一种用复合载体固定化双酶制备玉米蛋白活性肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种用复合载体固定化双酶制备玉米蛋白活性肽的方法，包括如下步骤：将碱性蛋白酶液加入到海藻酸钠溶液中，搅拌，加入胰蛋白酶液，搅拌，静置，获得包有双蛋白酶液的海藻酸钠溶液；将包有双蛋白酶液的海藻酸钠溶液逐滴滴入到不断搅拌下的CaCl2-壳聚糖混合溶液中，硬化成球，过滤，烘干，得到复合载体固定化双酶凝胶珠；配制玉米醇溶蛋白乙醇溶液，调节pH，加入复合载体固定化双酶凝胶珠，反应，过滤，滤液调pH，得到玉米蛋白活性肽液；制备过程简便，无毒，安全，复合载体固定化双酶凝胶珠极易分离、稳定性高，可重复利用，贮存酶活损失小，降解所得玉米蛋白肽生物活性高，玉米醇溶蛋白水解度优于游离酶降解所得水解度。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用复合载体固定化双酶制备玉米蛋白活性肽的方法，其特征是包括如下步骤：（1）用pH=10的磷酸盐缓冲液配制1mg/mL碱性蛋白酶液；在40℃～50℃水浴条件下，用pH=6.8的磷酸盐缓冲液配制1mg/mL胰蛋白酶液；在50～80℃水浴、搅拌条件下，将海藻酸钠加入到pH=6.5～8.0的磷酸盐缓冲液中，使海藻酸钠充分溶解，配成质量分数为2%～3%的海藻酸钠溶液；（2）按体积比为0.5～2:5的比例将碱性蛋白酶液加入到海藻酸钠溶液中，搅拌0.5～1h，加入胰蛋白酶液，搅拌0.5～1h，静置1～2h，获得包有双蛋白酶液的海藻酸钠溶液，所述胰蛋白酶液与所述碱性蛋白酶液的体积比为1:1～2；（3）称取脱乙酰度≥90.0%的壳聚糖，以体积分数为0.5%～1%的乙酸水溶液为溶剂，在50℃～80℃水浴下溶解0.5～1h，配制得1.5g/mL壳聚糖溶液；按体积比为1:2～3的比例，将所述壳聚糖溶液和浓度为2g/mL的CaCl2水溶液混合，搅拌10～20min，静置20～40min，获得CaCl2?壳聚糖混合溶液；（4）将包有双蛋白酶液的海藻酸钠溶液逐滴滴入到不断搅拌下的步骤（3）获得的CaCl2?壳聚糖混合溶液中，硬化成球0.5～1.5h，过滤，水洗3～5次，40～50℃烘干，得到复合载体固定化双酶凝胶珠，4℃冰箱保存备用；（5）称取玉米醇溶蛋白放入体积浓度为75%～90%的乙醇水溶液中，于50～60℃水浴10～15min，使玉米醇溶蛋白溶解，配成底物浓度为2.5～3.5g/mL的玉米醇溶蛋白液，调节pH为8.0～9.0，加入复合载体固定化双酶凝胶珠，在50～60℃下，反应20min～1h，过滤，将滤液调节pH为8.0～9.0，得到玉米蛋白活性肽液；所述玉米醇溶蛋白与复合载体固定化双酶凝胶珠的质量比为1:0.5～2。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海霞，王艳伟，王佳，邢利沙，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：