一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法技术

本发明专利技术涉及一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在Ph7.8-9条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。本发明专利技术方法不采用苏氨醇、Fmoc-苏氨醇，生产成本极低，具备规模化生产能力，工艺稳定，原辅料来源方便，生产周期短，接肽收率高，质量稳定，避免使用氟化氢，三氟乙酸等剧毒试剂，三废污染少。

【技术实现步骤摘要】
一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法
本专利技术涉及一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，具体涉及醋酸奥曲肽的固相多肽合成方法。
技术介绍
奥曲肽，中文名：醋酸奥曲肽；英文名：OctreotideAcetate；分子式:C49H66N10010S2·XC2H4O2；结构式:醋酸奥曲肽能抑制多种胃肠道激素的分泌及其它多种内分泌功能，目前已广泛用于临床治疗各型胰腺炎、胰腺瘘管、肠瘘、肝硬化食道-胃底曲张静脉出血、消化道溃疡出血、严重腹泻及肢端肥大症，并有望用于消化系统内分泌肿瘤的治疗。在国内，肝硬化发病率超过1%，每年发生食管曲张静脉破裂引起的大出血的患者，加上消化性溃疡引起的上消化道大出血患者，总数超过300万，因此醋酸奥曲肽的市场较大。我们将致力于降低醋酸奥曲肽的生产成本，大大降低患者的治疗成本。目前文献报导的醋酸奥曲肽的制备方法一般需使用苏氨醇或Fmoc-苏氨醇，导致生产成本较高；在并使用氟化氢切肽、三氟醋酸进行纯化，污染环境，收率较低。因此目前的方法限制了醋酸奥曲肽的大规模生产和使用。不同的多肽产品由于受其自身结构的制约，在合成工艺上存在一些局限性，不能任意选择起始原料和工艺条件完成多肽合成。虽然使用Boc-保护的氨基酸可以实现某些多肽产品的合成，但是现有技术中尚没有开发出采用Boc-苏氨酸制备醋酸奥曲肽的工艺技术，而Boc-苏氨酸相较Fmoc-苏氨醇，价格低廉，使用Boc-苏氨酸来合成醋酸奥曲肽，将极大降低醋酸奥曲肽的生产成本，有益于醋酸奥曲肽的大规模生产和使用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，大幅度减少三废和降低原料成本，提高反应收率，以克服现有技术存在的上述缺陷。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT为缩合剂进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：（1）Boc-Thr(tBu)-OCs的制备Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的1~3倍；碳酸铯的摩尔数为树脂的1~5倍；（2）Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs，DMF，反应；过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂；氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时；（3）Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：在步骤（2）的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10%三乙胺的DCM溶液（体积比）反应，抽干，DCM洗涤；加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；（4）Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤（3）的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；（5）Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤（4）的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；（6）Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤（5）的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-D-Trp-OH、DIC，HOBT，DMF,将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；（7）Boc-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤（6）的Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇与DCM与乙二硫醇的混合溶液，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Phe-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液与乙二硫醇的混合溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；（8）Boc-Cys(Trt)-Phe-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tB本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，其特征在于，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc?Thr(tBu)?OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc?Cys(Trt)?OH、Boc?Thr(tBu)?OH、Boc?Lys(Fmoc)?OH、Boc?D?Trp?OH、Boc?Phe?OH、Boc?Cys(Trt)?OH、Fmoc?D?Phe?OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc?保护基团，用DIC、HOBT进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在pH7.8?9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。

【技术特征摘要】
1.一种醋酸奥曲肽的多肽合成方法，其特征在于，包括如下步骤：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，依次为：Boc-Cys(Trt)-OH、Boc-Thr(tBu)-OH、Boc-Lys(Fmoc)-OH、Boc-D-Trp-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-D-Phe-OH，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/异丙醇脱去Boc-保护基团，用DIC、HOBT进行接肽反应，用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落，获得还原型奥曲肽，在pH7.8-9的条件下通空气使二硫键成环，获得奥曲肽粗品，再采用独特的流动相经C18柱分离纯化，制得醋酸奥曲肽精品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Boc-保护基团的方法包括如下步骤：（1）Boc-Thr(tBu)-OCs的制备Boc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇与水中，另取碳酸铯加水溶解至澄清，搅拌下加入上述Boc-Thr(tBu)-OH溶液，溶液pH7.5，减压浓缩至干，得糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs；Fmoc-Thr(tBu)-OH的摩尔数为树脂的1~3倍；碳酸铯的摩尔数为树脂的1~5倍；（2）Boc-Thr(tBu)-O-树脂的制备取氯甲基树脂，用DMF浸泡使树脂溶胀，加上述糖浆状残留物Boc-Thr(tBu)-OCs，DMF，反应；过滤，树脂用DMF洗涤二次，纯化水洗涤，无水乙醇洗涤，减压干燥，得Boc-Thr(tBu)-O-树脂；氯甲基树脂与Boc-Thr(tBu)-OCs的反应温度：40-65℃，反应时间：36-72小时；（3）Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备：在步骤（2）的Boc-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，再加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加入Boc-Cys(Trt)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；（4）Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤（3）的Boc-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤二次，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Thr(tBu)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；（5）Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤（4）的Boc-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM各洗涤，抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-Lys(Fmoc)-OH、DIC，HOBT，DMF，将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LHCl/异丙醇用量为树脂重量的3~8倍；（6）Boc-D-Trp-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂的制备在步骤（5）的Boc-Lys(Fmoc)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Thr(tBu)-O-树脂中，加入2mol/LHCl/异丙醇溶液与DCM，反应，抽干，分别用DCM、无水甲醇、DCM洗涤二抽干，加10%三乙胺的DCM溶液反应，抽干，DCM洗涤；加Boc-D-Trp-OH、DIC，HOBT，DMF,将混合物反应，抽干，分别用DMF、无水甲醇、DMF洗涤三次，抽干；脱除Boc-基采用2mol/LHCl/异丙醇溶液，HCl浓度为1mol/L~9mol/L；2mol/LH...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘湘艳，唐林春，崔颀，周逸明，
申请(专利权)人：上海苏豪逸明制药有限公司，周逸明，崔颀，
类型：发明
国别省市：