HLA-G同种型用于骨吸收相关疾病的治疗制造技术

HLA-G同种型在治疗或预防在其中观察到骨吸收的疾病中的新用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及HLA-G同种型作为限制骨吸收的试剂用于治疗例如骨质疏松症的一种新型用途。
技术介绍
主要组织相容性复合物(MHC，法文为CMH)抗原被分为几类:I类抗原(HLA-A、-B和-C)，其具有3个球形结构域(α 1、α 2和α3)，且其α 3结构域与β 2微球蛋白相关，II类抗原(HLA-DP、-DQ和-DR)和III类抗原(补体)。除了上面提到的抗原以外，I类抗原还包括其它的命名为非经典的I类抗原的(Ib类)抗原，并且，更具体地，是HLA-E、HLA-F和HLA-G (Carosella 等人，2008a)。HLA-G基因(也称作HLA-6.0基因)的核苷酸序列已被Geraghty等人(1987)描述了:其包括4396个碱基对并表现出与HLA-A、-B和-C基因的内含子/外显子组织同源的内含子/外显子组织。这种HLA-G基因包括8个外显子、7个内含子和一个非翻译3’端。其不同于编码I类抗原的其它基因，因为同相(en phase)翻译终止密码子位于外显子6的第二个密码子水平处；因而，此基因编码的蛋白的胞质区域比HLA-A、-B和-C蛋白的胞质区域短。Ishitani和Geraghty (1992)已经表明，HLA-G基因的初级转录物可以以几种方式被剪接，并生成至少3种不同的成熟mRNA =HLA-G初级转录物提供了 1200bp的完整拷贝G1、900bp的片段(G2)和600bp的片段(G3)。Gl转录物不包括外显子7，且对应于Ellis (1990)描述的序列，就是说，其编码含有信号序列、三个外部结构域、跨膜区和胞质序列的蛋白。G2mRNA不包含外显子3，就是说其编码在其中α 和α 3结构域直接连接的蛋白。G3mRNA既不含有外显子3又不含外显子4，就是说其编码在其中α I结构域和跨膜序列直接连接的蛋白。被用来产生G2抗原的剪接导致了腺嘌呤(A)(获自α I编码结构域)与腺嘌呤-胞嘧啶(AC)序列(源于α 3编码结构域)的结合，其导致AAC (天冬酰胺)密码子的产生，取代了存在于编码HLA-Gl中α 3结构域的序列5’位置中的GAC (天冬氨酸)密码子。用于产生HLA-G3的剪接并没有引起剪接区域中新密码子的形成。还已表明HLA-G mRNA的其它剪接形式的存在:不包含外显子4的G4转录物；G5转录物，其在外显子4和5之间包括内含子4，从而在此转录物的翻译期间引起阅读框的改变，特别是在内含子4的氨基酸21后出现一个终止密码子；G6转录物，其具有内含子4，但缺失外显子3 ;以及最后的G7转录物，其包含内含子2，从而在此转录物的翻译期间引起阅读框的改变，且在内含子2的氨基酸2后出现一个终止密码子(Kirszenbaum等人，1994和1995 ；Moreau 等人，1995 ;专利申请 EP0677582)。因而，至少有7种不同的HLA-G mRNA，其编码HLA-G的7种同种型，其中4个是细胞膜同种型(HLA-G1、-G2、-G3和-G4 )，以及3个可溶性同种型(HLA-G5、-G6和-G7 )(Carosella 等人，2008b)。HLA-G起初被描述为在胎盘屏障水平、在胎母界面处被滋养层所特异性剪接(Carosella等人，2008a) 。其最近还在胸腺、角膜、内皮前体、间质干细胞(也称作骨髓间质细胞或骨髓多能间质细胞，并命名为MSC或CSM)以及正常或肿瘤成骨细胞中检测到(Deschaseaux等人，2009a)。但是，事实上在身体的所有细胞中都检测到基础水平的HLA-GmRNA，其可被扩增，并在DNA脱甲基化剂、一些细胞因子如IFN(干扰素)、应激因子或缺氧的作用下被诱导翻译成蛋白(Carosella等人,2008a)。因而,在特定的条件下,如组织移植、某些肿瘤或炎症反应的发展时，HLA-G蛋白可以在正常条件下不表达HLA-G蛋白的组织中表达。在血液中，同时发现了从膜上脱离下来的膜同种型如HLA-GK其此后被称为HLA-Gls，对应于“HLA-G1脱落”)和其它可溶性同种型。迄今为止，HLA-G有别于其它I类HLA分子，比如:-其表达仅限于某些组织，-其展现出非常小的多态性(编码15个蛋白变体的44个等位基因)，这归因于众多沉默突变，以及-其诱导免疫耐受。若干机制可以解释这种免疫耐受:HLA-G通过其与ILT2 (CD85 j )和KIR2DL4(⑶158d)受体的结合抑制NK细胞的激活。ILT2也由单核细胞、树突状细胞、B和T淋巴细胞和巨卩遼细胞表达(Carosella等人,2008a ;Rouas_Freiss等人,2007)。通过结合ILT2受体，HLA-G能抑制T淋巴细胞(CD4+和CD8+)的增殖及其细胞毒性潜能并可诱导抑制或调节淋巴细胞的形成(Barrow 和 Trowsdale, 2006 ；Le Maoult 等人，2005 ；Naji 等人，2007a)。HLA-G还结合表达于骨髓类型细胞(即单核细胞和树突状细胞)上的ILT4 (⑶85d)。HLA-G与ILT2和/或ILT4的结合导致抑制了树突状细胞的成熟和耐受原类型的树突状细胞的产生。ILT2和ILT4受体是跨膜分子，其具有含有ITIM基序或“基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序”的长胞质片段。它们凭借这些蛋白的高度磷酸化、通过募集SHP-1或SHP-2磷酸酶诱导对细胞激活的抑制(Barr ow和Trowsdale, 2006)。在个体生命期间，构成骨骼的骨组织不断更新。此更新机制被称为骨重建。它通过骨形成和骨吸收之间精密调节的平衡而发生。然而，骨形成涉及由成骨细胞进行的骨基质(BM，法文为MO)的合成和沉积，骨吸收通过由破骨细胞进行的BM降解而发生(Cohen, 2006)。成骨细胞来自于间质干细胞。它们是存在于生长中的骨组织和骨衬中的单核细胞。它们以特有的方式表达胶原1(0011&1)、非特异性碱性磷酸酶(八^^)、1型甲状旁腺激素受体(PTH-Rl)、骨粘连蛋白(SPARC)、骨钙素和Osterix(无对应译文，法文为0st6rix)转录因子。成骨细胞然后成为嵌入BM的骨细胞,从而保证其维持(Deschaseaux等人,2009b)。破骨细胞是表达TRAP(“抗酒石酸磷酸酶”)蛋白的多核细胞。它们在可溶性RANKL因子(“NF-kB配体的受体激活因子”或TNFSF11)的作用下源自单核细胞系的细胞，可溶性RANKL因子可以由成骨细胞本身也可以由淋巴细胞类型的细胞所分泌(Duplomb等人，2007)。骨成型的脱调节(d6r6gulation)导致人类的一些病状(Cohen, 2006)。过度骨形成可以导致骨硬化病，而过度骨吸收是骨质疏松症(影响1900万欧洲人的疾病，包括1/3女性和1/8男性；在欧洲有150万人由于骨质疏松症而遭受骨折。数据来自欧洲健康第一(Health First Europe)协会)或者更罕见的佩吉特氏病或溶骨性肿瘤(来自乳腺癌或前列腺癌的骨转移)的原因。因此，鉴于上述情况，存在对用于治疗或预防骨重建功能障碍特别是用于治疗骨质疏松症的分子的需要。用于治疗骨质疏松症的主要分子是属于双磷酸盐家族的合成化学分子，其抑制破骨细胞的激活(如依替膦酸盐、氯膦酸盐、帕米膦酸盐、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·德沙索，L·桑塞贝，N·鲁阿弗雷斯，
申请(专利权)人：法国血液机构，原子能和能源替代品委员会，
类型：
国别省市：