本发明专利技术提供使核酸电泳的方法，该方法通过简单操作能够高效地浓缩和纯化核酸。电泳方法包括使插入了具有阴离子官能团的嵌入剂的核酸电泳。该方法包括将含有核酸的样品、具有与样品中包含的物质含有的羧基进行脱水缩合反应的官能团的化合物以及脱水缩合反应的缩合剂进行混合；以及使核酸电泳。浓缩和回收核酸的方法通过增加与嵌入剂结合的核酸的负电荷，能够增加核酸的电泳速度。使核酸电泳的方法通过使样品中的物质的羧基进行脱水缩合反应，能够通过电泳稳定地分离核酸和上述物质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供使核酸电泳的方法，该方法通过简单操作能够高效地浓缩和纯化核酸。电泳方法包括使插入了具有阴离子官能团的嵌入剂的核酸电泳。该方法包括将含有核酸的样品、具有与样品中包含的物质含有的羧基进行脱水缩合反应的官能团的化合物以及脱水缩合反应的缩合剂进行混合；以及使核酸电泳。浓缩和回收核酸的方法通过增加与嵌入剂结合的核酸的负电荷，能够增加核酸的电泳速度。使核酸电泳的方法通过使样品中的物质的羧基进行脱水缩合反应，能够通过电泳稳定地分离核酸和上述物质。【专利说明】使核酸电泳的方法、浓缩和纯化核酸的方法、用于核酸电泳的盒以及制造用于核酸电泳的盒的方法
本专利技术公开了涉及使核酸电泳的方法、浓缩和纯化核酸的方法、用于核酸电泳的盒(cartridge)、以及制造该盒的方法。更具体地讲，本公开涉及可以通过在槽中电泳来浓缩和纯化核酸的盒。
技术介绍
聚合酶链反应(PolymeraseChain Reaction)和环介导等温扩增(Loop-MediatedIsothermal Amplification)的核酸扩增反应已应用于生物技术很多领域。比如,在医学领域，实施基于DNA和RNA的核苷酸序列的诊断，以及在农业领域，DNA测试已应用于像确定基因改性作物的技术中。核酸扩增反应使得能够通过扩增核酸高效地检测到少量样品中的核酸。但是，如果样品中所包含的核酸的量极少的话，该量可能低于检测极限。进一步，如果样品中核酸的浓度很小，那么该核酸可能就不能被检测出来，因为能够引入到反应场中的体积的样品可能不包含要扩增的核酸。在这些情况下，在被引入到反应场之前，浓缩样品中核酸可能是有效的。一直以来，作为浓缩核酸的方法，使用苯酚/氯仿/乙醇的方法；使用色谱柱、过滤器等以吸收核酸的方法；使用磁性二氧化硅微珠等方法是已知的。例如，专利文献I公开了使用具体有能够吸附核酸的多孔载体浓缩核酸的方法。在非专利文献I中描述了通过毛细管电泳浓缩核酸的方法。专利文献1:日本专利申请公开第2005-080555号。 非公开专利文献 1:“0n_line sample preconcentration in capillaryelectrophoresis-Fundamentals and applications.，，Journal of Chromatography A,2008 年，第 1184 卷，页码:504-541 ο
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题。过去使用苯酚/氯仿/乙醇的方法必须使用有害的有机溶剂，这对离心等带来麻烦。使用色谱柱、过滤器等以吸附核酸的方法会产生色谱柱、过滤器等容易造成阻塞的问题，并且就操作简便性而言也存在问题。因此，本专利技术公开的主要目的是提供对使核酸电泳的方法，该方法通过简单地操作在短时间内高效地浓缩和纯化核酸。解决问题的方式为了解决上述所描述的问题，本公开提供了使核酸电泳的方法，该方法包括使插入了具有阴离子官能团的嵌入剂(intercalator)的核酸电泳。在使核酸电泳方法的该步骤中，期望嵌入剂的酸解离常数要大于O且小于等于3。进一步，在使核酸电泳的此方法中，期望官能团是磺酸基。再进一步，在使核酸电泳的此方法中，期望包括以下步骤:在填充了缓冲液的槽(channel)的两端施加电压使得在所述槽中预定位置引入的所述核酸进行电泳；以及阻挡所述核酸移向正极端。这里使用的嵌入剂插入核酸主要是指嵌入剂插入了双链核酸的互补碱基对之间。进一步，在公开中，术语“双链核酸”包括最初作为单链构成并且通过自我杂交而部分变成双链的核酸。再进一步，缓冲液的pH值小于等于5是可取的。再进一步，在本公开中提供了浓缩和纯化核酸的方法，这方法包括使已插入了具有阴离子官能团的嵌入剂的核酸电泳。再进一步，本公开提供了用于核酸电泳的盒，该盒包括:槽，被形成为能够引入液体；用于阻挡物质的阻挡部，布置在所述槽的预定位置；电极，布置在所述槽的两端；能够插入核酸的嵌入剂，具有阴离子官能团；以及缓冲液；所述嵌入剂和所述缓冲液被容纳在所述阻挡部与负极端之间。而且，本公开提供了制造盒的方法，该方法包括:使被引入基板上形成的槽中的单体溶液通过光聚合而凝胶化为预定形状，从而形成高分子凝胶；以及将能够插入核酸的具有阴离子官能团的嵌入剂装入所述槽中。为了解决上述所描述的问题，本公开提供了使核酸电泳的方法，该方法包括:将含有核酸的样品、具有与所述样品中包含的物质含有的羧基发生脱水缩合反应的官能团的化合物、以及所述脱水缩合反应的缩合剂混合；以及使所述核酸电泳。 在使核酸电泳方法的这些步骤中，所期望的官能团是氨基。进一步，在使核酸电泳的此方法中，所期望的化合物是乙醇胺和乙二胺。再进一步，在使核酸电泳方法中，所期望的是缩合剂包括选自1-乙基-3- (3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、4- (4，6- 二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐、二环己基碳二亚胺和二异丙基碳二亚胺中的至少一种。再进一步，在使核酸电泳的此方法中，所期望的是该化合物至少具有第一阳离子官能团和第二阳离子官能团，第一阳离子官能团与羧基发生脱水缩合反应，第二阳离子官能团在电泳过程中以离子状态存在。再进一步，在使核酸电泳的此方法中，所期望的是在填充了缓冲液的槽的两端施加电压使得在所述槽中预定位置引入的所述核酸进行电泳；以及阻挡所述核酸移向正极端。所期望的是缓冲液的PH值小于等于8。再进一步，在使核酸电泳的此方法中，所期望的是样品包括至少以下一种样品:包含咽喉拭子、鼻腔拭子、阴道拭子、血液、血浆、血清、组织、组织碎片、痰、脊髓液、尿、汗和粪便中的至少一种的源自活体的样品；或包含细胞培养液体、细菌培养液、食品中的液体和土壤中的至少一种的样品。再进一步，本公开提供了浓缩和纯化核酸的方法，该方法包括:将含有核酸的样品、具有与所述样品中包含的物质含有的羧基发生脱水缩合反应的官能团的化合物、以及所述脱水缩合反应的缩合剂混合；以及使所述核酸电泳。再进一步，本公开提供了用于核酸电泳的盒，该盒包括:槽，被形成为能够引入液体；高分子凝胶，被布置在槽的预定位置；电极，布置在所述槽的两端；具有与羧基发生脱水缩合反应的官能团的化合物；所述脱水缩合反应的缩合剂；以及缓冲液；所述化合物、所述缩合剂和所述缓冲液被容纳在槽中。而且，本公开提供了制造用于浓缩和纯化核酸的芯片的方法，该方法使被引入基板上形成的槽中的单体溶液通过光聚合而凝胶化为预定形状，从而形成高分子凝胶；以及将具有与羧基发生脱水缩合反应的官能团的化合物、所述脱水缩合反应的缩合剂、以及缓冲液装入所述槽中。专利技术效果 根据本公开，提供了使核酸电泳的方法，通过简单的操作能在短时间里高效地浓缩和回收核酸。【专利附图】【附图说明】图1示出了根据本公开的实施方式的用于核酸电泳的盒的构成以及使用该盒的使核酸电泳的方法的步骤的示意图。图2示出了用于说明根据本公开的第一实施方式的酸解离常数的pH-电荷曲线。图3示出了从电泳开始随着时间的过去凝胶界面的荧光强度变化的图(实施例1:缓冲液的PH值为2.2)。图4示出了从电泳开始随着时间的过去凝胶界面的荧光强度变化的图(实施例2:缓冲液的PH值为4.0)。图5示出了蛋白质 (BSA)进行电泳时的状态的图(实施例3)。图6示出本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：中村友彦，
申请(专利权)人：索尼公司，
类型：
国别省市：
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