本发明专利技术公开了番茄SlEBI基因及其RNAi表达载体和应用，番茄SlEBI基因的序列如SEQ?ID?No.3所示，将番茄SlEBI基因沉默后番茄表型呈多花及花柄、果柄无离区表型，因此可以通过沉默SlEBI基因获得多花且不易落花落果的高产番茄新品种，具有良好的市场前景和经济价值，同时为其它观赏植物的多花新品种培育和筛选以及为农作物的高产新品种的培育和筛选提供了参考和借鉴。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了番茄SlEBI基因及其RNAi表达载体和应用，番茄SlEBI基因的序列如SEQ?ID?No.3所示，将番茄SlEBI基因沉默后番茄表型呈多花及花柄、果柄无离区表型，因此可以通过沉默SlEBI基因获得多花且不易落花落果的高产番茄新品种，具有良好的市场前景和经济价值，同时为其它观赏植物的多花新品种培育和筛选以及为农作物的高产新品种的培育和筛选提供了参考和借鉴。【专利说明】番茄SIEBI基因及其RNAi表达载体和应用
本专利技术属于基因工程
，涉及番茄SlEBI基因和利用该基因构建的RNAi载体及其应用，还涉及该RNAi载体的构建方法。
技术介绍
番茄是一种深受人们所喜爱的世界性蔬菜。其每一台花序一般8到12朵花，且由于每一花柄处都具有离区，使得花朵在受到外力(如风、雨等)影响时极易脱落，这一特征大大限制了番茄的产量。而番茄的产量是农民们一直关注的重要问题。传统的育种方法一般通过杂交等方法增加番茄重量或延长番茄结果期来培育高产品种。该方法周期长、耗资多、增产效果并不理想且不可稳定遗传。目前，传统育种方法已不能满足番茄生产的需要。近年来，随着基因工程的迅速发展和转基因技术的日益完善，基因工程技术在培育高产番茄方面显示了极大的潜力。自1983年世界上第一例转基因作物问世以来，转基因植物的研究得到了迅速发展。1994年延熟保鲜转基因番茄在美国批准上市。目前，基因工程技术已广泛的用于番茄品种的改良和育种中。利用基因工程技术快速获得稳定遗传的番茄新品种必将是当前和未来的发展趋势。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种番茄SlEBI基因；本专利技术的目的之二在于提供番茄SlEBI基因核心片段；本专利技术的目的之三在于提供番茄SlEBI基因核心片段在培育多花高产番茄品种中的应用；本专利技术的目的之四在于提供番茄SlEBI基因核心片段在培育花柄无离区番茄品种中的应用；本专利技术的目的之五在于提供含有SlEBI基因核心片段的RNAi表达载体；本专利技术的目的之六在于提供含有所述RNAi表达载体的微生物转化体；本专利技术的目的之七在于提供RNAi表达载体的制备方法；本专利技术目的之八在于提供RNAi表达载体在培育多花高产番茄品种中的应用。I,番茄SlEBI基因，核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示。2.番茄SlEBI基因核心片段，核苷酸序列如SEQ ID N0.6所示。3.所述番茄SlEBI基因核心片段在培育多花高产番茄品种中的应用。4.所述番茄SlEBI基因核心片段在培育花柄无离区番茄品种中的应用。5.含有所述SlEBI基因核心片段的RNAi表达载体。优选的，所述RNAi表达载体是以pBinl9载体为骨架载体，在多克隆酶切位点处插入顺序连接的CaMV35S启动子、番茄SlEBI基因核心片段的反向序列、PDK内含子、番茄SlEBI基因核心片段正向序列和Nos终止子表达框。6.含有所述RNAi表达载体的微生物转化体。7.所述RNAi表达载体的制备方法，包括如下步骤:a.以含SEQ ID N0.6的重组质粒为模板，以SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.5为引物进行PCR扩增，将扩增产物纯化后用Cla I和Xba I双酶切，再与经同样双酶切的pHANNIBAL载体连接，获得重组质粒pHANNIBAL:: SlEBI⑴；b.按步骤a的方法进行PCR扩增，将扩增产物纯化后用Kpn I和Xho I双酶切，再与经同样双酶切的重组质粒pHANNIBAL: =SlEBI⑴连接，获得重组质粒pHANNIBAL::SlEBI(2)；c.将步骤b所得重组质粒pHANNIBAL:: SlEBI (2)用Sac I和Spe I双酶切，再与经Sac I和Xba I双酶切的pBinl9载体连接，得RNAi表达载体。优选的，所述含SEQ ID N0.6的重组质粒由如下方法制备，以含SlEBI基因的重组质粒为模板，以SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.5为引物进行扩增，将扩增产物与pGEM_T Easy载体连接，得含SEQ ID N0.6的重组质粒。8.所述RNAi表达载体在培育多花高产番茄品种中的应用。本专利技术的有益效果在于:本专利技术获得了番茄SlEBI基因，利用番茄SlEBI基因核心片段构建番茄SlEBI基因沉默的RNAi载体，将该RNAi载体转入番茄，所得转基因番茄阳性植株中SlEBI基因的表达均较非转基因植株显著降低，植物株型为多花及花柄无离区表型，成功获得 了多花且不易落花落果的高产番茄新品种；与传统育种方法通过杂交等方法培育高产品种的周期长、耗资多、增产效果不理想且不可稳定遗传相比，本专利技术采用基因工程技术，高效并可稳定遗传地增加了番茄的花数，进而增加了产量，为番茄的品种改良作出了积极的探索，也为观赏植物的多花育种和其他植物的高产育种提供了参考和借鉴，所得多花高产番茄新品种具有良好的市场前景和经济价值。【专利附图】【附图说明】为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作进一步的详细描述，其中:图1为番茄SlEBI基因扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析图，其中a为番茄SlEBI基因全长的的琼脂糖凝胶电泳分析图；b为番茄SlEBI基因核心段的琼脂糖凝胶电泳分析图，M为DNA分子量标准(Maker)。图2为重组质粒pHANNIBAL: =SlEBI (I)构建示意图。图3为重组质粒pHANNIBAL: =SlEBI⑵构建示意图。图4为重组质粒pBinl9:: SlEBIi构建示意图。图5为番茄转基因组织培养过程(其中a为番茄子叶片预培养I天后，b为番茄愈伤组织分化，c为番茄抗性芽的分化，d为番茄抗性植株的产生)。图6为PCR检测NPTII报告基因在转基因番茄植株中的表达(M为Maker，CK-为阴性对照，CK+为阳性对照，-为空白对照，1-15为转基因番茄植株)。图7为SlEBI基因在转基因番茄阳性植株中的沉默效果鉴定(WT为非转基因番茄，RMm, 4，6，8，15为不同的转基因番茄阳性株系)。图8为转基因番茄阳性植株结果图(A，B为非转基因番茄花序；C为非转基因番茄花序的电镜照片；D，E为转基因番茄花序；F为转基因番茄花序的电镜照片)。图9为转基因番茄阳性植株的无离区表型(其中A图中WT为非转基因番茄，RNAi转基因番茄阳性株系，B为非转基因番茄，C为转基因番茄)。【具体实施方式】以下将结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第双版，J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，科学出版社，2002年)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。本专利技术实施例中使用的番爺品种为“Solanum lycopersicon Mill.cv.AilsaCraig”,为本实验室留种。pGEM-T Easy载体为Promega公司产品，pHANNIBAL载体、pBin9载体、大肠杆菌DH5 a、含有游动质粒pRK2013的大肠杆菌“协助”菌(简称helper)和根癌农杆菌LBA4404由本实验室保存；RNA提取试剂盒、RNA PCR Kit(AMV)Ver.3.0试剂盒、DNA提取试剂盒Universal Genomic DNA E本文档来自技高网...
【技术保护点】
番茄SlEBI基因，其特征在于：核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡宗利，董婷婷，陈国平，朱明库，张建苓，殷文成，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：
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