本发明专利技术公开了一种用于预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗。由DNA疫苗和亚单位疫苗组成；所述DNA疫苗为含有序列表中序列2所示蛋白质的编码基因的重组表达载体；所述亚单位疫苗为序列表中序列2所示蛋白质。实验证明，本发明专利技术所提供的共免疫疫苗能增强免疫动物后的体液免疫反应，还能抑制过强的细胞免疫反应，有效抑制炎症反应，很好的保护哺乳动物的肺部组织及功能不因RSV的感染而被破坏。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗，特别涉及一种由DNA疫苗和亚单位疫苗共同组成的用于预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗。
技术介绍
呼吸道合胞病毒(RSV)属于副粘病毒科肺病毒属成员，为非节段性单股负链RNA病毒，分为A和B两个亚型。RSV病毒大小约120-300纳米，有包膜，由15222个核苷酸组成，编码10种主要蛋白，分别由三个跨膜蛋白(G、F和SH)、两个基质蛋白(M和M 2)、三个核衣壳蛋白(N、P和L)及两个非结构蛋白(NSl和NS2)构成。RSV是全世界范围内引起婴幼儿、免疫缺陷病人和老年人呼吸道感染、毛细支气管肺炎等急性下呼吸道感染的重要病原。美国1979 1997年的统计，每年因RSV感染导致下呼吸道疾病而住院和死亡的婴儿数分别为12.5万和450人，其中死亡率为2%。在我国，不但有RSV散发性感染，还发生过数次大规模爆性流行，2000 2002年间北京1402份婴幼儿患者中，有66.1 %的病毒性呼吸道感染是由该病毒引起的。1985 1992年期间先后在我国广州、山西、北京、以及河北和天津等地形成了 4次大流行。我国RSV流行主要以A亚型为主，但有的年份B亚型也可为主要优势株。因此，研制安全、有效的呼吸道合胞病毒疫苗是生命科学重大而急迫的问题。2001年世界卫生组织(WHO)已将开发安全有效的呼吸道合胞病毒疫苗列为21世纪需要优先解决的问题之一。 RSV疫苗的研制已有40多年的历史，但是至今仍然没有有效的、被批准使用的疫苗。目前研究的RSV疫苗主要包括灭活疫苗、减毒疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗几大类。20世纪60年代研制的福尔马林灭活疫苗(F1-RSV)，不仅不能预防RSV感染，反而再感染后使病情加重，甚至有的引起死亡，死者的肺组织内有T细胞浸润。通过对小鼠的研究已经确认F1-RSV诱生的T细胞亚群Th2-类细胞因子是加重病情的原因。随着F1-RSV疫苗研制的失败，人们开始通过人工诱变的方法构建减毒的RSV疫苗。从20世纪70年代至今，人工诱变RSV减毒株仍然没有应用于预防RSV的感染。人工诱变获得的减毒株存在较多的缺陷，并以遗传不稳定性为其主要缺点。亚单位疫苗和重组DNA疫苗是近年RSV疫苗研究的热点，主要以病毒表面糖蛋白F和G作为靶抗原。亚单位疫苗是将病毒抗原基因在大肠杆菌或酵母表达系统中进行蛋白质表达，提纯纯化后制成的。亚单位疫苗能够诱导较高水平的中和性抗体和保护抗体，降低RSV的感染率，但是由病毒引起的下呼吸道疾病的发病率没有明显的降低，这主要是由大量Th2型辅助性T细胞浸润肺部造成的。DNA疫苗又称核酸疫苗，它是将含有编码特定抗原蛋白质的基因序列克隆到合适的质粒载体上，制备成核酸表达载体，通过肌肉注射等方法将其导入机体内，通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，从而激发机体免疫系统产生针对外源蛋白质的特异性免疫应答反应。虽然DNA疫苗可以同时激发机体产生基于免疫球蛋白介导的的体液免疫反应和基于杀伤性T淋巴细胞介导的细胞免疫。但是其诱导的抗体水平，特别是中和抗体水平较低。虽然有研究报道，使用免疫增效剂可以在一定水平上提高DNA疫苗所激发的体液免疫反应，但是提升幅度有限。因此，对于RSV疫苗的开发工作，特别是开发一种既能诱导较高水平抗体，又能降低疫苗免疫后肺部T淋巴细胞大量浸润的新型疫苗制剂已经成为了迫在眉睫的研究重点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗。所述共免疫疫苗是由两种或两种以上疫苗混合而制成的疫苗。本专利技术所提供的预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗由DNA疫苗和亚单位疫苗组成；所述DNA疫苗为表达序列表中序列2所示蛋白质的编码基因的重组表达载体；所述亚单位疫苗为序列表中序列2所示蛋白质。在实际应用中，所述DNA疫苗和所述亚单位疫苗的使用质量配比为如下a)或b)或c):a) (I: 5)-(5: I)；b) (I: 2)-(2: I)；c) I: I 或 1: 2 或 2: I。所述重组表达载体中启动所述序列表中序列2所示蛋白质的编码基因转录的启动子是T7启动子，其核酸序列为5’ -TAATACGACTCACTATAGG-3’。在本专利技术的一个 实施例中，所述重组表达载体具体为在proVAX质粒的多克隆位点插入序列表中序列2所示蛋白质的编码基因所得到的重组质粒；所述多克隆位点具体为EcoR I 和 Xba I。在本专利技术的实施例中，在所述DNA疫苗中，序列表中序列2所示蛋白质的编码基因的编码序列具体如序列表中序列I的第7-708位所示，所述DNA疫苗命名为proVAX/G ;在所述亚单位疫苗中，序列表中序列2所示蛋白质由编码序列为序列表中序列3的第7-708位所示基因经原核表达得到，所述亚单位疫苗命名为His-G。在本专利技术的一个实施例中，进行所述原核表达的菌株具体为大肠杆菌BL21 (DE3)。其中，序列表中序列2由233个氨基酸组成。由序列2所示氨基酸序列组成的蛋白质在真核细胞中的编码基因如序列表中序列I的第7-708位所示(对应所述DNA疫苗)，序列I的第7-708位即为序列2所示蛋白质的编码序列。由序列2所示氨基酸序列组成的蛋白质在原核细胞(如大肠杆菌)中的编码基因如序列表中序列3第7-708位所示(对应所述亚单位疫苗)，序列3的第7-708位即为序列2所示蛋白质的编码序列。上述预防和/或治疗合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗在制备预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述预防和/或治疗合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗在制备具有如下1)-8)中任一所述功能的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围:I)提高哺乳动物的呼吸道合胞病毒特异性IgG抗体水平；2)提高哺乳动物的呼吸道合胞病毒特异性中和抗体水平；3)抑制哺乳动物的呼吸道合胞病毒表面糖蛋白G特异性T淋巴细胞增殖；4)诱导哺乳动物的呼吸道合胞病毒表面糖蛋白G特异性调节性T细胞的产生；所述调节性T细胞的表型为⑶4+⑶25-Foxp3+IL-10+ ；5)降低哺乳动物的呼吸道合胞病毒的病毒载量；6)抑制哺乳动物的炎症细胞的增殖；7)降低呼吸道合胞病毒感染哺乳动物所产生的呼吸阻力；8)降低呼吸道合胞病毒对哺乳动物肺部组织的损伤。所述炎症细胞为如下细胞中的至少一种:嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞。所述哺乳动物可为小鼠，在本专利技术的实施例中，所述小鼠具体为BALB/c小鼠。实验证明，用本专利技术所提供的预防和/或治疗合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗按照如下方法免疫小鼠:第0、15和30天，每只小鼠分别前后三次肌肉注射proVAX/G与His-G的混合物(共100 μ I)。结果显示，本专利技术所提供的预防和/或治疗合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗(proVAX/G和His-G)能够提高呼吸道合胞病毒表面糖蛋白G特异性IgG抗体水平；提高呼吸道合胞病毒特异性中和抗体水平；抑制呼吸道合胞病毒表面糖蛋白G特异性T淋巴细胞增殖；诱导呼吸道合胞病毒表面糖蛋白G特异性调节性T细胞(CD4+CD25Toxp3+IL-10+)的产生；降低呼吸道合胞病毒的病毒载量；抑制炎症细胞(嗜酸性粒细本文档来自技高网...
【技术保护点】
预防和/或治疗呼吸道合胞病毒感染所致疾病的共免疫疫苗，由DNA疫苗和亚单位疫苗组成；所述DNA疫苗为表达序列表中序列2所示蛋白质的编码基因的重组表达载体；所述亚单位疫苗为序列表中序列2所示蛋白质。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王宾，陈璇，俞庆龄，
申请(专利权)人：北京艾棣维欣生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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