HPCL-MS/MS结合代谢流量分析系统评估环境污染物细胞毒性的方法技术方案

本发明专利技术利用HepG2细胞为供试细胞，a)建立了细胞培养液中快速提取代谢产物的前处理方法；b)利用HPLC-MS/MS定量分析细胞培养液中的23种代谢物；c)构建了HepG2细胞的代谢轮廓；d)代谢流量分析系统利用HPLC-MS/MS所得数据成功分析环境污染物对细胞各代谢路径的影响。该发明专利技术前处理方法简单，利用HPLC-MS/MS能精确定量细胞培养液中的多种代谢物，结合代谢流量分析系统能直观的反映环境污染物对细胞代谢路径的影响；具有操作简单，分析时间短，灵敏度高，重现性好，获得信息量全面等优点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种环境污染物细胞毒性的评估方法，其特征在于：利用HPLC?MS/MS结合代谢流量分析系统定量分析环境污染物的细胞毒性，其操作步骤如下：a)以未加环境污染物的细胞培养液为标准品，将环境污染物放入细胞培养液DMEM中作为待测样品，分别于培养箱中进行HepG2细胞培养，于37℃培养6?72小时，培养过程中于培养箱中通入体积含量5％CO2的空气；取细胞培养液，采用液液萃取法对细胞培养液中的代谢物进行提取，得到代谢产物提取液；b)将获得的代谢产物提取液上样，进行HPLC?MS/MS定量分析，获得细胞培养液中23种代谢产物的代谢通量；c)根据代谢途径的生物信息学分析(KEEG)数据库，根据拟稳态假设，将获得的23种代谢物的代谢通量平衡简化代谢网络，构建了HepG2细胞的代谢轮廓图；d)将待测样品与标准品所获得的代谢轮廓图进行对比，通过代谢通量计算出代谢路径的变化情况，获知环境污染物对细胞的代谢毒性情况。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张保琴，张海军，金静，陈吉平，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：