本发明专利技术公开了一种基于表面增强拉曼光谱的尿液中克伦特罗的速测方法，采用二氯甲烷或乙酸乙酯作为提取溶剂，酸性水溶液和有机溶剂作为净化萃取溶剂对提取液进行液液萃取，以纳米金或纳米银胶体溶液为增强试剂，采用激光能量200mw的785nm激光源拉曼光谱对上机检测液进行扫描。以位移1258±2cm-1、1470±2cm-1、1601±2cm-1为判定克伦特罗的特征峰；以1450±2cm-1对应峰强进行归一化，1470±2cm-1对应峰强度结合线性曲线进行克伦特罗含量计算，定性和定量对尿液中克伦特罗进行快速检测。纳米金胶制备方法简单，前处理操作时间短、重复性好、灵敏度高，能实现现场快速检测，满足监管需求。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种尿液中克伦特罗的检测方法，尤其涉及一种。
技术介绍
克伦特罗是一种β -肾上腺素能受体激动剂类化合物(以下简称:β -受体激动剂)，在人医临床上常被用作平喘药物，用于调节支气管扩张和平滑肌松弛，治疗呼吸系统疾病。由于对动物具有一定的促进生长、提高瘦肉率的作用，而被称之为“瘦肉精”。农业部176号和1519号公告明确规定的禁止在养殖动物上使用克伦特罗，但仍有不法分子受利益驱使非法使用克伦特罗，国内外屡屡发生以克伦特罗为代表的“瘦肉精”中毒事件。为保障人民群众身体健康，对“瘦肉精”类药物非法使用的监管非常重要。目前，检测克伦特罗的方法主要有酶联免疫试剂盒(ELISA)、试纸条、液质联谱(HPLC-MS)、气质联用(GC-MS)等方法。其中，气相色谱-质谱法需要对克伦特罗进行衍生化处理，操作复杂，且衍生化反应多不稳定，检测灵敏度不高；液相色谱-串联质谱灵敏度高，但设备相对昂贵，且前处理复杂，检测时间长；现有的ELISA快速筛选法虽然较为简便，但该法受环境条件的限制，常常出现“假阳性”情况，给检测工作带来不便。SERS(Surface-enhanced Raman Spectroscopy,表面增强拉曼光谱)具有速度快、灵敏度高等特点，它能检测到吸附于金属表面的小分子化合物，给出丰富的分子结构信息，适合现场快速检测。有关克伦特罗等β -受体激动剂的SERS速测方法也有相关报道，如Izquierdo-Lorenzo 1.等曾报道利用SERS检测克伦特罗、沙丁胺醇等三种β _受体激动剂的标准溶液，发现其方法的可行性，但检测灵敏度不高(克伦特罗检测限70ng.mL-1),而且该报道没有研究在基质中克伦特罗等的SERS检测方法，无法满足实际监管的需求；GuichiZhu等利用SERS结合免疫的分析方法测定猪尿液中克伦特罗，方法灵敏度高(lpg.mL—1)，但该方法基于免疫学的原理，前期需要制备特异性抗体，周期较长，增强试剂制备方法较为复杂，检测周期较长。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种操作时间短、重复性好、灵敏度高、能实现现场快速检测的。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的:本专利技术的，包括步骤:A、样品前处理:采用二氯甲烷或乙酸乙酯作为提取溶剂，获得待测尿液的提取液，所述待测尿液与提取溶剂的体积比为1:1;采用酸性水 溶液和有机溶剂为净化萃取溶剂对所述提取液进行液液萃取，获得待测液，所述有机溶剂为二氯甲烷或乙酸乙酯；B、制备检测试剂:向纳米金胶体溶液或者纳米银胶体溶液中加入前处理后的待测液，加入酸性溶液调节体系PH < 7，随后加入含有N03_、Cr的凝聚剂，使纳米粒子聚集，涡旋混合均匀后，混合液为最后的上机检测液；C、定性检测:采用激光能量200mw的785nm激光源拉曼光谱对所述上机检测液进行扫描，以位移USSiZcm'HTOiZcm'ieOliZcnT1为判定克伦特罗的特征峰；D、定量检测:以ΗδΟ ΖαιΓ1对应峰强度进行谱图归一化，以HTOiZcnT1对应峰强度进行克伦特罗含量计算。由上述本专利技术提供的技术方案可以看出，本专利技术实施例提供的，采用二氯甲烷或乙酸乙酯作为提取溶剂，采用酸性水溶液和有机溶剂为净化萃取溶剂对提取液进行液液萃取，以纳米金胶溶液或者纳米银胶溶液为增强试剂，建立了尿液中克伦特罗的SERS快速检测方法，前处理操作时间短、重复性好、灵敏度高(lng.mL—1)，能实现现场快速检测，满足监管需求。附图说明 图1为本专利技术实施例中尿液中克伦特罗浓度为5ng.mL—1的拉曼光谱图；图2为本专利技术实施例中尿液中克伦特罗浓度为OUdjUOng.mL—1的拉曼光谱图；图3为本专利技术实施例中尿液基质中盐酸克伦特罗浓度与特征峰(HTOiZcnT1)强度线性关系示意图。具体实施例方式下面将对本专利技术实施例作进一步地详细描述。本专利技术的，其较佳的具体实施方式包括步骤:A、样品前处理:采用二氯甲烷或乙酸乙酯作为提取溶剂，获得待测尿液的提取液，所述待测尿液与提取溶剂的体积比为1:1;采用酸性水溶液和有机溶剂为净化萃取溶剂对所述提取液进行液液萃取，获得待测液，所述有机溶剂为二氯甲烷或乙酸乙酯；B、制备检测试剂:向纳米金胶体溶液或者纳米银胶体溶液中加入前处理后的待测液，加入酸性溶液调节体系PH < 7，随后加入含有N03_、Cr的凝聚剂，使纳米粒子聚集，涡旋混合均匀后，混合液为最后的上机检测液；C、定性检测:采用激光能量200mw的785nm激光源拉曼光谱对所述上机检测液进行扫描，以位移USSiZcm'HTOiZcm'ieOliZcnT1为判定克伦特罗的特征峰；D、定量检测:以ΗδΟ ΖαιΓ1对应峰强度进行谱图归一化，以HTOiZcnT1对应峰强度进行克伦特罗含量计算。所述步骤A包括以下任一种方法:方法一:准确量取2.0mL尿液，加入20uLl.0M的NaOH，2mL 二氯甲烷，涡旋提取30s, 12500rpm离心lmin,移取下层液2mL,加入2mL PH=3_4的HNO3水溶液,润旋离心,移取上清液2mL，加入20 μ L1.0M的NaOH溶液，2mL 二氯甲烷，涡旋离心，移取下层液加入2mLPH=3-4HN0S水溶液，涡旋离心，上层液为待测液；方法二:准确量取2.0mL尿液，加入20uLl.0M的NaOH，2mL乙酸乙酯，涡旋提取30s, 12500rpm离心lmin,移取上清液2mL,加入2mL PH=3_4的HNO3水溶液，祸旋离心，移取下层液2mL，加入20 μ L1.0M的NaOH溶液，2mL乙酸乙酯，涡旋离心，移取上层液加入2mLPH=3-4HN0S水溶液，涡旋离心，下层液为待测液。所述步骤B包括以下任一种方法:方法一:应用柠檬酸钠还原的方法合成纳米金胶体或者纳米银溶液，取纳米胶体溶液或者纳米银溶液300-600 μ L，依次加入200-300 μ L待测液，50-100 μ Ll%的KNO3溶液、50-100 μ Ll%的HNO3水溶液，涡旋混合均匀后，混合液为最后上机液；方法二:应用碳量子点合成纳米金粒子的方法合成纳米金胶体溶液，取纳米胶体溶液300-600 μ L，依次加入200-300 μ L待测液、50-100 μ Ll%的HNO3溶液，涡旋混合均匀后，混合液为最后上机液；所述纳米金粒径为50_60nm。所述步骤C中，光谱扫描时间10s、扫描次数2、平滑参数I。所述步骤D中，以HSOiZcnT1对应峰强度为100单位，进行谱图归一化，通过数据处理使光谱图基线平滑，以HTOiZcnT1对应峰强度进行克伦特罗含量计算。本专利技术利用纳米粒子结合拉曼光谱实现对尿液中克伦特罗的快速检测，样品前处理步骤简单(仅需简单的液液萃取)，每个样品检测时间少于5min ;灵敏度完全能满足目前监管的需要(本方法尿液中克伦特罗检测限达lng.mL-1);方法回收率高(70%以上);线性良好(R2=0.990);重复性良好(RSD ( 7%)，能实现对尿液中克伦特罗的现场快速检测。具体实施例，包括步骤:(I)样品前处理:方法一:准确量取2.0mL尿液，加入20uLl.0M的NaOH，2mL 二氯甲烷，涡旋提取30s, 12500rpm离心lmin,移取下层液2mL,加入2mL PH=3_4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于表面增强拉曼光谱的尿液中克伦特罗的速测方法，其特征在于，包括步骤：A、样品前处理：采用二氯甲烷或乙酸乙酯作为提取溶剂，获得待测尿液的提取液，所述待测尿液与提取溶剂的体积比为1：1；采用酸性水溶液和有机溶剂为净化萃取溶剂对所述提取液进行液液萃取，获得待测液，所述有机溶剂为二氯甲烷或乙酸乙酯；B、制备检测试剂：向纳米金胶体溶液或者纳米银胶体溶液中加入前处理后的待测液，加入酸性溶液调节体系PH＜7，随后加入含有NO3?、Cl?的凝聚剂，使纳米粒子聚集，涡旋混合均匀后，混合液为最后的上机检测液；C、定性检测：采用激光能量200mw的785nm激光源拉曼光谱对所述上机检测液进行扫描，以位移1258±2cm?1、1470±2cm?1、1601±2cm?1为判定克伦特罗的特征峰；D、定量检测：以1450±2cm?1对应峰强度进行谱图归一化，以1470±2cm?1对应峰强度进行克伦特罗含量计算。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：程劼，王石，苏晓鸥，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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