本发明专利技术公开了一种制备柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法。方法步骤如下：（1）取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解4-7天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次，得到提取液；（2）提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用正丁醇萃取，萃取液浓缩得粗提物；（3）把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得柔毛山黧豆甙Ⅰ。采用本发明专利技术制备柔毛山黧豆甙Ⅰ，方法操作简单、效率高、制备量大，所得产品纯度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然药物化学领域，特别是涉及一种制备柔毛山黧豆甙I的方法。
技术介绍
柔毛山黧豆甙I (Palustroside)为三萜苷类活性成分，白色粉末，分子式C42H68O15,分子量812.99,主要来源于豆科(Leguminosae)柔毛山黧豆 Lathyrus palustrisL.var.pilosus Ledeb.的地上部分。现代研究表明，柔毛山黧豆的地上部分中含有大量黄酮类物质，具有显著的保肝作用。在体外免疫肝损害中，对培养的大鼠肝细胞有保护作用。剂量90 μ M时，保护率46% ;200 μ M时，保护率86%。通过检索，国内尚未见采用高速逆流色谱分离技术制备柔毛山黧豆甙I的方法的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种制备柔毛山黧豆甙I的方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的: 一种制备柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于以下步骤: (1)取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解4-7天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次， 得到提取液； (2)提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用正丁醇萃取，萃取液浓缩得粗提物； (3 )把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得柔毛山黧豆甙I。步骤(I)中所述的生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，用量为原料量的3-5 %0。步骤(2)中所述的超滤膜为截留分子量2000-10000的中空纤维素超滤膜，纳滤膜为截留分子量200-400的中空纤维素纳滤膜。步骤(3)中所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统为乙酸乙酯-正丁醇-水组合，比例为3-5:2-4:5-7，下相为流动相，上相为固定相。本专利技术采用生物酶发酵，可以缩短提取周期，提高提取率；采用膜过滤技术分离，物理方法除杂，操作简单，不污染环境；采用高速逆流色谱分离，分离速度快，样品无损失，溶剂可以循环使用，制备量大。具体实施方式: 下面将结合具体实施方式进一步说明本专利技术。实施例1: 取纤维酶15g溶于5L水，加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌匀，常温酶解5天，酶解原料用70°C温水浸泡提取2次，每次加40kg，提取液过滤后用截留分子量2000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量200的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积正丁醇萃取3次，萃取液浓缩得粗提物12g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:2:5混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2.5ml/min,同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色柔毛山黧豆甙I 702mg，经HPLC检测，纯度98.2%。实施例2: 取淀粉酶5和果胶酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌匀，常温酶解4天，酶解原料用60°C温水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液过滤后用截留分子量6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量300的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积正丁醇萃取3次，萃取液浓缩得粗提物13g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按5:4:7混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机850rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2.5ml/min,同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色柔毛山黧豆甙I 598mg,经 HPLC 检测，纯度 97.7%。实施例3: 取淀粉酶5和果胶酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌匀，常温酶解7天，酶解原料用60°C温水浸泡提取2次，每次加30kg，提取液过滤后用截留分子量10000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量300的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积正丁醇萃取3次，萃取液浓缩得粗提物15g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:2:5混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机800rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色柔毛山黧豆甙I 715mg，经HPLC检测，纯度98.1%。·实施例4: 取纤维素酶15和果胶酶IOg溶于5L水,加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌匀，常温酶解4天，酶解原料用60°C温水浸泡提取3次，每次加35kg，提取液过滤后用截留分子量5000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液再用截留分子量400的中空纤维素纳滤膜浓缩，所得浓缩液用等体积正丁醇萃取3次，萃取液浓缩得粗提物22g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按4:3:5混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机IOOOrpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色柔毛山黧豆甙I 569mg,经 HPLC 检测，纯度 98.2%。权利要求1.一种制备柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于以下步骤: (1)取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解4-7天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次，得到提取液； (2)提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用正丁醇萃取，萃取液浓缩得粗提物； (3 )把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得柔毛山黧豆甙I。2.据权利要求1所述的制备柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于步骤(I)中所述的生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，用量为原料量的3-5%。。3.根据权利要求1所述的制备柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于步骤(2)中所述的超滤膜为截留分子量2000-10000的中空纤维素超滤膜，纳滤膜为截留分子量200-400的中空纤维素纳滤膜。4.根据权利要求1所述的制备柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于步骤(3)中所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统为乙酸乙酯-正丁醇-水组合，比例为3-5:2-4:5-7，下相为流动相，上相为固 定相。全文摘要本专利技术公开了。方法步骤如下(1)取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解4-7天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次，得到提取液；(2)提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用正丁醇萃取，萃取液浓缩得粗提物；(3)把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得柔毛山黧豆甙Ⅰ。采用本专利技术制备柔毛山黧豆甙Ⅰ，方法操作简单、效率高、制备量大，所得产品纯度高。文档编号C07H1/08GK103242394SQ201310188710公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月21日 优先权日2013年5月21日专利技术者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法，其特征在于以下步骤：（1）取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解4?7天，酶解原料用温水浸泡提取2?3次，得到提取液；（2）提取液过滤后用超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，所得浓缩液用正丁醇萃取，萃取液浓缩得粗提物；（3）把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得柔毛山黧豆甙Ⅰ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，万冬梅，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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