端粒C序列单链DNA的亲和介导扩增方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种端粒C序列单链DNA与模板探针的亲和介导扩增方法，以及利用该方法进行端粒替代延伸检测的试剂盒。端粒延伸是癌细胞得以无限分裂增殖所必须，存在有两种机制，一是重新激活表达端粒酶，另一种是端粒替代延伸（Alternative?Lengthening?of?Telomere,ALT）。TC-ssDNA是ALT阳性的癌细胞（ALT+细胞）的特征。本发明专利技术ABTC方法及试剂盒，通过PCR特异扩增检测TC-ssDNA，具有简便、快捷、高灵敏度和高特异性的特点，适合对各种来源的细胞和组织样品进行ALT检测。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种端粒C序列单链DNA与模板探针的亲和介导扩增方法，所述方法包括：（1）在反应管内固定锚定探针T，得到锚定PCR管；所述锚定探针T序列为G序列的重复序列即（TTAGGG）n，n为6～10的整数，其互补结合TC?ssDNA的Tm值记为Tmt；（2）合成模板探针G，其中间为G序列的重复序列（TTAGGG）（n?1），两端是端粒酶的PCR引物序列，并且在其中的一端的G序列与引物序列之间含有一个酶切位点，该端命名为A端；模板探针G互补结合TC?ssDNA的Tm值记为Tmc；（3）合成抑制探针S，该抑制探针与模板探针G的A端的酶切位点的区域互补；抑制探针S互补结合TC?ssDNA的Tm值记为Tms；Tmc比Tmt低5℃、比Tms高20～25℃；（4）模板探针G与抑制探针S形成可被酶切的双链DNA，命名为dsGS；（5）取待测样本，加入裂解液，反复吸打，转移至离心管中，冰上放置10min，4℃离心，取上清液，得到裂解上清液；（6）将裂解上清液和dsGS加入到锚定PCR管中，先在比Tmc低5℃的温度下保温杂交10～30min，然后再在比Tms低10℃的条件下，保温杂交10～30min；（7）吸干杂交液，加入含有限制性内切酶和PCR引物的PCR反应液，先以37℃保温5～15分钟，随即进行PCR反应，PCR反应产物用于荧光定量或琼脂糖凝胶电泳分析。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈燃，金晓铮，
申请(专利权)人：浙江今复康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：