【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种肿瘤外切酶体疫苗的提取方法,其特征在于,通过以下步骤实现:?(1)提取:胎牛血清在4℃条件下,离心6h,除去内源性exosome,人胆管癌细胞在含10%的胎牛血清的1640培养液中,培养约72h,收集培养基上清,按药品生产质量管理规范标准提取肿瘤外切酶体,上清液离心5分钟,转移至新的离心管离心30分钟,再转移至新的离心管离心30分钟,去除细胞碎片;上清液再用millipore公司超滤管离心30分钟;将浓缩液移至30?g/L的蔗糖重水垫上,超速离心60分钟,取出蔗糖重水垫,稀释到50ml的PBS中,再用超滤管离心,直至体积<5?ml,以0.22um的滤器过滤除菌,分装后置于?80℃冰箱备用;(2)提取裂解超滤液:取超速离心后的exosome沉淀,加入去离子水10ml,低渗法使exosome破膜,用millipore公司超滤管离心30分钟去除miRNA提纯exosome裂解超滤液。
【技术特征摘要】
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