一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法技术

技术编号:9109137 阅读:360 留言:0更新日期:2013-09-04 22:59
本发明专利技术公开了一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法,将表达包涵体蛋白的菌株离心收集,洗涤后,用BufferA进行重悬,接着用超声波或液压破碎仪破碎至清亮,经过适当离心后获得包涵体蛋白,用适当浓度的SKL溶解后,再用氧化型谷胱甘肽和还原性谷胱甘肽溶液进行处理,最终纯化复性的蛋白。本发明专利技术方法操作简单,提高了包涵体复性效率,简化了复性步骤,节约了时间并减少了操作人员的工作量,所得蛋白质纯度较高并且具有生物学活性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法,其特征在于,包括以下步骤:第一步,将表达菌体离心收集,离心菌体经PBS洗涤后用Buffer?A重悬,之后用超声波或液压破碎仪破碎至清亮;其中离心温度为4?10℃、离心速度为8000?12000r/min、离心时间为每200ml菌体离心1min;第二步,在4?10℃、8000?12000r/min下离心第一步中的清亮液,弃去上清液,离心时间﹥10min,再用PBS洗涤沉淀;第三步,向沉淀中加入Buffer?A、0.5mol/L的DTT和20%的SKL贮存液,使沉淀缓慢溶解,溶解条件为25℃下静置30?120min或4℃下溶解时间>8h?,然后4?10℃、8000?12000r/min离心,取上清液,离心时间﹥10min;第四步,向第三步的上清液中加入20%的PEG4000至终浓度为0.2%,加入50mmol/L的氧化型谷胱甘肽至终浓度为1mmol/L,加入100mmol/L的还原型谷胱甘肽至终浓度为2mmol/L,25℃下静置30?120min或4℃下反应时间>8h,接着用TE?buffer透析后即得产品;其中,Buffer?A的用量为菌体体积的1/10,DTT用量为菌体体积的1/10000,SKL用量为菌体体积的3/2000,所述百分比为重量百分比;所述Buffer?A的组成为50?mmol/L的Tris?base、0.5mmol/L的EDTA、50mmol/L的NaCl和体积分数为5%的甘油。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王朋赵林萍鲁龙李慧英任宝红王军苗银萍王真孙帅领张如民曾小宇
申请(专利权)人:郑州中道生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:

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