀分散于反应体系中，使反应体系处于均一状态，可减少本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，所述试剂Ⅰ的组分包括：缓冲液、防腐剂、表面活性剂和水；所述的试剂Ⅱ的组分包括：包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒、缓冲液、助悬剂、防腐剂、表面活性剂和水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：华权高，来祥兵，许可，沈鹤霄，舒芹，
申请(专利权)人：武汉华美生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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