血清制备制造技术

本发明专利技术涉及含有凝血酶原激活剂的凝结组合物生产用于病理学或其他生物学测定的用途和含有这些凝结组合物的容器以及相关的使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】血清制备本专利技术要求2010年9月20日提交的名称为“血清制备”的澳大利亚临时申请2010904233的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
本专利技术通常涉及使用前凝血剂生产用于病理学和其他生物学测定的高品质血清样品。专利技术背景血液收集装置，包括管，被用于收集血液以生产血清或血浆，其反过来被用于生物化学或其他病理学测定。血清通过允许血液样品凝结并且之后将样品离心以将包括细胞的血液凝块从血清分离。目前通常使用塑料管(代替玻璃)并且需要前凝血剂(常常是微粒化的二氧化硅颗粒)以增强凝结过程。对于生物学测试来说血清通常是比血浆优选的，除非需要紧急结果，在这样情况下血清管凝结时间被认为过长。即便使用现有的前凝血剂，最贵的试管中制造商建议的所需的最小凝结时间对于来自正常患者的血液样品来说是30分钟，而对于来自接受抗凝结治疗剂例如华法林或肝素的患者的样品来说要长得多(通常60分钟或更长)。对于来自紧急情况(急诊科、重症监护、手术室等)的患者样品来说，所述时间过长并且因此可迅速得多地生产的血浆常常是比血清优选的。据称解决这一问题的可选择方案是近来由Becton-Dickinson开发的用于血清生产的血液收集管(特定的BD快速血清管，BDT或BDRST)，其含有计划增加血液样品中血液凝结的速度和程度的凝血酶。血浆通过将血液收集在含有抗凝血剂的管中之后离心来获得，离心可在收集之后立即进行以分离细胞并由此获得用于分析的血浆。肝素锂是这些管中最常用的抗凝血剂。柠檬酸盐、氟化钠/草酸钾和EDTA是用于某些管中以产生用于评估少量其他分析物的血浆的其他抗凝血剂。不完全凝结制备血清样品中的凝结过程消耗血纤蛋白原并且将血小板和其他细胞陷入血纤蛋白的网络中。当离心时，通过收集装置中的血清分离器或通过将血清等分至二级容器将血清从所述凝块分离以避免与细胞接触。这一分离允许样品在延长的时间段保持稳定。这一稳定性在不立即分析样品或需要再次分析或另外的分析时尤其重要。对于某些血清样品，凝结在所推荐的等待时间之后是不完全的。这一不完全凝结的问题在处于抗凝结治疗的患者或从抗凝结的龙头或套管收集的样本中尤其普遍。样本在收集期间被抗凝血剂污染也可能发生。这些血液可能花费比制造商建议的等待时间长得多的时间来凝结，或者事实上可能在标准血清管中永远不会完全凝结(例如来自完全肝素化的心外科手术患者的血液)。如果血清样品在凝结完成之前被离心，那么凝结可在血清中继续，导致凝块、微小凝块或形成能够导致分析者或分析物特定问题的血纤蛋白串。样品制备期间微小凝块和血纤蛋白原串的形成同样可在血浆管中发生，尤其是在低温保存后。血液收集后未能将肝素锂管及时倒置可导致橡皮塞附近小凝块形成。未以及时的方式肝素化的血液的微滴将凝结并且凝块在肝素化时不分解。即使最小的凝块也能够产生临床上显著的误差。因此，对于准确度而言，样品必须通过眼睛或使用自动化检测系统(如果有的话)进行人工检验以确保它们不含有血纤蛋白丝或凝块。如果存在不溶材料的丝或凝块，样品需要二级取样至新容器中并且在测试分析之前再次离心。表现出重复的潜在凝结的样品可能需要被转移至肝素锂管以停止进行中的凝结。这些行为花费另外的时间。而且，血纤蛋白丝或凝块并不总能被检测到(例如它们可能甚至在分析仪取样后发生)并且因而产生的取样误差可导致在不准确的结果上所做的病人护理决定。血浆管中的细胞污染在血浆管中获得的样本，尤其是肝素锂血浆，可被细胞污染。肝素锂凝胶管离心后总是在血浆底部的凝胶顶部存在小的“层状血块黄层”。这一层含有血纤蛋白、细胞和细胞基质。离心期间快速的凝胶运动在血浆中留下一些细胞。如果血浆样品是混合的(例如二级取样或处理期间)，其将因为含有细胞的材料和血纤蛋白的悬浮而变得混浊，这降低了样本完整性。此外，血小板凝集物可形成，其同样可能含有血纤蛋白和/或白细胞。这些凝集物可以大至肉眼可见并且已经由于其典型的白色颜色被命名为“白色颗粒物”，并呈现与上文讨论的不完全凝结相似的问题。样品中细胞的存在可影响分析物浓度。某些分析物(例如葡萄糖)可通过细胞活性来降低而其他的可通过渗漏或者细胞溶解而增加(例如乳酸脱氢酶、钾、磷酸盐)。分析物干扰尽管在血清管和血浆管中测量的分析物的浓度通常没有差异，但也有某些例外。使用肝素的血浆管不适于肝素分析或基于细胞的测定。肝素锂血浆管不适于锂分析。血浆对于另外的测试或再测试来说可能不可靠，归因于细胞的存在和2-8℃的长时间储存时不溶的血纤蛋白形成此外，已经有了一些血清或血浆管产生不准确的分析物水平结果的报道，归因于与所述管中前凝血剂或抗凝剂的相互作用或相反(Ciutietal.，1989；Cowleyetal.，1985；Davidsonetal.，2006；Dimeskietal.，2004；Dimeskietal.，2005；Dimeskietal.，2010；Hartlandetal.，1999；Milesetal.，2004；O’Keaneetal.，2006；Wannaslipetal.，2006)。样品大小期望的是减少测试所需的样品大小，尤其是在危重患者、接受输血的患者和婴儿中，以便减少从患者采集的血液体积。因此能够使用在一个血液收集管中采集的样品进行所有必须的测试是最佳的。为了达到这一目的，已经开发了使用非常小的样品体积(例如2μL)的测试方法以使得通常一个血清或血浆试管被用于至少21个测试，但是取决于每个测试所需要的样品的体积可用于50-60个之间或甚至70-80个测试。然而，当对在血清或血浆管中测量特定分析物的准确度有疑问时，可能必须采用来自患者的血清管和血浆管两者而这么做使得减少从患者采集的血液体积的目标失败了。从使用目前的血清和血浆制备方法而产生的问题显示需要改进以从各种各样的血液样品普遍获得及时、可靠的分析结果。蛇毒凝血酶原激活剂为了迅速凝结它们猎物的血液，许多蛇毒含有凝血酶原激活剂。这些凝血酶原激活剂是将血液中存在的凝血酶原转化为反过来导致凝结的凝血酶的蛋白水解酶。蛇毒凝血酶原激活剂是已知的前凝血剂，它们同时也已知具有类似蛋白水解胰蛋白酶的活性(Schiecketal.，1972；Parker，H.W.和GrandisonA.G.C.，1977；Masci，P.P.，1986；Nicholsonetal.，2006；Lavin和Masci，2009)。据假设凝血酶原激活剂具有前凝血剂和蛋白水解性质两者可能有进化原因因为它们起到杀死和降解猎物两种作用(Masci，P.P.，1986，page143)。例如，蛇静脉酶(ecarin)(从锯鳞蝰(Echiscarinatus)毒液纯化的凝血酶原激活剂)已经显示具有前凝血剂活性以及若干其他蛋白水解活性例如血纤蛋白溶解、明胶分解、caesionlysis和出血(Schiecketal.，1972)，并且从东部拟眼镜蛇(Pseudonajatextilis)的毒液纯化的凝血酶原激活剂(PtPA)对设计用于不同蛋白水解酶的多种生色肽底物是有活性(Masci，P.P.，1986)。可在包含蛋白的血液、血清或血浆样品上进行许多分析物测试，包括将蛋白(例如全蛋白、白蛋白)作为分析物测量的测试；测量血液蛋白的酶活性的测试(例如在对γ-谷氨酰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.20 AU 20109042331.至少部分纯化的蛇毒凝血酶原激活剂在用于检测分析物的血清样品的制备中的用途。2.一种制备用于检测所感兴趣的分析物的血清样品的方法，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗·马希，约翰·德泽西，马丁·拉文，朱莉·菲利普斯，
申请(专利权)人：昆士兰大学，
类型：
国别省市：