IL-21配体制造技术

本发明专利技术涉及与IL-21分子表面上的不连续表位结合的IL-21配体及其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及与IL-21分子表面上的不连续表位结合的IL-21配体及其用途。【专利说明】IL-21配体本专利技术涉及存在于IL-21上的不连续表位和与该表位结合的配体。IL-21是对先天性免疫应答和获得性免疫应答两者都发挥多效作用的I型细胞因子。它主要由活化⑶4+ T细胞、滤泡T细胞和天然杀伤细胞产生。另外，最新证据表明Thl7 细胞可产生大量的IL-21。IL-21提高⑶8+ T细胞的细胞毒性，在抗原存在下可促进⑶8+细胞增殖。IL-21 受IL-6 (—种已知促进Thl7细胞发育的细胞因子)的诱导。IL-21以促进其自身产生和支持T辅助细胞分化成为Thl7细胞的自分泌方式作用于T辅助细胞。与此一致，IL-21缺陷型小鼠显示Thl7反应受损。IL-21还作用于B细胞，并增加抗体产生；然而，IL-21不是功能性抗体产生所必需的，而IL-21Ra阴性小鼠显示增殖降低以及CD8+细胞的细胞毒性受损两者。最新的系列研究表明，由CD4+细胞产生的IL-21对CD8+ T细胞控制病毒感染的能力至关重要。IL-21提高免疫力的能力在IL-21的治疗应用中激起了极大关注。最近在针对转移性黑素瘤类型和肾癌的临床试验中对其进行了评价。动物研究证实IL-21和肿瘤特异性抗体之间的协同效应，这可能表明IL-21作为抗肿瘤抗体的增效剂的未来治疗应用。此夕卜，IL-21在自身免疫病中起复杂作用。IL-21减量调节IgE产生的能力表明，它可治疗性地用于对抗哮喘和变态反应。动物研究结果支持这个观点。另一方面，IL-21促进Thl7发育的能力使之成为促炎细胞因子，而且目前针对在治疗各种不同的自身免疫病中的可能应用，对多种不同的IL-21和IL-21Ra抑制剂进行了研究。IL-21具有4个螺旋束结构，以I类细胞因子典型的上-上-下-下的拓扑结构排列。IL-21通过由专用链(private chain) IL_21Ra和共用Y C链组成的异二聚体受体复合物发出信号，后者由IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15所共用。IL_21Ra链以高亲和力结合IL-21，并提供大部分结合能。然而，信号传导需要与Y C链相互作用，而且结合IL-21R a 但不能与Y C适当相互作用的IL-21突变体是IL-21信号传导的有效拮抗剂。IL-2和IL-15 两者分别利用第三受体链IL-2Ra和IL-15Ra。这些受体对于信号传导是消耗性的，但是在发生YC募集后，用作俘获IL-2或IL-15并将其提供给IL-2R3的受体复合物的高亲和力组分。对IL-21有特异性的单克隆抗体是本领域已知的，例如W02007111714和 W02010055366 (Zymo-Genetics, Inc.)的单克隆抗体。具体地说，W02010055366 描述了以克隆号362.78.1.44命名的抗IL-21抗体，其对其关联抗原具有高亲和力并具有其它所需性质，对人和食蟹猴(cynomolgus monkey) IL.-21显示特异性。在W02010055366 中，克隆362.78.1.44以与人IL-21上的不连续表位结合为特征，所述表位包含来自跨越 W02010055366 中 SEQ ID N0.2 所示 IL-21 序列的残基 Ile45_Leu56 和 Glul29_Leul44 的两个肽的氨基酸。专利技术概述我们在本文定义了被较高亲和力配体特征性结合的IL-21的新的表位。配体与该表位的结合使人IL-21 (hIL-21)的螺旋C稳定。这导致IL-21的整体稳定，这被认为促进高亲和力结合和/或IL-21诱导作用的有效抑制。本专利技术的表位被天然IL-21受体IL-21Ra (SEQ ID N0.14)结合。我们鉴定出 IL-21和IL-21Ra之间负责两个分子相互作用的结合界面，因此设计出通过破坏IL-21与其关联受体间的相互作用而抑制IL-21活性的抗体靶标。我们还描述了与本专利技术的表位特异性结合的配体，例如抗体，以及制备和使用这类配体的方法。专利技术详述除非另有说明，否则本文所用的所有技术和科学术语具有本专利技术所属领域普通技术人员通常理解的相同含义。除非另有说明，否则本专利技术的实践采用本领域技术人员已知的化学、生物化学、生物物理学、分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学和药理学的常规方法。附图简述图1:本文提及的序列。图2:通过质谱法监测的HX鉴定出参与NNC 0114-0005和NNC 0114-0019结合的 hIL-21的区域。(A)对应于位于螺旋A的肽片段29-44即MQGQDRHMIRMRQLID的质/荷谱 (Mass/charge spectra) (m/z = 676.68, z= 3)。(B)对应于位于螺旋 C 的肽片段 93-98 即ERIINV的质/荷谱(m/z = 743.47, z= I)。对于所有波谱,上组图显示非氣化对照,第二组图显示与D2O交换100秒钟后的肽，第三组图和下组图显示分别在NNC 0114-0005或 NNC 0114-0019存在下交换100秒钟后的肽。图3:在NNC 0114-0005或NNC 0114-0019不存在或存在时hIL_21的代表性肽的氢交换时间曲线。在不存在( )或存在NNC 0114-0005 (X)或NNC 0114-0019 (A)时， hIL-21肽的氘掺入(Da)以对数标度针对时间作图。肽Q30-M39表示其中NNC 0114-0005和 NNC 0114-0019两者结合的hIL-21螺旋A的区域。肽E93-V98表示其中仅NNC 0114-0005 而非NNC 0114-0019结合的hIL-21螺旋C的区域。肽R40-N51和F136-S162表示其中NNC 0114-0005 和 NNC 0114-0019 无一结合的 hIL-21 的区域。然而，当 NNC 0114-0005 而非 NNC 0114-0019与hIL-21结合时，观察到hIL-21结构显著稳定，如在300秒钟以上长的时间点上氘交换显著降低所显示的。图4:在NNC 0114-0005存在和不存在时hIL_21的HX分析的肽的序列覆盖(Sequence coverage)。在HX分析的肽(表示为水平棒)上方显示原始序列。在 NNC 0114-0005存在和不存在两种情况下显示类似交换模式的肽以白色显示，而在NNC 0114-0005结合时显示氘掺入减少的肽着黑色。用框标出的序列区界定表位。图5:在NNC 0114-0019存在和不存在时hIL-21的HX分析的肽的序列覆盖。在 HX分析的肽(表示为水平棒)上方显示原始序列。在NNC 0114-0019存在和不存在两种情况下显示类似交换模式的肽以白色显示，而在NNC 0114-0019结合时显示氘掺入减少的肽着黑色。用框标出的序列区界定表位。图 6:在 0114-0005、-0038、-0039、-0040、-0041 或-0042 不存在或存在时 hIL-21 的代表性肽的氢交换时间曲线。在不存在( ， )或存在-0005 (X) ,-0038 ( A ) >-0039 (□ )、-0040 (+)、-0041 (〇)或-0042 (-)时，将h本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：LA斯文斯森，MD安德森，J布雷恩霍特，C维伯格，BO克罗格，D伦德斯加尔德，HB拉斯穆森，
申请(专利权)人：诺沃—诺迪斯克有限公司，
类型：
国别省市：