本发明专利技术涉及真菌的发酵培养基及工艺。更具体地，本发明专利技术涉及一种蜂球囊菌发酵高产淀粉酶的培养基及方法。所述培养基由麦芽糖、酵母浸粉、Ca2+维生素E组成。该方法通过将种子发酵液接种于培养基，250mL的三角瓶装液量为50mL，接种量5%，于25℃，转速140r/min下培养。本发明专利技术的发酵方法包括菌株活化、种子发酵液培养和发酵优化。本发明专利技术可大大提高淀粉酶产量。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及真菌的发酵培养基及工艺。更具体地，本专利技术涉及。所述培养基由麦芽糖、酵母浸粉、Ca2+维生素E组成。该方法通过将种子发酵液接种于培养基，250mL的三角瓶装液量为50mL，接种量5%，于25℃，转速140r/min下培养。本专利技术的发酵方法包括菌株活化、种子发酵液培养和发酵优化。本专利技术可大大提高淀粉酶产量。【专利说明】
本专利技术涉及。
技术介绍
淀粉酶(amylase)是水解淀粉和糖原酶类的统称，是能够将淀粉和糖原分子水解为糊精和更小的分子的一类酶，广泛存在于动物、植物和微生物中。淀粉酶广泛应用于燃料乙醇、淀粉糖浆、传统酿造、食品加工、纺织退浆等行业，是最早实现工业化生产，迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种之一。虽然淀粉酶在动植物中都存在，但是由于提取过程复杂、成本较高，因此工业化比较困难。微生物来源的淀粉酶提取工艺简单、成本低、产量高、 周期短、性质稳定、使用条件温和，因此微生物来源的淀粉酶在工业上得到了广泛应用，特别是在淀粉水解工业中，几乎完全取代了传统的化学水解法。α -淀粉酶是指从淀粉分子内部随机切割α -1, 4_糖苷键，生成糊精和还原糖的一类酶，由于生成的产物末端葡萄糖残基C-1碳原子为α构型，故称为α-淀粉酶。产α -淀粉酶的微生物很多，但是研究较多的主要是地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、放线菌、解淀粉芽孢杆菌、米曲霉、黑曲霉、假单胞菌等。由于蜂球囊菌生活周期短，能够从其中快速得到α -淀粉酶，以适应工业化大生产和样品提纯，从而可以提高该菌的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。`本专利技术首先提供了，其特征在于，所述培养基的原料含有:麦芽糖4g/100mL，酵母浸粉1-2 g/1OOmL, Ca2+3 X 10_3_6 X IO^mol/L, Ve 0.005-0.010 g/1OOmL, pH6.8-7.2。优选为按重量分数计，麦芽糖4 g/100mL，酵母浸粉2 g/1OOmL, Ca2+6X 10_3mol/L，Ve 0.005 g/1OOmL, pH 7.0。其次，本专利技术还提供了一种蜂球囊菌发酵产淀粉酶的方法，所述方法包含以下步骤: (a)将实验室所保存菌株转接至固体培养基上进行平板活化； (b)将蜂球囊菌接种于种子培养基，于25°C、转速140r/min条件下培养培养3天，制得种子发酵液； (c)将步骤(b)中制得的种子发酵液接种于权利要求1或2所述的培养基中，250mL的三角瓶装液量为50mL，接种量为5%，于25°C、转速140 r/min条件下培养。所述种子培养基PDA的原料含有:按培养基重量计，马铃薯200g/L，蔗糖20g/L。本专利技术采用的蜂球囊菌(梁勤，陈大福，王建鼎.营养生态条件对蜜蜂球囊菌生长及产孢的影响.中国生态农业学报，2001，9(4): 31-34)。采用本专利技术优化后的培养基，菌龄3d，发酵周期48h，发酵产生结果蜂球囊菌产淀粉酶为41.55U/mL以上。本专利技术的发酵方法有发酵周期短；条件温和，易于控制；提供的用于蜂球囊菌发酵生产淀粉酶的培养基，具有淀粉酶产率高，淀粉酶活力高，淀粉酶活性稳定以及重复性好等优点。【具体实施方式】本专利技术用下列实施例来进一步说明本专利技术，但本专利技术的保护范围并不限于下列实施例。实施例1 单因素实验确定培养基最优成分 (I)种子培养基配制:马铃薯去皮，切块，称取200g，沸水煮30min，6层纱布过滤，称取20g葡萄糖,加蒸懼水定容至1000mL, pH自然。高压灭菌121°C20min。(2)种子发酵液的制备:将蜂球囊菌接种于马铃薯琼脂培养基上，于30°C下培养3d，待其产孢子，即活化；将活化后的菌株用接种针将蜂球囊菌菌块(0.5X0.5cm)接种至种子培养基，25°C，转速140 r/min下培养72h，即为种子发酵液。(3)将上述种子培养基按5%接种量接种至装有50mL发酵培养基的三角瓶中(250mL)，25°C，转速 140 r/min 下培养 48h。(4)酶液的制备:取步骤(3)中的发酵液在4°C下,5000 r/min离心，IOmin,得上清液即为粗酶液，4°C保存，备用。(5)淀粉酶酶活测定:酶活测定方法采用DNS法。酶活定义为:50 °C，pH 7.5条件下每分钟从可溶性淀粉中释放I ymoL葡萄糖所需的酶量。方法:采用DNS法测定还原糖的含量，方法是将底物(I %的淀粉溶液)，即将Ig淀粉溶于100 mL的pH 7.5, Tris - HCl缓冲液中加热使其溶解。对照组(180 yL底物，加20 UL缓冲液，混匀)、样品组(180 yL底物，加20 μ L步骤(4)所制得的酶液，混匀)。将样品组、对照组均放入50 °C水浴锅中保温10 min，取出后各加200 μ L的DNS，沸水浴5 min后取出，用蒸馏水定容至2.5 mL，混匀后520 nm紫外光下测OD值。酶活计算公式:A =( XK + C0) XV1XN / (V2Xt) A——样品酶活(u/mL) A1——样品的吸光度值(OD520值)A0——空白对照的吸光度值(OD520值校准为O) K-p-nitrophenol标准曲线的斜率 C0-p-nitrophenol标准曲线的截距N-稀释倍数V1-反应液的体积(2.5 mL)V2——酶液的体积(0.02 mL) t——反应时间(10 min) (5)标准曲线的制作:【权利要求】1.，其特征在于，所述培养基的原料含有:麦芽糖 4g/100mL，酵母浸粉 l_2g/100mL，Ca2+3 X 10_3_6 X 10_3mol/L，VE0.005-0.010g/100mL, ρΗ6.8-7.2。2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基的原料优选为按重量分数计，麦芽糖 4g/100mL，酵母浸粉 2g/100mL，Ca2+6 X l(T3mol/L，VE0.005g/100mL, pH7.0。3.—种蜂球囊菌发酵高产淀粉酶的方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤: (a)将实验室所保存菌株转接至固体培养基上进行平板活化。 (b)将蜂球囊菌接种于种子培养基，于25C、转速140r/min条件下培养培养3天，制得种子发酵液； (c)将步骤(b)中制得的种子发酵液接种于如权利要求1所述的培养基中，250mL的三角瓶装液量为50mL，接种量为5%，于25°C ±1°C、转速140r/min条件下培养。4.如权利3所述一种蜂球囊菌发酵高产淀粉酶的方法，其特征在于，所述种子培养基为PDA，其原料含有:按培养基重量计，马铃薯200g/L，蔗糖20g/L。5.如权利3所述一种蜂球囊菌发酵高产淀粉酶的方法，其特征在于，步骤(c)的培养时间为2天。【文档编号】C12R1/645GK103509769SQ201310402428【公开日】2014年1月15日 申请日期:2013年9月7日 优先权日:2013年9月7日 【专利技术者】邱君志, 李小霞, 曹丽萍, 孟丽雪, 郭庆丰, 何肖云, 张以盼, 涂洁, 董冬, 姚灵丹 申请人:福建农林大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蜂球囊菌发酵高产淀粉酶的培养基及方法，其特征在于，所述培养基的原料含有：麦芽糖4g/100mL，酵母浸粉1?2g/100mL，Ca2+3×10?3?6×10?3mol/L，VE0.005?0.010g/100mL，pH6.8?7.2。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邱君志，李小霞，曹丽萍，孟丽雪，郭庆丰，何肖云，张以盼，涂洁，董冬，姚灵丹，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
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