本发明专利技术涉及一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，其特征在于，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈和0.1％磷酸水溶液组成的混合溶剂，乙腈和0.1％磷酸水溶液体积比为10～15∶85～90，流速为0.5～1.5mg/ml，检测波长为200～210nm。本发明专利技术建立的方法供试品溶液制备时前处理简单，检测时间短、重复性好、准确度高。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，其特征在于，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈和0.1％磷酸水溶液组成的混合溶剂，乙腈和0.1％磷酸水溶液体积比为10～15∶85～90，流速为0.5～1.5mg/ml，检测波长为200～210nm。本专利技术建立的方法供试品溶液制备时前处理简单，检测时间短、重复性好、准确度高。【专利说明】一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相(HPLC)定量测定方法
本专利技术属于药物质量控制
，特别涉及一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法。
技术介绍
吐根为菌草科植物Cephaelis ipecacuanha (Brot.) A.Rich.或 Cephaelisacuminate Karsten的干燥根莖,原产于巴西,在其他热带气候地区也有栽培；具有止咳化痰、催吐、抗阿米巴病等功效；有研究表明其主要药理活性成分为生物碱类化学成分。目前吐根药材、吐根粉和吐根糖浆的质量标准在美国药典、日本药典和欧洲药典均有收载。各国药典中多以盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的含量做为吐根药材及其制剂的主要质量评价指标，其中在美国药典及欧洲药典中主要是采用示差折光光度法检测盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的含量、采用酸碱滴定的方法测定总生物碱的含量；日本药典(JP16)则采用了高效液相色谱法检测盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的含量。也有一些文献报道采用HPLC色谱法、实时直接分析-串联质谱(DART-MS/MS)检测吐根中生物碱，但是这些方法均存在一些不足之处；如美国药典和欧洲药典所述方法操作繁琐，准确度和重复性差JP药典和一些文献报道的HPLC色谱法采用284nm检测波长，导致方法的灵敏度降低，同时检测耗时较长，前处理繁琐；中国专利201210131906.8中供试品溶液的制备需要用到中性氧化铝柱，操作繁琐，重复性差；实时直接分析-串联质谱(DART-MS/MS)法设备昂贵，不利用推广应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种吐根药材及制剂中盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，所述方法具有样品前处理简单，样品检测时间短、重复性好、准确度高等优点。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案:一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，测定方法包括以下步骤:①对照品溶液的制备取盐酸吐根碱适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每Iml含盐酸吐根碱50 μ g的溶液，即得盐酸吐根碱对照品溶液；取盐酸吐根酚碱适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每Iml含盐酸吐根碱50 μ g的溶液，即得盐酸吐根酚碱对照品溶液；②供试品溶液的制备称取吐根粉末约0.25g，精密称定，置于IOOml容量瓶中，加60%甲醇35ml及盐酸I滴，密塞，静置浸润30分钟后，超声处理50min，放冷后，加甲醇定容至刻度；或精密量取吐根流浸膏0.25ml或吐根酊5ml置棕色容量瓶中，加60 %甲醇水溶液溶解并定容至IOOml ；上述定容后溶液离心后取上清即得供试品溶液； ③色谱条件与系统适用性试验色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相:乙腈和0.1 %磷酸水溶液组成的混合溶剂，乙腈和0.1 %磷酸水溶液体积比为10?15: 85?90 ;流速:0.5?1.5mg/ml ;检测波长:200?210nm ;理论塔板数按盐酸吐根碱及盐酸吐根酚碱计算均应不低于3000 ；④测定法分别取上述对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为5?20μ I。本专利技术一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，所述的色谱柱优选C18色谱柱，可以选择岛津Shim-pack VP-ODS C18 (150mmX 4.6mm,5 μ m) >KromasiI C18、Agilent ZORBEX SB-C18等反相色谱柱等，其中优选Agilent ZORBEXSB-C18反相色谱柱。所述Agilent ZORBEX SB-C18反相色谱柱的规格为250_X 4.6_，5 μ m，其中250mm是色谱柱的长度,4.6mm是色谱柱的内径,5 μ m是内部填充颗粒的直径,所述AgilentZORBEX SB-C18反相色谱柱稳定性。所述的流动相为乙腈和0.1 %磷酸水溶液组成的混合溶剂，乙腈和0.1%磷酸水溶液体积比为10?15: 85?90 ;其中优选为12?14: 86?88 ;进一步优选为12: 88。本方法采用紫外检测器或二极管阵列检测器，检测波长为200?210nm，在此波长下，盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱有最大吸收值，检测灵敏度高，但此波长条件下为末端吸收，流动相应尽量避免用甲醇或其他对该波长敏感的溶剂，乙腈的截止波长(190nm)较甲醇(205nm)的短，更适合于利用末端吸收进行样品的检测，因此本专利技术采用乙腈为流动相，避免了溶剂对所要检测成分的干扰。色谱柱柱温的高低对保留时间有较大的影响。柱温太高，出峰快，保留时间短，有些组分可能分离不够，无法完全分离产品。为了有效地分离产品，本专利技术所述色谱柱柱温为25?50°C，其中优选为40°C。所述的进样量为5?20 μ I,优选为10 μ I。所述流动相的流速为0.5?1.5mg/ml,其中优选0.8?1.2mg/ml,进一步优选为1.0mg/ml ο与现有技术相比，本专利技术具有如下优点:(I)本专利技术吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，供试品溶液制备方法简单，制备过程无需使用色谱柱，节约了成本和操作时间。(2)本专利技术大大缩短了盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的保留时间，缩短了检测时间。(3)本专利技术选用乙腈和0.1 %磷酸水溶液为流动相，避免了甲醇在205nm处对检测存在的干扰，提高了检测的准确度。【专利附图】【附图说明】下面结合附图对本专利技术的【具体实施方式】作进一步的描述。图1.盐酸吐根酚碱对照品的HPLC色谱图；图2.盐酸吐根碱对照品的HPLC色谱图；图3.吐根药材中所含盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的HPLC色谱图；图4.吐根流浸膏中所含盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的HPLC色谱图；图5.吐根酊剂中所含盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱的HPLC色谱图；【具体实施方式】为便于理解本专利技术，列举实施例如下，所述实施例仅是帮助理解本专利技术，不应视为对本专利技术的具体限制。实施例1本测定方法的方法学考察:(I)盐酸吐根碱和盐酸吐根酚碱对照品溶液的制备取盐酸吐根碱适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每Iml含盐酸吐根碱50 μ g的溶液，即得盐酸吐根碱对照品溶液。取盐酸吐根酚碱适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每Iml含盐酸吐根碱50 μ g的溶液，即得盐酸吐根酚碱对照品溶液。(2)供试品溶液的制备称取I号吐根粉末约0.25g，精密称定，置于IOOml容量瓶中，加60%甲醇35ml及盐酸I滴，密塞，静置浸润30分钟后，超声处理50min，放冷后，加甲醇定容至刻度，上述定容后溶液离心后取上清即得供试品溶液。(3)色谱条件与系统适用性色谱柱:以十八烷基硅烷本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种吐根药材及制剂中生物碱的高效液相色谱法(HPLC)定量测定方法，其特征在于定量测定方法包括以下步骤：①对照品溶液的制备取盐酸吐根碱适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每1ml含盐酸吐根碱50μg的溶液，即得盐酸吐根碱对照品溶液；取盐酸吐根酚碱适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成每1ml含盐酸吐根碱50μg的溶液，即得盐酸吐根酚碱对照品溶液；②供试品溶液的制备称取吐根粉末约0.25g，精密称定，置于100ml容量瓶中，加60％甲醇35ml及盐酸1滴，密塞，静置浸润30分钟后，超声处理50min，放冷后，加甲醇定容至刻度；或精密量取吐根流浸膏0.25ml或吐根酊5ml置棕色容量瓶中，加60％甲醇水溶液溶解并定容至100ml；上述定容后溶液离心后取上清即得供试品溶液；③色谱条件与系统适用性试验色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈和0.1％磷酸水溶液组成的混合溶剂，乙腈和0.1％磷酸水溶液体积比为10～15∶85～90；流速：0.5～1.5mg/ml；检测波长：200～210nm；理论塔板数按盐酸吐根碱及盐酸吐根酚碱计算均应不低于3000；④测定法分别取上述对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为5～20μl。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：贾放，邱思婕，张志生，孙晔，杜丽丽，张晓凤，郑芳芳，
申请(专利权)人：广东先强药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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