一种水稻基因组定点改造方法技术

技术编号:9310753 阅读:123 留言:0更新日期:2013-11-06 14:17
本发明专利技术公开了一种实现水稻目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失的基因改造方法。本发明专利技术的方法包含以下步骤:使水稻组织中含有向导RNA和Cas9核酸酶,然后在向导RNA和Cas9核酸酶共同作用下,目的基因上的双链靶标片段被剪切,再通过水稻细胞的自身DNA修复功能,最终实现水稻目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失。实验证明,本发明专利技术方法能够成功地对水稻进行基因突变。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种实现水稻目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失的基因改造方法,是利用gRNA:Cas9系统在水稻中对目的基因进行改造,该系统包括向导RNA和Cas9核酸酶,其特征在于:所述方法包含以下步骤:使水稻组织中含有向导RNA和Cas9核酸酶,然后在向导RNA和Cas9核酸酶共同作用下,目的基因上的双链靶标片段被剪切,再通过水稻细胞的自身DNA修复功能,最终实现水稻目的基因中靶标片段上的随机插入和/或随机缺失;所述靶标片段位于所述目的基因上;所述双链靶标片段中的一条链具有如下结构:5’?NX?NGG?3’,N表示A、G、C和T中的任一种,14≤X≤30;所述向导RNA依次由能够与所述靶标片段互补结合的RNA片段和骨架RNA片段连接而成;所述骨架RNA片段依次由tracrRNA、crRNA嵌合形成类似发夹结构的RNA,所述骨架RNA片段可与Cas9核酸酶结合。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:高彩霞单奇伟王延鹏李君陈坤玲
申请(专利权)人:中国科学院遗传与发育生物学研究所
类型:发明
国别省市:

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