分枝杆菌抗原组合物制造技术

提供了包含M72相关抗原的免疫原性组合物及其在药物中的用途，其中所述组合物的导电率是13mS/cm或更低，或者所述组合物的盐浓度是130mM或更低。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含M72相关抗原且具有低离子强度的免疫原性组合物。本专利技术也涉及进一步包含一种或多种免疫刺激剂的这类免疫原性组合物。还提供了用于制备这类免疫原性组合物的方法和相关的试剂盒。
技术介绍
结核病(TB)是一种由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)和其他分枝杆菌种的感染引起的慢性传染性疾病。它是世界上发展中国家的一种主要疾病，并成为发达区域日益严重的问题。超过20亿人被认为感染了 TB杆菌，每年新增约940万TB病例和170万死亡病例。其中10%感染TB杆菌的人会发展活动性TB，每位患有活动性TB的人平均每年感染10-15个其他人。尽管在全球的每年发病率已经达到顶峰，但是由于人口增长，死亡数和病例数依然在上升(World Health Organisation Tuberculosis Facts 2010)。蛋白抗原Mtb72f和M72 (描述为，例如，国际专利申请W02006/117240中)或其片段或衍生物是具有用于治疗或预防结核病的潜在益处的蛋白抗原。为了确保能维持免疫原性，蛋白抗原的配制极端重要。有时使用免疫刺激剂以改善针对任何给定抗原而产生的免疫应答。然而，在免疫原性组合物中包含佐剂会增加成分制备的复杂性以及组合物的分布和配制的复杂性。配制者必须考虑每种佐剂成分以及抗原性成分的制备。具体而言，应当考虑抗原性成分与佐剂成分的相容性。这尤其是在预期将冻干抗原或抗原制剂与佐剂制剂重构的情况下。在这种情况下，重要的是，佐剂制剂的缓冲液对于抗原而言是合适的并且抗原的免疫原性或溶解度不会受到佐剂的影响。专利技术概述 本专利技术人已经首次鉴定M72相关抗原对盐的存在特别敏感。不受理论的限制，据信M72相关抗原受被称为“盐析”的现象的不利影响，该现象可以被定义为通过蛋白与盐如氯化钠的相互作用而从其溶液中沉淀。本专利技术人已经发现，当氯化钠浓度低至150mM时，这些抗原就会聚集和沉淀。因此，包含M72相关抗原的免疫原性组合物的稳定性令人惊讶地可以通过降低氯化钠浓度而改善。因此，本专利技术提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物的导电率是13 mS/cm或更低。额外提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物中的盐浓度是130 mM或更低。本专利技术还提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物中的氯化钠浓度是130 mM或更低。附图简述 附图说明图1.QS21裂解活性曲线 图2.在不同ASA制剂中，每种3D-MPL同类物(congener)的百分比 图3.储存后具有不同 的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的DLS 图4.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的浊度测定图5.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的抗原稳定性 图6a-6d.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的SEC-HPLC分析 图7.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的抗原性 图8.NaCl标准溶液的导电率 图9.使用本专利技术的免疫原性组合物在小鼠中诱导CD4 T细胞应答 图10.使用本专利技术的免疫原性组合物在小鼠中诱导CD8 T细胞应答 图11.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的浊度测定 图12.储存后具有不同的pH和NaCl浓度的免疫原性组合物的DLS 图13.储存后具有不同的NaCl浓度的免疫原性组合物的抗原性。序列标识符简述 SEQ ID No:1M72蛋白的氨基酸序列 SEQ ID No: 2 编码M72蛋白的核苷酸序列 SEQ ID No:3具有2个N-末端His残基的M72蛋白的氨基酸序列 SEQ ID No:4 编码具有2个N-末端His残基的M72蛋白的核苷酸序列 SEQ ID No:5Mtb72f蛋白的氨基酸序列 SEQ ID No: 6 编码Mtb72f蛋白的核苷酸序列 SEQ ID No:7具 有6个N-末端His残基的Mtb72f蛋白的氨基酸序列 SEQ ID No:8编码具有6个N-末端His残基的Mtb72f蛋白的核苷酸序列 SEQ ID No: 9 CpG寡核苷酸I的核苷酸序列(CpG 1826) SEQ ID No: 10 CpG寡核苷酸2的核苷酸序列(CpG 1758) SEQ ID No: 11 CpG寡核苷酸3的核苷酸序列 SEQ ID No: 12 CpG寡核苷酸4的核苷酸序列(CpG 2006) SEQ ID No: 13 CpG寡核苷酸5的核苷酸序列(CpG 1686)。专利技术详述 在第一个方面，本专利技术提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物的导电率是13 mS/cm或更低。具体而言，本专利技术提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物的导电率是12 mS/cm或更低,例如10 mS/cm或更低、8 mS/cm或更低、6 mS/cm或更低、5 mS/cm或更低、4 mS/cm或更低或3 mS/cm或更低。在特定的实施方案中，免疫原性组合物的导电率是2.5 mS/cm或更低，诸如2.25 mS/cm或更低或2.0 mS/cm或更低。在进一步特定的实施方案中，免疫原性组合物的导电率是1.5至2.5 mS/cm。在第二个方面，本专利技术提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物中的盐浓度是130 mM或更低。具体而言，本专利技术提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中所述组合物中的盐浓度是100 mM或更低，例如90 mM或更低、80 mM或更低、70 mM或更低、60 mM或更低、50 mM或更低、或40 mM或更低。在特定的实施方案中，所述组合物中的盐浓度是35 mM或更低，诸如30 mM或更低或25 mM或更低。在进一步特定实施方案中，所述组合物中的盐浓度是20至40 mM，诸如25至35 mM。在第三个方面，本专利技术提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中氯化钠浓度是130 mM或更低。具体而言，本专利技术提供包含M72相关抗原的免疫原性组合物，其中氯化钠浓度是100 mM或更低，例如90 mM或更低、80 mM或更低、70 mM或更低、60 mM或更低、50 mM或更低、40 mM或更低、30 mM或更低、20 mM或更低或15 mM或更低。在特定的实施方案中，所述免疫原性组合物中的氯化钠浓度是10 mM或更低，诸如7.5 mM或更低。合适地，免疫原性组合物中的氯化钠浓度或等于或低于5 mM。在进一步特定的实施方案中，免疫原性组合物基本不含氯化钠。基本不含是指氯化钠浓度为或非常接近0 mM(诸如3 mM或更低、2 mM或更低或I mM或更低)。合适地，免疫原性组合物中的CaCl2浓度将是40 mM或更低、30 mM或更低、20 mM或更低、15 mM或更低或10 mM或更低。合适地，免疫原性组合物中的MgSO4浓度将是80 mM或更低、60 mM或更低、40 mM或更低、30 mM或更低、20 mM或更低或10 mM或更低。合适地，免疫原性组合物中的順4+、Mg2+和Ca2+离子总浓度将是80 mM或更低、60mM或更低、40 mM或更低、30 mM或更低、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：SAG戈达特，A拉南，DI莱莫伊内，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：
国别省市：