MIR-124的合成模拟物制造技术

实施方案关注牵涉miR-124模拟物的方法和组合物。在一些实施方案中，提供了具有经修饰的核苷酸的双链RNA分子，其具有含miR-124序列的活性链和互补的过客链。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】实施方案关注牵涉miR-124模拟物的方法和组合物。在一些实施方案中，提供了具有经修饰的核苷酸的双链RNA分子，其具有含miR-124序列的活性链和互补的过客链。【专利说明】MIR-124的合成模拟物专利技术背景本申请要求2011年2月3日提交的美国临时专利申请61/439，272的优先权，其在此通过提交完整收录。1.专利
本专利技术涉及分子生物学和医学领域。更具体而言，提供了用于治疗疾病和/或状况的牵涉RNA分子的方法和组合物，所述RNA分子至少具有miR-124的功能特性，和在一些实施方案中增强的与miR-124相关的特征。I1.背景在2001年，几个小组使用克隆方法从秀丽隐杆线虫(C.elegans)、果蝇(Drosophila)、和人分离并鉴定一大类“微小 RNA，，(miRNA) (Lau 等，2001; Lee 和Ambros, 2001;Lagos-Quintana 等，2003)。发表的人成熟微小RNA序列(其记载于数据库miRBasel5.0 (Griffths-Jones等，2006))大小范围为长度16-27个核苷酸，并且源自较长的前体。前体形成的结构在自身互补区中自身折回，并且受到核酸酶Dicer(在动物中)或DCLl(在植物中)加工以生成短的双链成熟miRNA。成熟的miRNA链之一掺入蛋白质和miRNA的复合物中，所述复合物称作RNA诱导的沉默复合物(RISC)。miRNA引导RISC复合物靶向mRNA，然后，该mRNA受到切割或翻译沉默，这取决于miRNA 与其靶mRNA的序列互补性程度。目前，认为完全或几乎完全互补性导致mRNA降解，如在植物中最常观察到的。比较而言，不完全碱基配对(如主要在动物中找到的)导致翻译沉默。然而，目前的数据提示额外的复杂性(Bagga等，2005;Lim等，2005)，而且miRNA实现的基因沉默的机制仍然在紧张的研究下。研究已经显示了众多miRNA的表达水平变化与各种癌症有关(综述见Calin和Croce, 2006;Esquela-Kerscher 和 Slack, 2006 ;ffiemer, 2007)。miRNA还已经牵涉调节细胞生长及细胞和组织分化，即与癌症形成有关的细胞过程。多种miRNA的活性已经得到鉴定和分析。虽然先前在美国专利申请公开文本20080050744 (其在此通过提及收录)中已经鉴定有效的miRNA模拟物，但是需要大大改善天然存在的miRNA的一种或多种特性的别的miRNA模拟物，特别在这些分子从实验室移向临床时。专利技术概述治疗性微小RNA应当是稳定的、有活性的、且与正确的mRNA靶物特异性杂交。实施方案关注miR-124模拟物，其具有维持的和/或增强的对核酸酶消化的抗性、与正确的靶mRNA的杂交能力、和/或功能性。实施方案关注含有成熟miR-124序列的不同RNA分子。RNA分子可以是双链的和/或平端的，这意味着该分子整个是双链的和/或在两个末端是平端的。此外，实施方案关注对所述RNA分子的化学修饰以产生具有改善的或增强的特性的miR-124模拟物。双链RNA分子的活性链含有成熟miR-124序列。在某些实施方案中，双链RNA分子的一条链的序列由成熟miR-124序列组成。在一些实施方案中，提供了双链的RNA分子，这意味着该分子由两条可以彼此分开的多核苷酸或链组成。双链分子不包含发夹分子，其是一条链或多核苷酸。在一些实施方案中，RNA分子在一个或两个末端是平端的。在双链RNA分子中，一条或两条链的长度可以是18、19、20、21、22、23、24、或25个核苷酸，或者其中可导出的任何范围。在某些实施方案中，双链平端分子的长度是20、21、或22个碱基对(bp)。在一些实施方案中涵盖的是，双链RNA分子含有两条彼此完全互补的链，这生成必然平端的分子。在某些实施方案中，RNA分子具有包含成熟人miR-124序列(5，-UAAGGCACGCGGUGAAUGCC-3，) (SEQ ID NO:1) (20 聚体)的活性链。在某些实施方案中，成熟miR-124序列具有SEQ ID NO:1及5’端额外的U和3’端额外的A的序列(5，-UUAAGGCACGCGGUGAAUGCCA-3’)(SEQ ID NO: 2) (22 聚体)。如此，在某些实施方案中，RNA分子具有的活性链具有SEQ ID NO: 2的核苷酸2到21的序列。在别的实施方案中，RNA分子具有的活性链具有SEQ ID NO: 2的核苷酸2到21的序列，但是其长度是21或22个核苷酸，这是因为I)在5’端有额外的选自下组的核苷酸4、(:、6、和1和/或2)在3’端有额外的选自下组的核苷酸:A、C、G、U。如此，在前一句中讨论的实施方案中明确涵盖有具有SEQ ID N0:2的序列的活性链的RNA分子。在一些实施方案中，活性链在一个或多个内部位置处具有经修饰的核苷酸。按照惯例，本文中讨论的序列以5’至3’列出，除非另有规定。此外，含有SEQ IDNO序列的链具有从5’至3’的所述序列，除非另有规定。术语“内部位置”指在链中既不是第一个也不是最后一个位置的位置。术语“经修饰的核苷酸”意指与未修饰的核苷酸相比具有别的模块(moiety)或替换模块的核苷酸或核苷(若指5’位置处的核碱基的话)。在含有一个或多个经修饰的核苷酸的活性链的情况下，涵盖的是，有不少于，或者有不超过2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15个经修饰的核苷酸，或其中可导出的任何范围。明确涵盖的是，在一些实施方案中，活性链中少于每个的核苷酸是经修饰的，并且在某些实施方案中，活性链中少于半数的核苷酸是经修饰的。此外，在一些实施方案中，明确涵盖的是，具有多个经修饰的核苷酸的活性链没有使该活性链中的每个或每隔一个核苷酸被修饰。本文中公开的miRNA模拟物是序列和/或位置特异性的。在一些实施方案中，活性链包含至少两个经修饰的核苷酸。在别的实施方案中，活性链在任一末端的前两个位置中没有经修饰的核苷酸。在其它实施方案中，活性链在距5’端的前四个位置中不包含经修饰的核苷酸。在一些实施方案中，活性链可以包含SEQ ID NO:1的成熟miR-124序列(5，-UAAGGCACGCGGUGAAUGCC-3’ )或者包含 SEQ ID NO: 2 (5，-UUAAGGCACGCGGUGAAUGCCA-3’)的核苷酸2到21的序列。SEQ ID N0:2具有SEQ ID NO:1的成熟miR-124序列以及5’端额外的U和3’额外的A。在这些中的任一实施方案中，活性链包含相同序列。在别的实施方案中，活性链具有包含SEQ ID N0:2或由SEQ ID N0:2组成的序列。在一些实施方案中，活性链可以具有经修饰的核苷酸，其中相对于SEQ ID NO:提及那些经修饰的核苷酸的身份。在具体的实施方案中，活性链中的经修饰的核苷酸是相对于SEQ ID NO:2位于位置 5 (G)、6 (G)、7 (C)、8 (A)、11 (C)、12 (G)、17 (A)、18 (U)、19 (G)、和 / 或 20 (C)的核苷酸。这意味着它们是与所列SEQ ID NO中所列位置中的那些核苷酸对应本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：K凯尔纳，D布朗，
申请(专利权)人：米尔纳医疗股份有限公司，
类型：
国别省市：