分泌抗血管生成抗体支架和可溶性受体的细胞系及其用途制造技术

本发明专利技术提供编码基于抗体的支架例如完全抗体、抗体Fab片段、单链抗体、可溶性VEGF受体-Fc融合蛋白和/或抗血管生成PDGF受体的核酸和多肽序列。还包括编码这类抗血管生成抗体支架、VEGF受体和/或PDGF受体的细胞系。本发明专利技术还提供能够递送这类抗血管生成抗体支架、VEGF受体和/或PDGF受体的包封细胞疗法装置以及使用这些装置递送抗血管生成抗体支架、VEGF受体和/或PDGF受体以医治患者的病症的方法，所述病症包括眼科疾病、血管疾病、炎性疾病和细胞增殖疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请 本申请要求2010年12月2日提交的U.S.S.N.61/419，138的优先权，所述申请通过引用以其整体结合到本文中。专利
本专利技术总的来说涉及包封细胞疗法(encapsulated cell therapy)领域。专利技术背景 可以通过向患者供应由活细胞产生的一种或多种生物活性分子或通过从患者中除去由活细胞代谢的有害因子来医治或减轻许多临床病况、缺陷和疾病状态。在许多情况下，这些分子可恢复或抵偿器官或组织功能的损害或损失。因此，许多研究人员试图通过移植提供分泌产物或影响代谢功能的完整器官、器官组织和/或细胞，来重构器官或组织功能。然而，虽然这类移植可提供显著益处，但是在其应用中受到限制，因为对于移植是合适且是可得到的器官数目相对较少。此外，移植患者一般必须受免疫抑制以避免移植物的免疫排斥，免疫排斥引起移植物功能丧失和移植组织或细胞最终坏死。同样地，在许多情况下，移植必须长期保持功能，甚至是患者有生之年。保持患者处于免疫抑制状态持续相当的时间既是不希望的又是昂贵的。在一个实例中，其中仍需要其它有效疗法的是危及视力的眼部病症。在治疗这类疾病中的一个主要问题是因存在血-视网膜屏障而无法将治疗剂递送至眼部，以及以治疗有效浓度将其保持在眼部。许多生长因子在眼部疾病的治疗中已显示出希望。例如，已表明在各种动物模型中，BDNF和CNTF减缓视网膜神经节细胞的变性并减少光感受器的退化。参见例如GeneticTechnology News,第13卷,第I期(1993年I月)。另外，已表明神经生长因子在视神经切开术后提高视网膜神经节细胞存活，并且还表明在缺血后促进视网膜神经元恢复。参见例如 Siliprandi 等，Invest.0phthalmol.& Vis.Sc1., 34,第 3232-3245 页(1993)。最近，设计出基于抗体支架(antibody scaffold)的生物制剂，并用于眼病症,包括例如完全抗体(例如贝伐单抗)和抗体支架Fab片段(例如雷珠单抗(Ranibizumab))和免疫球蛋白Fc (例如阿柏西普(Aflibercept))。移植程序的一个可取的替代方式是植入物理屏障(physical barrier)内的细胞或组织，所述物理屏障允许营养物、代谢物和分泌产物扩散，但将阻断免疫排斥的细胞和分子效应物。已研究了保护产生所选产物的组织或细胞免于免疫系统的各种装置。参见例如美国专利号5，158，881、W092/03327、W091/00119和W093/00128，所述每个专利均通过引用以其整体结合到本文中。这些装置包括例如血管外扩散室(extravascular diffusionchamber)、血管内扩散室、血管内超滤室和微囊化细胞植入。参见Scharp, D.W.等，WorldJ.Surg., 8，第 221-9 页(1984)。参见例如 Lim 等，Science 210: 908-910 (1980)；Sun, A.Μ., Methods in Enzymology 137: 575-579 (1988) ；W0 93/03901 和美国专利号5，002，661。这类装置的使用可减少保持患者处于免疫抑制状态的需要。然而，对于提供长期移植物功能，这些方法无一是令人满意的。因此，需要在延长的时间将合适量的所需物质递送(或提供其它所需代谢功能)至眼或身体其它部位的方法，所需物质例如神经营养因子、抗血管生成因子、抗炎因子、酶、激素或其它因子。专利技术概述 本文提供编码包括抗体-支架、可溶性血管内皮生长因子(VEGF)受体和/或血小板衍生生长因子(TOGF)受体在内的抗血管生成蛋白的分离核酸，其中所述核酸包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成:SEQ ID N0:USEQ ID NO:3,SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:19,SEQ ID NO: 21,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:27,SEQ ID N0:29 和 SEQ IDN0:31。本专利技术还提供编码包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成的多肽的核酸分子:SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 10,SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30 和 SEQ IDN0:32。还提供编码具有与SEQID NO: 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30或32的任一个有至少95%同一性的序列的多肽的核酸分子。或者，所述核酸分子可为这类核酸分子的互补序列。本文所用术语“核酸分子”欲包括DNA分子(例如cDNA或基因组DNA)、RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸类似物产生的DNA或RNA的类似物及其衍生物、片段和同源物。核酸分子可以是单链的或双链的，但优选是双链DNA。本文所用“分离的”核酸分子是与存在于核酸来源的其它核酸分子分离的核酸分子。优选“分离的”核酸不含位于该核酸来源于其中的生物基因组DNA的该核酸侧翼的序列(即位于该核酸5’和3’端的序列)。例如，在不同的实施方案中，本专利技术的核酸分子可含有小于约5 kb、4 kb、3 kb、2 kb、l kb、0.5 kb或0.1 kb的核苷酸序列，所述核苷酸序列位于所述核酸来源于其中的细胞基因组DNA的该核酸分子的侧翼。此外，“分离的”核酸分子，例如cDNA分子，当通过重组技术产生时，可基本上不含其它细胞物质或培养基，或者当化学合成时，基本上不含化学前体或其它化学物质。例如，本领域技术人员应认识到，“分离的”核酸可以是最初来自噬菌体展示筛选的完全合成的分子。因此，在这种情况下，“分离的”核酸可以是基本上不含其它细胞物质、培养基、化学前体、化学物质等的合成分子。可采用标准分子生物技术和本文提供的序列信息来制备本专利技术的核酸分子(例如具有选自以下核苷酸序列的核酸分子:SEQ ID NO: USEQ ID NO: 3,SEQ ID NO: 5,SEQID NO: 7,SEQ ID NO: 9,SEQ ID NO:1USEQ ID NO: 13,SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 17,SEQID NO: 19,SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:29 和SEQ ID N0:31 ;编码具有选自以下序列的多肽的核酸分子:SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:4,SEQID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.12.02 US 61/419,1381.一种细胞系，其包含经遗传工程改造以产生治疗有效量的一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子的ARPE-19细胞，其中通过重复转染方法将一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子导入ARPE-19细胞中，其中所述重复转染包含1次转染、2次转染或3次转染。2.权利要求1的细胞系，其中当重复转染为1次转染时，所述细胞系产生介于10，OOO与30，000 ng/天/IO6个细胞之间的一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子。3.权利要求2的细胞系，其中所述细胞系产生约15，000ng/天/1O6个细胞的一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子。4.权利要求1的细胞系，其中当重复转染为2次转染时，所述细胞系产生介于30，000与50，000 ng/天/IO6个细胞之间的一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子。5.权利要求4的细胞系，其中所述细胞系产生约35，000ng/天/1O6个细胞的一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子。6.权利要求1的细胞系，其中当重复转染为3次转染时，所述细胞系产生介于50，000和75，000 ng/天/IO6个细胞的一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子。7.权利要求6的细胞系，其中所述细胞系产生约70，000ng/天/1O6个细胞的一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子。8.权利要求1的细胞系，其中使用包含由SEQID N0.1的核酸序列编码的可溶性VEGF受体的载体对所述ARPE-19细胞进行遗传工程改造。9.权利要求1的细胞系，其中使用包含可溶性VEGF受体的载体对所述ARPE-19细胞进行遗传工程改造，所述可溶性VEGF受体包含SEQ ID N0.2的氨基酸序列。10.一种细胞系，其包含经遗传工程改造以产生治疗有效量的一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子的ARPE-19细胞，其中治疗有效量为至少10，000 ng/天/1O6个细胞。11.一种可植入细胞培养装置，所述装置包含: a.核心，其包含权利要求1的细胞系或权利要求10的细胞系；和 b.包绕细胞系或细胞的半透膜，其中所述膜允许其中一种或多种抗血管生成抗体支架或抗血管生成分子扩散通过。12.权利要求11的装置，其中所述核心含有介于0.5-1.0*106个之间的ARPE-19细胞。13.权利要求11的装置，其中所述核心还包含布置在半透膜内的基质。14.权利要求13的装置，其中所述基质包含大量单丝，其中所述单丝 a.被捻成纱线或被织成网，或 b.被捻成呈无纺线的纱线， 且其中细胞分布在其中。15.权利要求14的装置，其中所述单丝包含选自以下的生物相容性材料:丙烯酸类、聚酯、聚乙烯、聚丙烯、聚乙腈、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、聚酰胺、聚氨酯、聚丁酯、丝、棉、壳多糖、碳和生物相容性金属。16.权利要求15的装置，其中所述单丝包含聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)纤维，所述纤维占装置内体积的40-85%之间。17.权利要求11的装置，其中所述装置还包含系链锚。18.权利要求17的装置，其中所述系链锚包含锚环。19.权利要求18的装置，其中所述锚环适于将装置锚定在眼结构上。20.权利要求11的装置，其中将所述装置植入眼或选自以下的另一靶区:脾、耳、心脏、结肠、肝、肾、乳腺、关节、骨髓、皮下和腹膜间隙。21.权利要求20的装置，其中将所述装置植入玻璃体、水样液、眼球筋膜下间隙、眼周间隙、眼的后房或前房。22.权利要求11的装置，其中所述半透膜包含选择性渗透的免疫保护膜。23.权利要求11的装置，其中所述半透膜包含超滤膜或微滤膜。24.权利要求22或23的装置，其中所述半透膜具有100nm的中值孔径大小。25.权利要求11的装置，其中所述半透膜包含无孔膜材料。26.权利要求25的装置，其中所述无孔膜材料是水凝胶或聚氨酯。27.权利要求11的装置，其中所述半透膜的标称分子量截止值(MWCO)为500kD。28.权利要求11的装置，其中所述半透膜的厚度为90-120ym之间。29.权利要求11的装置，其中将所述囊配置为中空纤维或平片。30.权利要求11的装置，其中所述装置的长度为4mm-11 mm之间。31.权利要求11的装置，其中所述装置具有介于0.9 mm-1.2 mm之间的内径。32.权利要求11的装置，其中所述装置的...

【专利技术属性】
技术研发人员：V凌，AM尼斯蒂恩，W陶，PF斯塔比拉，K考珀，
申请(专利权)人：神经技术美国有限公司，
类型：
国别省市：