一种苹果属植物叶片全蛋白提取方法技术

技术编号:9109112 阅读:273 留言:0更新日期:2013-09-04 22:56
一种苹果属植物叶片全蛋白提取方法,具体为:采摘幼嫩叶片,无菌水清洗后快速风干,准确称取2克,用液氮在研钵中迅速研磨成精细粉末;加入4ml的匀浆缓冲液,4℃下涡旋振荡10分钟;匀浆液中加入等体积的Tris-饱和酚,涡旋摇荡20分钟;将匀浆液转入离心管中,4℃下15000×g,离心30分钟,上层酚相转移新离心管;回收酚相,加入5倍体积0.1M甲醇醋酸铵溶液,-20℃条件下沉淀4小时以上;沉淀物经冷丙酮漂洗三次,室温风干,得到蛋白干粉,-80℃条件下保存备用。本发明专利技术的优点:以田间苹果幼嫩叶片为研究试材,其总蛋白提取纯度高,方法简单。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种苹果属植物叶片全蛋白提取方法,其特征在于:所述的苹果属植物叶片全蛋白提取方法,具体为:采摘叶龄为20~25天的幼嫩叶片,无菌水清洗后快速风干,用锋利刀片去除叶片叶柄部分,准确称取2克,用液氮在研钵中迅速研磨成精细粉末,粒径约为40?60微米,研磨时间3分钟;加入4ml的匀浆缓冲液,4℃下涡旋振荡10分钟;匀浆液中加入等体积的Tris?饱和酚,具体为三羟甲基氨基甲烷缓冲液配制的pH?8.0的苯酚溶液,4℃下,涡旋摇荡20分钟;将匀浆液转入离心管中,4℃下15000×g,离心30分钟,上层酚相转移新离心管;重新加入同体积的上述匀浆缓冲液,4℃下涡旋震荡10分钟,15000×g离心10分钟;继续回收酚相,加入5倍体积0.1M甲醇醋酸铵溶液,?20℃条件下沉淀4小时以上;溶液在4℃下,15?000×g,离心10分钟,沉淀物经冷丙酮(含20mM二硫苏糖醇)漂洗三次,室温风干,得到蛋白干粉,?80℃条件下保存备用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:张彩霞丛佩华张利义康国栋田义王强杨玲
申请(专利权)人:中国农业科学院果树研究所
类型:发明
国别省市:

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