辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法，将待测样品用体积比为1:1的乙酸乙酯-环己烷溶解，超声提取、定容、过膜后得到待净化液；待净化液用GPC净化后得到待测液；待测液进行HPLC-荧光检测，检测参数为：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm，柱温30℃～35℃；激发波长548～552nm，发射波长578～582nm；流动相A相0.1%～1.5%体积百分数的酸的水溶液，B相0.1%～1.5%体积百分数的酸的乙腈溶液，流速1.0mL/min；梯度洗脱程序0～20min，B相的体积百分数由40%至90%，20～26min，B相的体积百分数由90%至0%；酸的种类为甲酸或乙酸。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法，将待测样品用体积比为1:1的乙酸乙酯-环己烷溶解，超声提取、定容、过膜后得到待净化液；待净化液用GPC净化后得到待测液；待测液进行HPLC-荧光检测，检测参数为：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm，柱温30℃～35℃；激发波长548～552nm，发射波长578～582nm；流动相A相0.1%～1.5%体积百分数的酸的水溶液，B相0.1%～1.5%体积百分数的酸的乙腈溶液，流速1.0mL/min；梯度洗脱程序0～20min，B相的体积百分数由40%至90%，20～26min，B相的体积百分数由90%至0%；酸的种类为甲酸或乙酸。【专利说明】辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法
本专利技术涉及分析化学
，尤其涉及一种辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法。
技术介绍
罗丹明B又名罗丹明610、玫瑰红B、蕊香红B、若丹明B、玫瑰精B等，英文名=Rhodamine B，是一种偶氮类碱性人工合成工业染料，分子式=C28H31C1N2O3,分子量:479.0175，CAS号为81_88_9，结构式如式(I)所示。性状为绿色结晶或红紫色粉末，易溶于水、乙醇，成玫瑰红色溶液，鲜艳美观，稀释时有荧光，微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液。常用于实验室中细胞荧光染色剂、工业染料。式(I)。罗丹明B2008年被国家列为第一批“食品中可能添加的非食用物质名单”之一，国际食品研究署(IARC)化学品致癌风险评价表明:摄取、吸入以及皮肤接触该物质均会造成急性和慢性的中毒危害。同时，有动物实验表明，该物质吸入时由致癌作用，可引起诱变或致畸。但由于罗丹明B具有持久鲜艳的颜色特性，易于在辣椒制品上染色且不易褪色，成本低，因此一些不法商贩用罗丹明染料对这些食品进行染色、以次充好、以假冒真，欺骗消费者，危害消费者的身体健康。2011年重庆市查出上万斤含罗丹明B的毒花椒，市场上也不断查出多种食品中非法添加罗丹明B。现有的食品中罗丹明B的检测方法主要有SN/T2430-2010国标的方法，但该方法采用的仪器为超高压液相色谱仪，价格昂贵，不适合普通企业使用。如果采用普通液相色谱仪，将会受到柱压等参数的限制，并且在检测辣椒红等样品时容易出现分离度不高、分离效果差的现象。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法，本专利技术提供的辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法降低了色谱仪对于自身参数的要求，特别是对于柱压的限制，分离度高、检测精度高、定量限低。一种辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法，包括以下步骤:A)将待测样品用体积比为1:1的乙酸乙酯-环己烷溶解，超声提取、定容、过膜后得到待净化液；B )将待净化液用GPC净化后得到待测液；C)将待测液进行HPLC-荧光检测，检测参数如下:色谱柱为C18 色谱柱，4.6_Χ250_，5μπι，柱温为 30°C?35°C，激发波长548?552nm,发射波长578?582nm ；流动相A相为0.1%?1.5%体积百分数的酸的水溶液，流动相B相为0.1%?1.5%体积百分数的酸的乙腈溶液，流动相流速为1.0mL/min ;梯度洗脱程序为Omin?20min, B相的体积百分数由40%至90%, 20min?26min, B相的体积百分数由90%至0% ；所述酸的种类为甲酸或乙酸。优选的，所述待测样品的质量和乙酸乙酯-环己烷的体积比为Ig?2g:25mL。优选的，所述柱温为35 °C。优选的，所述激发波长550nm,发射波长580nm。优选的，所述酸的种类为甲酸。优选的，所述酸的体积百分数为0.1%。优选的，所述GPC净化具体为:将待净化液至于GPC样品管中，设置GPC净化参数进行净化，收集洗脱液，蒸发至干，残渣用甲醇溶解，得到待测液。优选的，所述GPC净化参数具体为:凝胶柱为200mmX20mm ;色谱柱填料粒度为74?148 μ m ;流动相为体积比为1:1的乙酸乙酯-环己烷；流速为5mL/min ;收集时间为7min ?19min0优选的，所述步骤C中罗丹明B的定量采用标准曲线法。优选的，所述步骤A中超声提取的提取时间为5min?15min。与现有技术相比，本专利技术提供了一种辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法，包括以下步骤:将待测样品用体积比为1:1的乙酸乙酯-环己烷溶解，超声提取、定容、过膜后得到待净化液；将待净化液用GPC净化后得到待测液；将待测液进行HPLC-荧光检测，检测参数如下:色谱柱为C18色谱柱，4.6mmX250mm，5ym，柱温为30°C?35°C ;激发波长548?552nm，发射波长578?582nm ;流动相A相为0.1%?1.5%体积百分数的酸的水溶液，流动相B相为0.1%?1.5%体积百分数的酸的乙腈溶液，流动相流速为1.0mL/min ;梯度洗脱程序为Omin?20min, B相的体积百分数由40%至90%, 20min?26min, B相的体积百分数由90%至0% ;所述酸的种类为甲酸或乙酸。本专利技术提供的罗丹明B的检测方法采用常规的C18，4.6ym大内径的柱子进行检测，不仅使用方便，适用性强，同时降低了对于液相色谱仪仪器自身技术参数的要求，特别是柱压的限制；采用本专利技术的流动相以及梯度洗脱程序更有利于目标峰与干扰峰的分离，提高了检测精度和分离度。并且本专利技术提供的辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法定量限低，仅为1.Ομ g/kg。实验结果表明，本专利技术提供的辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法精密度高、重现性好、稳定性高、准确度好。【专利附图】【附图说明】图1为本专利技术实施例1提供的0.3 μ g/kg的罗丹明B标准品的高效液相色谱图；图2为本专利技术实施例1提供的试剂空白高效液相色谱图；图3为本专利技术实施例7提供的不含罗丹明B的样品的高效液相色谱图；图4为本专利技术实施例7提供的添加罗丹明B标准品的辣椒红样品的高效液相色谱图；图5为本专利技术实施例8提供的辣椒红样品中罗丹明B的高效液相色谱图；图6是本专利技术比较例I提供的辣椒红样品中罗丹明B的高效液相色谱图。【具体实施方式】一种辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法，包括以下步骤:A)将待测样品用体积比为1:1的乙酸乙酯-环己烷溶解，超声提取、定容、过膜后得到待净化液；B)将待净化液用GPC净化后得到待测液；C)将待测液进行HPLC-荧光检测，检测参数如下:色谱柱为C18 色谱柱，4.6_Χ250_，5μπι，柱温为 30°C?35°C，激发波长548?552nm,发射波长578?582nm ；流动相A相为0.1%?1.5%体积百分数的酸的水溶液，流动相B相为0.1%?1.5%体积百分数的酸的乙腈溶液，流动相流速为1.0mL/min ;梯度洗脱程序为Omin?20min, B相的体积百分数由40%至90%, 20min?26min, B相的体积百分数由90%至0% ；所述酸的种类为甲酸或乙酸。本专利技术首先将待测样品用体积比为1:1的乙酸乙酯-环己烷溶解，超声提取、定容、过膜后得到待净化液。具体为将待测样品置于容量瓶中，用体积比为1:1的乙酸乙酯-环己烷溶解，超声提取、定容、过膜后得到待净化液。所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种辣椒原料及其制品中罗丹明B的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A）将待测样品用体积比为1:1的乙酸乙酯?环己烷溶解，超声提取、定容、过膜后得到待净化液；B）将待净化液用GPC净化后得到待测液；C）将待测液进行HPLC?荧光检测，检测参数如下：色谱柱为C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm，柱温为30℃～35℃，激发波长548～552nm，发射波长578～582nm；流动相A相为0.1%～1.5%体积百分数的酸的水溶液，流动相B相为0.1%～1.5%体积百分数的酸的乙腈溶液，流动相流速为1.0mL/min；梯度洗脱程序为0min～20min，B相的体积百分数由40%至90%，20min～26min，B相的体积百分数由90%至0%；所述酸的种类为甲酸或乙酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：焦军伟，文雁君，李林正，李轩，黄振宇，马国辉，
申请(专利权)人：河南中大生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：