本发明专利技术涉及生命科学和医学领域。具体地，本发明专利技术涉及癌症疗法。更具体地，本发明专利技术涉及溶瘤腺病毒载体以及包含所述载体的细胞和药物组合物。本发明专利技术还涉及用于治疗受试者的癌症的所述载体以及用于治疗受试者的癌症的方法。此外，本发明专利技术涉及在细胞中产生CD40L以及增强受试者的肿瘤特异性免疫应答和细胞凋亡的方法，以及本发明专利技术的溶瘤腺病毒载体用于在细胞中产生CD40L和在受试者中增强肿瘤特异性免疫应答和细胞凋亡，同时减少肿瘤相关免疫抑制的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生命科学和医学领域。具体地，本专利技术涉及癌症疗法。更具体地，本专利技术涉及溶瘤腺病毒载体以及包含所述载体的细胞和药物组合物。本专利技术还涉及用于治疗受试者的癌症的所述载体以及用于治疗受试者的癌症的方法。此外，本专利技术涉及在细胞中产生CD40L以及增强受试者的肿瘤特异性免疫应答和细胞凋亡的方法，以及溶瘤腺病毒载体用于在细胞中产生CD40L和增强受试者的肿瘤特异性免疫应答和细胞凋亡的用途。
技术介绍
癌症可利用手术、激素疗法、化学疗法、放射疗法和/或其它疗法来治疗，但在许多情况下，通常特征在于晚期的癌症不能用现有疗法来治愈。因此，需要新型癌细胞靶向方法，例如基因疗法。在过去20年中，基因转移技术一直处于严密的审查中。癌症基因疗法的目的是，向肿瘤细胞引入治疗性基因。引入靶细胞的此类治疗性基因可以例如修正突变的基因，抑制活性癌基因或对细胞产生额外的性质。适当的外源性治疗基因包括但不限于，免疫治疗性、抗血管生成性、化学保护性(chemoprotective)和“自杀”基因，并且可通过利用修饰的病毒载体或非病毒法(包括电穿孔、基因枪和脂质或聚合物包衣)将其引入细胞。最佳病毒载体的要求包括，发现特定靶细胞和在靶细胞中表达病毒基因组的高效能力。此外，最佳载体必须在靶组织或细胞中保持活性。在过去10年中，已开发了具有此类性质的病毒载体，例如，逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒(adeno-associated viral)载体已在生物医学中得到广泛研究。为了进一步改善对肿瘤的穿透性和抗肿瘤作用的局部放大，已构建了选择性溶瘤齐U，例如条件复制腺病毒。溶瘤腺病毒是用于治疗癌症的很有前景的工具，并且在临床试验中已显示良好的安全性和一定的功效。肿瘤细胞因病毒在肿瘤细胞中的复制而被溶瘤腺病毒杀死，复制的晚期导致数以千计的病毒体(virion)释放入周围肿瘤组织，有效地进行肿瘤穿透和血管再感染。由于病毒基因组的工程改变(该改变阻止在非肿瘤细胞中的复制)，因此肿瘤细胞允许病毒复制，然而正常细胞则避免了病毒复制。可通过在腺病毒El区域中产生部分缺失或通过使用组织或肿瘤特异性启动子(TSP)来将复制局限于肿瘤组织。此类启动子的插入可增强载体在靶细胞中的作用，并且外源组织或肿瘤特异性启动子的使用在重组腺病毒载体中是非常常见的。先前的研究已显示，人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子在大多数肿瘤和永生化细胞系中是高度活跃的，但在正常体细胞类型中是无活性的。hTERT是端粒酶的催化亚基并且用于在染色体复制过程中稳定端粒长度。先前已描述了利用hTERT启动子来控制腺病毒早期区基因的溶瘤腺病毒(参见，例如Huang, TG，等人，Gene Therapy2003; 10, 1241-1247; Ryan, PC.等人，Cancer Gene Therapy2004; 11，555-559; Irving 等人，Cancer Gene Therapy2004; 11, 174-185;Bauerschmitz GJ,等人，Cancer Res2008;68:5533-9)。然而，端粒酶除了在肿瘤细胞中表达外，还在其它具有无限增殖潜能的人细胞例如干细胞中表达。 大多数临床试验一直以来利用基于腺病毒5(Ad5)的早期腺病毒来进行。溶瘤腺病毒的抗肿瘤作用依赖于它们的基因递送能力。不幸的是，大多数肿瘤低表达主要的Ad5受体，因此已向Ad5衣壳(capsid)中引入修饰。例如，使用血清型3型的结(knob)的衣壳修饰已在卵巢癌中显示提高的感染性和良好效力(Kanerva A,等人，Clin CancerRes2002; 8:275-80; Kanerva A,等人，Mol Ther2002; 5:695-704; Kanerva A,等人，MolTher2003;8:449-58)。此外，由于Ad载体的纤突(fiber)和五邻体(penton)底座是细胞进入机制的至关重要的介体，因此可通过此类衣壳蛋白的遗传修饰来实现重组Ad载体的革巴向(Dmitriev 1.,等人 1998，Journal of Virology, 72, 9706-9713) 目前，在临床中使用的大部分溶瘤病毒由于关键病毒基因的若干缺失而在复制方面被高度减弱。此类病毒已显示优良的安全记录，但抗肿瘤功效仍然是有限的。然而，临床和临床前结果显示，利用未被武装的(unarmed)溶瘤病毒的治疗的免疫刺激不足以导致持续的抗肿瘤治疗性免疫应答。在这一点上，溶瘤病毒已被武装(bearmed)以更具免疫刺激性。此外，肿瘤内的病毒复制和免疫刺激蛋白的表达通过诱导细胞因子的产生和肿瘤抗原的释放而增强免疫系统(Ries SJ,等人，Nat Med2000;6:1128-33)。武装溶瘤病毒组合了常规基因递送的有利方面与能复制的试剂的效力。武装病毒的一个目的是，诱导针对允许病毒复制的细胞的免疫应答。如上文中所提及的，单独的病毒复制，尽管具有免疫原性，但通常不足以诱导有效的抗肿瘤免疫。为了增强治疗性免疫的诱导，已用刺激蛋白例如细胞因子武装病毒，以促进肿瘤抗原至抗原呈递细胞例如树突细胞的引入以及它们的刺激和/或成熟。免疫治疗性基因至肿瘤细胞的引入以及此外其蛋白质的翻译，导致免疫应答的激活和更高效的肿瘤细胞破坏。在这一点上，最相关的免疫细胞是天然杀伤细胞(NK)和细胞毒性CD8+T细胞。⑶40配体(⑶40L)是属于肿瘤坏死因子家族的II型跨膜蛋白质。⑶40L也称为⑶154或gp39，其主要在⑶4+T细胞上表达并且结合抗原呈递细胞(APC)的膜上的CD40 受体(Grewal IS 和 Flavell RA., Ann Rev Immunol 1998; 16:111-35; Roy M,等人，JImmunol 1993; 151:2497-510)。CD40在巨噬细胞和树突细胞(DC)上表达，在所述细胞上其被⑶40L激活，导致抗原呈递和细胞因子产生，随后导致T细胞引发(T-cell priming)和强先天性免疫应答(van Kooten C 和 Banchereau J., J Leukoc Biol2000; 67:2-17)。CD40L与其受体CD40之间的相互作用提供了触发T-淋巴细胞扩增的至关重要的共刺激信号(Grewal IS和Flavell RA, 1998, Annu Rev Immunoll998; 16:111-35)，且增加了 IL-12 的产量(其是在抗肿瘤免疫应答中衔接细胞毒性T淋巴细胞(CTL)所必需的)(Loskog AS,等人，Clin Cancer Res2005; 11:8816-21; Mackey MF,等人，J Immunol 1998; 161:2094-8)。先前的观察显示，重组可溶性蛋白⑶40L(rs⑶40L)在肿瘤细胞增殖的体外抑制(EliopoulosAG,等人，0ncogenel996; 13:2243-54; Tong Aff,等人，Clin Cancer Res2001; 7:691-703)和体内抑制(Eliopoulos AG,等人，Mol Cell Biol2000; 20:5503-15; Hirano A,等人，Bloodl999;本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.24 FI 20105988;2011.05.11 FI 201154531.一种溶瘤腺病毒载体,其包含 1)包含衣壳修饰的腺病毒血清型5型(Ad5)核酸主链， 2)位于El区域上游的编码肿瘤特异性人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子的核酸序列；和 3)替代E3区域中的缺失的腺病毒基因gpl9k/6.7K的编码人⑶40L的核酸序列。2.权利要求1的溶瘤腺病毒载体，其还包含选自E2、E4和晚期区域的一个或多个区域。3.权利要求1或2的溶瘤腺病毒载体，其包含下列区域:左ITR、部分El、pIX、pIVa2、E2、VA1、VA2、L1、L2、L3、L4、部分 E3、L5、E4 和右 ITR。4.权利要求3的溶瘤腺病毒载体，其中所述区域按5’至3’的方向依次排列。5.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其中野生型区域位于El区域的上游。6.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其中所述El区域包含病毒包装信号。7.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其中编码CD40L的核酸序列处于病毒E3启动子的控制之下。8.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其中编码CD40L的核酸序列与野生型人序列相异于一个核苷酸。9.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其中E4区域是野生型的。10.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其中所述衣壳修饰是Ad5/3嵌合体、整联蛋白结合(RGD)区域和/或硫酸肝素结合多聚赖氨酸修饰至纤突的插入。11.权利要求10的溶瘤腺病毒载体,其中所述衣壳修饰是Ad5/3嵌合体。12.权利要求10的溶瘤腺病毒载体，其中所述衣壳修饰是RGD-4C修饰。13.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其包含至少一个表达盒。14.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其仅包含一个表达盒。15.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体，其中所述载体能够在表达端粒酶的细胞中选择性复制。16.—种细胞,其包含权利要求1-15的任一项的腺病毒载体。17.一种药物组合物，其包含权利要求1-15的任一项的腺病毒载体。18.前述权利要求的任一项的溶瘤腺病毒载体或药物组合物，其用作原位癌症疫苗。19.权利要求1-15的任一项的腺病毒载体,其用于治疗受试者的癌症。20.一种治疗受试者的癌症的方法，其中所述方法包括给受试者施用权利要求1-15或17的任一项的载体或药物组合物。21.权利要求19-20的腺病毒载体或方法，其中所述癌症选自:鼻咽癌、滑膜癌、肝细胞癌、肾癌、结缔组织的癌症、黑素瘤、肺癌、肠癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、脑癌、喉癌、口癌、肝癌、骨癌、胰腺癌、绒毛膜癌、胃泌素瘤、嗜铬细胞瘤、催乳素瘤、T细胞白血病/淋巴瘤、神经瘤、VHL病、卓-艾综...
【专利技术属性】
技术研发人员：I·迪亚科努，S·佩索宁，A·海明基，V·切鲁洛，
申请(专利权)人：昂克斯治疗有限公司，
类型：
国别省市：
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