【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法,其特征在于,包括以下步骤:第一步,将表达菌体离心收集,离心菌体经PBS洗涤后用Buffer?A重悬,之后用超声波或液压破碎仪破碎至清亮;其中离心温度为4?10℃、离心速度为8000?12000r/min、离心时间为每200ml菌体离心1min;第二步,在4?10℃、8000?12000r/min下离心第一步中的清亮液,弃去上清液,离心时间﹥10min,再用PBS洗涤沉淀;第三步,向沉淀中加入Buffer?A、0.5mol/L的DTT和20%的SKL贮存液,使沉淀缓慢溶解,溶解条件为25℃下静置30?120min或4℃下溶解时间>8h?,然后4?10℃、8000?12000r/min离心,取上清液,离心时间﹥10min;第四步,向第三步的上清液中加入20%的PEG4000至终浓度为0.2%,加入50mmol/L的氧化型谷胱甘肽至终浓度为1mmol/L,加入100mmol/L的还原型谷胱甘肽至终浓度为2mmol/L,25℃下静置30?120min或4℃下反应时间>8h,接着用TE?buffer透析后即得产品;其中,Buffer?A的用量为菌体体积的1 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:王朋,赵林萍,鲁龙,李慧英,任宝红,王军,苗银萍,王真,孙帅领,张如民,曾小宇,
申请(专利权)人:郑州中道生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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