一种提取去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的方法技术

本发明专利技术涉及一种从栀子中提取、分离去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的方法，包括以下步骤：醇回流提取、大孔树脂洗脱除杂、硅胶柱洗脱除杂和中低压制备液相分离。该方法操作简单且易于掌握，所用柱材料可反复利用，不污染环境，在尽可能少使用有害溶剂的同时获得了较高的纯度和成品得率，且一次能分离出两种单体成分。

【技术实现步骤摘要】
一种提取去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的方法
本专利技术涉及一种从栀子中提取去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的方法，属于中药制剂领域。
技术介绍
栀子(GardeniajasminoidesEllis)为茜草科植物栀子的干燥成熟果实，性寒，味苦，是常用的清热类中药，具有泻火除烦，清热利湿，凉血解毒等功效。栀子的主要成分及有效成分为以京尼平苷(geniposide)为代表的环烯醚萜类成分，该类成分具有解热、抗炎、保肝、利胆、镇痛、镇静、抗菌等与栀子功能主治相关的生理活性。去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯均为栀子中的环烯醚萜类化合物，具有导泻作用。去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯互为异构体，其结构式如下：由于环烯醚萜类化合物结构近似，极性极大，稳定性差，容易发生水解，使得制备此类成分有很大的难度。对于环烯醚萜类成分的提取、分离，国内已有详细的专利及文献报道，例如，张雪琼等人介绍了以HPD100大孔吸附树脂分离纯化栀子总环烯醚萜苷的工艺条件，为栀子总环烯醚萜苷的工业化生产提供了参考(张雪琼等，《中国药理学会制药工业专业委员会第十二届学术会议、中国药学会应用药理专业委员会第二届学术会议、2006年国际生物医药及生物技术论坛(香港)会议论文集》--2006)；姚干等介绍了以HPD450大孔吸附树脂纯化栀子中总环烯醚萜苷和栀子苷的方法，并建立了栀子药材中总环烯醚萜苷的测定方法(姚干等，大孔吸附树脂纯化栀子中总环烯醚萜苷和栀子苷的研究，中草药，第37卷第1期，2006年1月)；中国专利文献ZL200510026144.5也公开了用栀子果实制备总环烯醚萜苷的方法，该方法用水(或乙醇溶液)浸泡或回流制备栀子果实粗提物，将粗提物上大孔吸附树脂柱，分别以少量水和低浓度乙醇水溶液洗脱纯化，减压浓缩后得栀子总环烯醚萜苷。以上都是总环烯醚萜的制备分离方法，但有关分离、纯化去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡藤次苷甲酯单体的研究却甚少。中国专利CN101496845A公开了一种白花蛇舌草的有效部位及制备方法，有效部位包括去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡藤次苷甲酯等四种成分，提取该有效部位的方法包括提取、醇沉、膜分离、非极性大孔树脂分离和工业色谱分离等步骤，但该方法提取的是含有四种以上成分的白花蛇舌草有效部位，并非单体成分，是混合提取物，且膜分离、非极性大孔树脂分离和工业色谱分离均为工业分离方法，步骤繁琐，能耗大，得率少；中国专利ZL200610027531.5公开了一种去乙酰车叶草苷酸甲酯的制备方法，包括提取、萃取或利用吸附剂进行回流洗脱、硅胶柱色谱或凝胶色谱柱分离、结晶等步骤，该方法大量使用有害溶剂，操作步骤繁琐，且得率很少。鉴于上述方法的不足，有必要专利技术一种新的分离、纯化去乙酰车叶草苷酸甲酯或鸡矢藤次苷甲酯的方法，使之既能简化操作过程，在最大程度上少用有害溶剂，又能提高上述两种单体成分的得率。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有提取分离技术中操作步骤繁琐、有害溶剂使用量大和得率少等的不足，提供一种简单、有效的提取分离去乙酰车叶草苷酸甲酯或鸡矢藤次苷甲酯的新方法。本专利技术的专利技术目的通过以下方式实现的。本专利技术去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的分离、纯化方法包括：醇回流提取、大孔树脂洗脱除杂、硅胶柱洗脱除杂、中低压制备液相分离步骤。进一步，本专利技术所涉及的提取分离去乙酰车叶草苷酸甲酯或鸡矢藤次苷甲酯的方法，包括如下步骤：1)取栀子药材，加乙醇回流提取，浓缩醇提取液，加乙醇醇沉16-24小时，过滤醇沉液，去醇，浓缩，得浓缩液；2)步骤1)浓缩液上大孔树脂柱，以纯水洗脱，HPLC分析监测，收集目标洗脱液，减压回收，得浓缩液，调节pH至1-3，水浴加热30min，待用；3)步骤2)水浴加热后的洗脱液上大孔树脂柱，先以纯水洗脱2BV(倍柱体积)，弃去，后以30％的醇洗脱3BV，收集，减压浓缩至浓度为5g药材/ml，待用；4)步骤3)浓缩液上硅胶柱，先以10∶1的氯仿-甲醇溶液洗脱2BV，弃去，再以4∶1氯仿-甲醇溶液洗脱3BV，收集，回收溶剂，得残渣，待用；5)步骤4)残渣加水溶解，上中低压制备液相分离，以甲醇或乙腈溶液为流动相，收集去乙酰车叶草苷酸甲酯洗脱液和鸡矢藤次苷甲酯洗脱液，分别回收洗脱溶剂，残渣以水溶解，冷冻干燥，得去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯纯品。优选地，步骤1)所述回流提取用乙醇的浓度为65％-75％，醇沉至含乙醇的浓度为80％-90％；优选地，步骤3)和4)所述大孔树脂为D101和AB-8中的一种；优选地，步骤5)所述流动相甲醇或乙腈溶液的浓度为5％-10％，最优为6％-8％。与现有技术比较，本专利技术方法具有以下的显著地进步：1、在得到栀子提取液后，常规做法是使用低浓度的乙醇分离各组分，而本专利技术人意外地发现，步骤2)不使用溶剂，仅用纯水就能使各个成分得到充分分离，且分离度较好，后续处理也更容易；而常规使用乙醇进行洗脱，各个组分得不到有效的、充分的分离，且增加成本。2、采用大孔树脂和硅胶柱两种柱层析方法组合进行除杂，能最大程度地除去杂质；大孔树脂柱能有效地吸附环烯醚萜类等极性相对较小的物质，能除去糖类和氨基酸等极性比较大的杂质；硅胶柱能有效地除去栀子中低极性类杂质，防止后续中低压制备液相分离步骤中污染C-18反相柱填料；3、与现有技术相比，本专利技术操作过程简单、在最大程度上减少了有害溶剂的使用。4、与现有提取分离方法比较，用本专利技术方法所得到的去乙酰车叶草苷酸甲酯得率高，纯度高，经测定，其纯度可达98％以上，每千克栀子药材可得去乙酰车叶草苷酸甲酯最多达1540mg，鸡矢藤次苷甲酯最多达120mg。5、本专利技术分离效率高，用相同的操作过程，可分别分离得到去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯两个单体。具体实施方式实施例1去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的制备1)取栀子药材750g，加70％乙醇，回流提取2次，每次1小时，滤过，合并乙醇提取液，回收乙醇，浓缩至含生药5g/ml，加入95％乙醇，边加边充分搅拌，至含乙醇的浓度为85％，静置18小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得浓缩液；2)取上述浓缩液，上AB-8柱，以纯水洗脱，HPLC分析监测，收集6-12BV的流份，减压回收，得浓缩液，调pH至2，水浴加热30min，放冷，待用；3)将上述浓缩液上AB-8柱，先以水洗脱2BV，弃去，再用30％的乙醇洗脱3BV，收集，减压浓缩至浓度为5g药材/ml，待用；4)将上述浓缩液拌适量硅胶，以10∶1的氯仿-甲醇洗脱2BV，弃去，再以4∶1的氯仿-甲醇洗脱3BV，收集，减压回收溶剂，得残渣，待用；5)残渣以水溶解，上中低压制备色谱仪，以7％乙腈水溶液为流动相，收集去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯流份，减压回收溶剂，残渣以水溶解，冷冻干燥，得乙酰车叶草苷酸甲酯1132mg，和鸡矢藤次苷甲酯纯92mg。实施例2去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的制备1)取栀子药材750g，加65％乙醇，回流提取2次，每次1小时，滤过，合并乙醇提取液，回收乙醇，浓缩至含生药5g/ml，加入95％乙醇，边加边充分搅拌，至含乙醇的浓度为80％，静置20小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得浓缩液；2)取上述浓缩液，上AB-8柱，以纯水洗脱，HPLC分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取栀子药材，加乙醇回流提取，浓缩醇提取液，加乙醇醇沉16?24小时，过滤醇沉液，去醇，浓缩，得浓缩液；2)步骤1)浓缩液上大孔树脂柱，以纯水洗脱，HPLC分析监测，收集目标洗脱液，减压回收，得浓缩液，调节pH至1?3，水浴加热30min，待用；3)步骤2)水浴加热后的洗脱液上大孔树脂柱，先以纯水洗脱2倍柱体积，弃去，再以30％的醇洗脱3倍柱体积，收集，减压浓缩至浓度为5g药材/ml，待用；4)步骤3)浓缩液上硅胶柱，先以10∶1的氯仿?甲醇溶液洗脱2倍柱体积，弃去，再以4∶1氯仿?甲醇溶液洗脱3倍柱体积，收集，回收溶剂，得残渣，待用；5)步骤4)残渣加水溶解，上中低压制备液相分离，以甲醇或乙腈溶液为流动相，收集去乙酰车叶草苷酸甲酯洗脱液和鸡矢藤次苷甲酯洗脱液，分别回收洗脱溶剂，残渣以水溶解，冷冻干燥，得去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯纯品。

【技术特征摘要】
1.一种提取去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取栀子药材，加65％-75％乙醇回流提取，浓缩醇提取液，加乙醇至含乙醇浓度为80％-90％醇沉16-24小时，过滤醇沉液，去醇，浓缩，得浓缩液；2)步骤1)浓缩液上D101或AB-8大孔树脂柱，以纯水洗脱，HPLC分析监测，收集目标洗脱液，减压回收，得浓缩液，调节pH至1-3，水浴加热30min，待用；3)步骤2)水浴加热后的洗脱液上D101或AB-8大孔树脂柱，先以纯水洗脱2倍柱体积，弃去，再以30％的醇洗脱3倍柱体积，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘武占，张则平，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：