高度灵敏的单克隆抗体残留物检测测定法制造技术

本发明专利技术涉及用于在监测产物遗留时检测生物技术产物残留物和/或用于在生物技术产物的制造中清洁验证的组合物和高度灵敏的方法。具体而言，本发明专利技术涉及免疫测定法，其中一种或多种捕获抗体或其抗原结合片段用于检测与生物技术产物生产相关的残留物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】高度灵敏的单克隆抗体残留物检测测定法交叉引用相关优先权 本申请要求2010年9月13日提交的美国临时申请系列号61/382，413的优先权利益，其在此处完整地通过引用并入本文。1.介绍 本专利技术涉及用于在监测产物遗留时检测生物技术产物残留物和/或用于在生物技术产物的生产中清洁验证的组合物和高度灵敏的方法。具体而言，本专利技术涉及免疫测定法，其中一种或多种捕获抗体或其抗原结合片段用于检测与生物技术产物生产相关的残留物。2.专利技术背景 工艺设备清洁验证对于良好制造程序(Good Manufacturing Procedure , “GMP”)合规性是需要的，并且这样的合规性意在确保治疗性产物符合它们意在具有或代表具有的质量和纯度特征。作为GMP合规性的部分，总有机碳(“T0C”)测定已经常规地用于验证清洁程序对于去除生物技术产物残留物的效率。在个别生产运行之间以及当不同产物之间切换生产场所时可以采用TOC测定。然而，TOC测定的重要限制在于，检测限值〈0.1 ppm对于非常低剂量产物如某些抗体治疗剂(其最大允许的遗留限值低于TOC检测限值)监测产物遗留和/或清洁验证可能是不适合的。除关于符合非常低剂量产物的问题以外，美国食品和药物管理局在2001年采用的关于人用药品注册的技术要求的协调的国际会议(International Conference OnHarmonization Of Technical Requirements For Registration Of Pharmaceuticals ForHuman Use, “ICH”)文件ICH Q7A以及加拿大卫生部指南-0028，都推荐开发用于监测产物遗留和/或清洁验证的活性药物成分(“API”)特异性测定。因为TOC测定不是API特异性的，而是无论来源地测量总有机碳，所以它不符合这些推荐。鉴于对于TOC测定的固有限制，更灵敏且API特异性的测定作为当监测产物遗留和/或用于清洁验证时检测生物技术产物残留物的可替代或补充的方法将是期望的。本专利技术通过引入用于检测痕量的核酸或蛋白残留物包括单克隆抗体残留物的一般分析测定(其可以用于监测产物遗留和/或用于清洁验证)来满足该需要。3.专利技术概沭 在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示存在生物技术产物残留物。在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示存在生物技术产物残留物，其中通过监测能够结合抗体-抗原复合物的标记的检测抗体的结合来实现抗体-抗原复合物的检测。在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示存在生物技术产物残留物，其中生物技术产物残留物的存在指示产物遗留。在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示存在生物技术产物残留物，其中生物技术产物残留物的存在指示清洁过程不足。在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示存在生物技术产物残留物，其中所述抗原源自核酸产物。在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示存在生物技术产物残留物，其中所述抗原源自酶；肽激素；多克隆抗体；人单克隆抗体；人源化单克隆抗体；嵌合单克隆抗体；单链抗体；Fab抗体片段；F (ab') 2抗体片段；Fd抗体片段；Fv抗体片段；分离的CDR ;双抗体；和免疫粘附分子。在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示·存在生物技术产物残留物，其中所述抗原源自抗体产物。在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示存在生物技术产物残留物，其中所述捕获抗体或其抗原结合片段选自:抗人IgG (H + L)、抗人IgG F(ab’)2、抗人IgG κ、抗人IgGX、抗小鼠IgG(H + L)抗体及其组合。在某些实施方案中，本专利技术涉及用于检测生物残留物的方法，其中将测试样品与包含两种或更多种具有不同结合特异性的捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且其中抗体-抗原复合物的检测指示存在所述基质包含的生物技术产物残留物。在某些实施方案中，具有不同特异性的捕获抗体将以特定比例存在于基质上。4.附图简沭 附图说明图1描述实验结果，在该实验中，使用SDS-PAGE和Western印迹测试选择的检测抗体(HRP缀合物)对于两种产物的识别:Ab #1，本研究中的主要目标，和Ab #2,作为暴露于清洁剂后测试识别的模型。将Ab #1和Ab #2与CIP-100 (2.5%)和CIP-200 (2.5%)在75° C孵育30分钟以模拟严谨的设施清洁条件。孵育后，中和测试样品。将完整分子和中和的处理样品上样至SDS-PAGE上，并且针对抗人IgG (H+L)进行印迹。该图特别描述了完整的(*)、CIP-100处理的(I)或CIP-200处理的(2) Ab #2和Ab #1的抗人IgG (H+L)的SDS-PAGE 和 Western 印迹。图2 描述了下列的 SDS-PAGE 分离:SeeBlue Plus2 STD (第 I 道)；Ab #1 (第 3道)；Ab #2 (第 4道)；Ab #11 (第 5 道)；Ab #3 (第 6 道)；Ab #13 (第 7 道)；Ab #9(第8道)；和SeeBlue Plus2 STD (第10道)。第3和9道是空白。图3描述了使用抗人IgG (H+L)抗体如图2中所概述进行的SDS-PAGE分离的Western印迹分析。图4描述了使用抗人IgG F(ab’) 2抗体如图2中所概述进行的SDS-PAGE分离的Western印迹分析。图5描述了使用抗人IgG λ抗体如图2中所概述进行的SDS-PAGE分离的Western印迹分析。图6描述了使用抗人IgG κ抗体如图2中所概述进行的SDS-PAGE分离的Western印迹分析。 图7描述了使用抗小鼠IgG (H+L)抗体如图2中所概述进行的SDS-PAGE分离的Western印迹分析。图8描述了基于Ab #1、Ab #2和Ab #1用于检测的灵敏度和适用性的组合，基于组合的Ab (如下文表5中所概述的)参考标准曲线。所有曲线用二次拟合具有0.9999的相关系数，并且每种曲线范围为0.25至8 ng/mL。图9描述了涉及建立本文所用的分析方法的线性的实验。分析方法的“线性”是其引发或直接或通过良好定义的数学转换与目的分析物的浓度成比例的测试结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.13 US 61/3824131.用于检测生物技术产物残留物的方法，其中将测试样品与包含对于所述产物残留物特异性的捕获抗体或其抗原结合片段的基质接触，并且抗体-抗原复合物的检测指示生物技术产物残留物的存在。2.权利要求1的方法，其中通过监测能够结合所述抗体-抗原复合物的标记的检测抗体的结合来实现所述抗体-抗原复合物的检测。3.权利要求1的方法，其中所述生物技术产物残留物的存在指示产物遗留。4.权利要求1的方法，其中所述生物技术产物残留物的量指示清洁过程的效率。5.权利要求1的方法，其中所述产物残留物源自核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：L杨，N拉马苏布拉曼延，
申请(专利权)人：ABBVIE公司，
类型：
国别省市：