介导应激反应的肽抑制剂制造技术

本发明专利技术涉及介导应激反应的肽抑制剂，更特别地涉及真核细胞中能够抑制细胞应激反应和免疫应激反应的肽。本发明专利技术提供了利用单克隆抗DNA抗体识别的肽治疗人变性性疾病和炎症的组合物和方法，所述肽具有抗细胞凋亡和抗炎症活性。本发明专利技术还提供了抗体分子及其用于分离所述肽的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及由单克隆抗DNA抗体识别的肽，所述肽能够抑制真核细胞中的细胞应激反应和免疫应激反应，从而可用于治疗人变性性疾病和炎症。
技术介绍
细朐凋亡细胞凋亡，或程序性细胞死亡，对于正常生物过程包括组织胚胎发生、组织稳态的维持、多细胞生物体的细胞发育、病毒感染细胞的消除及免疫系统的发育(Ellis等，1991)具有根本的重要性。这是与变性性死亡或坏死根本不同的细胞死亡类型，因为此细胞死亡类型是基因介导的细胞自毁的主动过程，在某些情况下，具有生物意义的稳态功能。 p53p53蛋白最初被鉴定为肿瘤相关抗原，是肿瘤抑制基因的广物，其可以抑制突变或异常细胞的生长(Baker等，1990)。认为功能性p53可以检测出DNA损伤(Lee等，1995)及随后诱导异常细胞的DNA修复(Kastan等，1991)、生长停滞(Kuerbitz等，1992)或细胞凋亡(Yonish-Rouach等，1991)。具体地,p53通过消除细胞群的遗传损伤细胞而调节基因组稳定性，且其主要功能之一为预防肿瘤形成。p53蛋白具有至少两个DNA结合位点:(1)ρ53蛋白的核心，其与p53反应基因的启动子区中的DNA序列特异性相互作用(el-Deiry 等，1992);及(2)p53蛋白的C末端，其通常可识别损伤DNA的常见特征(Lee等，1995 ;Foord等，1991)。p53蛋白是一种转录因子，其可特异性结合p53依赖性基因调节序列的共有位点(el-Deiry等，1992)。在与结合特定DNA调节位点有关的主要序列编码结构域中p53基因的突变导致肿瘤抑制减少。因此，不足为奇，大部分天然的人肿瘤带有突变的p53 (Hollstein等，1991)。p53具有短的半衰期，并因此，在细胞中持续合成和降解。然而，当细胞经受应激时，p53被稳定。诱导p53稳定的细胞应激的例子如下:a)DNA损伤，例如由UV(紫外线)辐射、细胞突变、化疗、及放疗引起的损伤；b)体温过高；c)缺氧；及d)某些化疗药物引起的微管脱调节，如使用紫杉醇或长春花碱类的治疗。应激活化的p53诱导级联事件，导致应激细胞的生长停滞或细胞凋亡，从而防止异常细胞的过度生长和肿瘤形成(Ko，1996)。然而，严重应激之后ρ53的过度活化对生物体有害，这是因为组织功能可被过度的细胞凋亡损害(Komarova，2001)。具体地，放疗和化疗显示有严重的副作用，例如对淋巴和造血系统及肠上皮的严重损伤，限制了这些治疗的效果。其他副作用，如脱发，也是由P53介导并进一步减弱癌症治疗的效果。因此，为消除或减轻在正常组织中与癌症治疗相关的不良副作用，在P53缺陷的肿瘤的治疗过程中抑制正常组织中P53的活性并由此保护正常组织是有益的。已认为P53的失活是非期望和不需要的事件，且已付出可观的努力通过恢复p53功能而促进癌症治疗。然而，P53恢复或模拟会引起上述在化疗或放疗过程中损伤正常组织细胞有关的问题。在癌症治疗过程中，这些正常细胞经受应激，使细胞中的P53引起程序性死亡。癌症治疗然后杀死肿瘤细胞和正常细胞。美国专利N0.6，593，353揭露了 p53抑制剂用于p53介导的疾病、病症及损伤的治疗。美国专利N0.6，420，136揭露了通过添加一种增强或抑制p53的生物化学活性的蛋白质而调节细胞中P53蛋白的活性的方法。美国专利N0.6，630，584揭露了一种可识别暴露于突变体而非野生型p53上的抗原表位的单链抗体，和编码所述单链Fv的DNA分子，含有所述抗体的药物组合物，以及使用所述药物组合物的治疗方法。p53和应激相关的反应p53活性对生物体的不利作用不限制于癌症治疗。p53可被损伤(如烧伤)、自然发生的疾病(如发烧有关的体温过高，及受阻断的血液供应有关的局部缺氧，中风，及局部缺血)和细胞老化(如成纤维细胞老化)及癌症治疗相关的多种应激活化。因此，临时的P53抑制还可在例如下述情况中是治疗上有效的:(a)减轻或消除中枢神经系统中的p53依赖性神经元死亡，即脑和脊 髓损伤；(b)在移植前保护组织和器官；(c)骨髓移植宿主的准备 '及(d)减轻或消除如癫痫发作过程中的神经元损伤。另外，各种变性性疾病，包括阿耳茨海默氏病(Alzheimer' s disease)、帕金森氏病(Parkinson, s disease)、缺血性中风(ischemic stroke) (Mattson2001 ；Martin,2001)、青光眼(Nickells，1999)、创伤后的继发性变性(Raghupathi，2000)、心肌梗塞(Haunstetter, 1998),与应激反应中敏感组织的过度细胞死亡有关。因此，应激相关的细胞死亡的临时抑制可预防和治疗变性性疾病(Komarova，2001)。p53的DNA结会结构域的单克隆抗体DNA抗体为许多自身免疫性疾病，特别是系统性红斑狼疮(SLE)且尤其是狼疮性肾炎所特有。然而，对于自身免疫性疾病中抗DNA抗体的流行，目前还没有普遍接受的解释。对于DNA的免疫看上去是由一种抗原(Radic等，1994)驱动，但因为哺乳动物的DNA通常不会诱导抗DNA免疫反应,所以自身DNA不太可能是驱动的抗原(Pisetsky, 1996)。据报导，使用单克隆抗体的免疫，可能通过基于免疫单克隆抗体的可变区中独特型决定簇的抗独特型连接性，可诱导延伸超越抗体的特异性的免疫反应。根据独特型抗体网络术语，Abl是第一抗体，该抗体结合抗原，Ab2是Abl的抗独特型抗体。因为抗原和Ab2均可与Abl结合，Ab2的可变区可模拟抗原的构象。Ab3是Ab2的抗独特型抗体。由于结构互补性链，Abl和Ab3可具有对于原始抗原的相似特异性。PAb-421抗体是与p53的C末端DNA结合结构域反应的原型单克隆抗体。抗p53PAb-421抗体的重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vl)已有资料描述(见W098/56416)。由于PAb-421抗体在体外可活化p53的DNA结合，建议其用于癌症治疗(见W094/12202)。专利技术人先前曾报道，使用PAb-421免疫小鼠可诱导也结合DNA的抗独特型抗体的形成(Herkel等，2000 ;和W000/23082)。这些单克隆抗独特型抗体中的两种，Id1-1和Id1-2，模拟p53调节结构域的结合特性并与PAb-421和双链和单链DNA特异性反应。本专利技术的专利技术人认为(在本专利技术优先权日之后)损伤DNA具有由p53和Id1-1和Id1-2抗体识别的化学上定义的结构(Herkel等，2004)。现有技术中尚未有教导或表明可能使用这些抗独特型抗体鉴定具有抗细胞凋亡和抗炎症特性的新型肽。尚需要新型组合物，所述新型组合物应可特异、安全及有效减轻正常组织中的细胞应激反应和免疫应激反应，从而减轻应激相关的变性性疾病和应激诱导的炎症的严重性。
技术实现思路
本专利技术提供了组合物和方法，其包括用于抑制对于多种应激相关疾患的细胞应激反应和免疫应激反应的肽。本专利技术的肽显示有抗细胞凋亡和抗炎症活性，由此增加暴露于应激的细胞或组织的细胞存活率。尽管p53的抗体用于诱导抗肿瘤免疫的用途已有描述，本专利技术证明了与抗p53抗体发生免疫反应的抗独特型抗体也可用于定义用于预防或减少细胞死亡的治疗。意想不本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的肽，所述分离的肽为SEQ?ID?NO：1所列的分离的肽，其中所述肽含有可与针对抗p53抗体的抗独特型抗体发生免疫反应的抗原表位，其中所述抗p53抗体可与p53的C末端的至少部分调节结构域发生免疫反应，并且其中所述肽表现有抗细胞凋亡活性。

【技术特征摘要】
2004.08.23 US 60/603,2551.一种分离的肽，所述分离的肽为SEQ ID NO:1所列的分离的肽，其中所述肽含有可与针对抗P53抗体的抗独特型抗体发生免疫反应的抗原表位，其中所述抗p53抗体可与p53的C末端的至少部分调节结构域发生免疫反应，并且其中所述肽表现有抗细胞凋亡活性。2.根据权利要求1所述的分离的肽，所述分离的肽为SEQID NO:1所列的分离的肽。3.—种药物组合物，其含有作为活性成分的根据权利要求1或2所述的肽。4.根据权利要求1或2所述的肽在制备用于治疗需要的受治疗者的细胞凋亡相关的变性性疾病或病症的药物中的用途。5.根据权利要求4所述的用途，其中所述受治疗者患有肿瘤性疾病并正经受用于治疗癌症的化疗和/或放疗。6.根据权利要求4所述的用途，其中所述疾病或病症选自:阿耳茨海默氏病、帕...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰尼斯·赫克尔，艾润·R·科恩，瓦达·罗特，安斯哥·W·洛思，纳塔·艾瑞兹，艾维赛伊·米姆兰，纳阿曼·凯姆，
申请(专利权)人：维兹曼科学研究所耶达研究与发展有限公司，
类型：发明
国别省市：