一种利用PbS量子点快速检测黄曲霉毒素B1的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用PbS量子点快速检测黄曲霉毒素B1的方法，特点是包括取Pb(NO3)2溶液加入巯基乙酸和Na2S溶液反应制取PbS量子点的步骤；PbS量子点耦合黄曲霉毒素B1单抗制成10μg/mL的QD-Ab溶液；酶标板中加入黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物包被酶标板，同时加入AFB1溶液和QD-Ab溶液，孵育消化后，加入Hg2Cl溶液，用醋酸缓冲液定容后制取待测溶液的步骤；将待测溶液除氧后置入预处理后的玻碳电极进行检测，根据Pb2+的溶出峰电流大小与黄曲霉毒素B1溶液浓度之间的标准曲线关系，计算得到黄曲霉毒素B1的含量，优点是灵敏度高、选择性强、稳定性好、准确性高和检测速度快。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用PbS量子点快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于包括以下步骤：???（1）PbS量子点的制备????取10mmol/L的Pb(NO3)2溶液于三颈烧瓶，在磁力搅拌的条件下，缓慢加入巯基乙酸后，调pH至7，通氮气除氧25?35min，逐滴加入25mol/L的Na2S溶液，在N2保护下反应23?25h后，于转速10000?12000rpm，离心25?35min，取沉淀用二次蒸馏水和无水乙醇交替清洗各3?4次，将所得固体物质置于45?55℃恒温真空干燥箱中干燥，得到PbS量子点；???（2）PbS量子点耦合黄曲霉毒素B1单抗取PbS量子点溶于?PBS溶液中，加入1?乙基?(3?二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDC）和?N?羟基琥珀酰亚胺（NHS），超声混匀，室温下避光摇荡培养25?35min后得到混合溶液，将黄曲霉毒素B1单克隆抗体溶于PBS溶液中配制成1mg/mL的黄曲霉毒素B1单克隆抗体溶液，将黄曲霉毒素B1单克隆抗体溶液加入混合溶液中，避光震荡1.5?2.5h后，再加入巯基乙醇稳定量子点，透析20?28h后，于转速4000?6000rpm，离心2.5?3.5min，取沉淀用PBS溶液清洗2?4次后，得到量子点标记的单克隆抗体，将量子点标记的单克隆抗体溶于PBS溶液中，配制成10μg/mL的量子点标记的单克隆抗体溶液，4℃避光保存待用；（3）基于量子点的免疫竞争检测酶标板中每孔加入100μL?3mg/mL黄曲霉毒素B1?牛血清白蛋白偶联物（AFB1?BSA）作为包被原，包被酶标板，4℃过夜，PBST缓冲液洗板3次，每孔加入200μL?3%酪蛋白水溶液封闭，4℃过夜，PBST缓冲液洗板3次，每孔同时加入50μL?AFB1溶液和60μL10μg/mL?量子点标记的单克隆抗体溶液，37℃孵育1h，PBST缓冲液洗板3次，每孔加入100μL?1mol/L硝酸溶液超声消化30min，经消化后的样品转移到电解池，在电解池中加入20μL?1mg/mL?Hg2Cl溶液，并用pH4.5的醋酸缓冲液定容至2mL，作为待测溶液，进行下一步电化学检测；???（4）电极预处理????将玻碳电极依次在1.0、0.3、0.05μm粒径的α?Al2O3抛光粉中反复打磨至镜面，然后分别置于体积分数为50%的乙醇溶液、体积分数为50%的硝酸溶液以及二次蒸馏水中超声清洗4?6min，用微氮气流将玻碳电极吹干备用；????（5）测定方法?????将待测溶液中通入高纯N2?除氧5?15min，静止5?15s后，置入旋转电极，开动电机旋转预处理后的玻碳电极，在起始电位?1.0V处富集，富集240s后停止旋转玻碳电极，静置5?15s，控制方波频率为30Hz，电位增量为4mV/s，方波幅度为25mV，采用方波伏安法从?0.8V反向扫描至?0.2V，记录扫描曲线，于?0.52V记录Pb2+的溶出峰电流，根据Pb2+的溶出峰电流大小与黄曲霉毒素B1溶液浓度之间的标准曲线关系，将待测溶液的Pb2+的溶出峰电流代入标准曲线中，计算得到黄曲霉毒素B1的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：潘道东，朱浩嘉，李桦，孙扬赢，曹锦轩，曾小群，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：