靶向连接蛋白的反义化合物及其使用方法技术

本发明专利技术提供了靶向连接蛋白的反义化合物及其使用方法。本发明专利技术提供了用于调节连接蛋白活性的方法以及组合物，包括例如，用于术后、外伤，或组织工程应用。这些化合物以及方法可在治疗上，例如，用来降低与疾病和病症有关的不良作用的严重性，其中直接细胞间通讯的局部破坏是所希望的。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术披露的内容涉及和描述利用化合物来调节间隙连接相关的蛋白质表达的试剂、组合物以及方法。这些试剂、组合物、以及方法可用于，例如，体内和体外组织工程，包括例如在皮肤中、角膜组织中、以及与眼有关的外科手术。
技术介绍
由于生病或损伤引起的组织或器官衰竭是世界范围内的主要健康问题，除了进行器官或组织移植外，很少有完全康复的选择。但是，寻找合适供体的难题意味着这种选择对于大多数患者来说是不可利用的。目前正在研究用作替代的组织工程或重建，由此形成合成或半合成组织或器官仿制品，其是全功能性的或者生长为希望的功能性。尤其是这种技术变得日益重要的一个领域是眼角膜。角膜移植是世界范围内进行的最常见形式的固体器官移植。仅在美国和英国每年就进行约80，000例。诸如屈光角膜切除术(PRK)和激光原位角膜磨削术(LASIK)的用来矫正近视的屈光性手术(refractivesurgery)的流行，导致了用于移植的合适角膜的短缺，这些角膜用于手术或疾病过程后的组织重建以及用于体内组织操作处理以设计变化(engineer change)。另外,大约5%有激光手术经历的患者体验到意外的结果。角膜是透明的组织，其包括眼睛外膜的中部六分之一。其一致的结构和功能为眼睛提供了清晰的折射界面、抗张强度，并且保护眼睛免于外部因素。角膜由三个不同的主要细胞层构成:上皮、 间质、以及内皮(Pepose, J.S.et al., “The cornea;Adler’ sPhysiology of the eye: Clinical application，，，9th ed.St.Louis:Mosby YearBook, 1992, 29-47;Spencer, ff.H., “The cornea;Ophthalmic Pathology:an atlas andtextbook”，4th ed.，Philadelphia:W.B.Saunders C0.，1996，157-65)。另外，后弹性膜(Descemet’s membrane)、鲍曼层(Bowman’s layer)、以及基底膜是以一些方式来源于这些主要细胞层之一的结构。角膜上皮是直接接触外部环境的层。它是一种分层鳞状、非角质化的结构，在鼠和人体中，厚度范围分别是40到ΙΟΟμπι。其包括:通常由两到三层扁平鳞状细胞形成的表面区、由两或三层多面翼细胞(polyhedral wing cell)形成的中间区、以及由单排柱状细胞构成的基底区。层状角膜上皮的特征是作为“紧密”离子转运功能的合胞体(syncitium)，其用作眼表面的保护性屏障以及附属液体分泌层，该分泌层有助于角膜内皮对间质水合的调节，并因此有利于保持角膜的透明。已证实角膜上皮具有的独特和专一化性质对作为眼睛主要折射元件的角膜的运转(operation)来说是必需的。因此不管任何环境应力下保持其层状结构就很重要。角膜表面的外伤特别普遍；例如，小擦伤、眼睛感染和疾病、化学或机械意外事故以及手术实施都会损伤角膜。角膜外伤伤口愈合后的一个主要并发症是由于组织重新形成(reorganization)而丧失视敏度。有眼愈合问题的危险的患者包括那些经过手术的人。这样的手术的实例包括但不限于有或没有晶状体置换的白内障摘除术、诸如穿透性角膜移植术(PKP)的角膜移植或其它穿透性手术、准分子激光屈光性角膜切除术、青光眼滤过术、放射状角膜切除术、以及用来矫正屈光或替换晶状体的其它类型手术。角膜提供了外部光学平滑面(external optically smooth surface),以将光传送到眼中。手术破坏了将角膜固定为其标准构型的力。对白内障患者，在边缘区进行全部厚度的手术切口。角膜在其愈合时收缩，从而引起组织的局部变形以及受影响区的视野内的伴随变形(散光)。其它角膜中的手术伤口会引发伤口愈合过程，其引起角膜曲率的预定局部移动。这些技术中最为广泛知晓的是放射状角膜切开术(RK)，其中，产生了几个部分厚度切口而引起中心角膜扁平化。但是，这种技术由于缺乏可预知的结果和视力上的显著波动(两者都与伤口愈合的性质和程度有关)而受限(Jester et al.，Cornea(1992) 11:191)。例如，在大多数RK患者中观察到在初始视力 提高中具有伴随的退化的角膜组织的外围隆起中的复位(reduction) (McDonnell and Schanzlin, Arch.0phthalmol.(1998)，106:212)。角膜中的伤口愈合也很缓慢，并且不完全愈合往往与视敏度的不稳定性有关(具有从早晨到夜晚视力上的波动，以及在超过几星期到几个月的时间发生飘动(drifting)视敏度)，这可能是34%或更多进行过放射状角膜切开术的患者手术后一年抱怨波动视力的原因(Waring et al., Amer.J.0phthalmol.(1991) 111: 133)。同样，如果角膜伤口未能彻底愈合，那么可能会发生伤口“裂开”，从而会导致渐进的远视作用。多达30%经过RK手术的患者遭受与伤口裂开有关的远视飘移之苦(Dietz et al.,Ophthalmology(1986)93:1284)。外伤后的角膜再生较复杂并且还未很好地被理解。其涉及三种组织的再生:上皮、间质以及内皮。三种主要的细胞间发信号的途径被认为可以调节组织再生:一个通过生长因子(Baldwin, H.C.and Marshall, J., Acta Ophthalmol.Scand., (2002) 80:238-47)、细胞因子(Ahmadi, A.J.and Jakobiec, F.A., Int.0phthalmol.Clinics, (2002)42(3):13-22)以及趋化因子(chemokine) (Kurpakus-ffheater, M, etal., Biotech.Histochem, (1999) 74:146-59)来介导；另一种通过细胞基质相互作用来介导(Tanaka, T., et al., Jpn.J.0phthalmol., (1999) 43:348-54);以及另一种通过间隙连接和通道形成蛋白的连接蛋白家族来介导。间隙连接是细胞膜结构，其有利于直接的细胞间通讯。间隙连接通道由两个连接子形成，每个连接子由六个连接蛋白亚单位组成。每个六聚体连接子与相对膜中的连接子对接以形成单个间隙连接。可在整个身体中发现间隙连接通道。诸如角膜上皮的组织，例如，具有六到八个细胞层，然而在不同层中表现不同的间隙连接通道，其中在基底层中为连接蛋白-43以及从基底层到中部翼细胞层为连接蛋白-26。总体来说，连接蛋白是一种蛋白质家族，通常根据它们的分子量来命名或基于种系发生分为α、β以及Y子类。到目前为止，确定了 20个人类和19个鼠类同种型(isoform) (ffillecke,K.et al., Biol.Chem.，(2002) 383，725-37 )，这可能表示每个不同的连接蛋白可以进行功能专化。不同组织和细胞类型具有连接蛋白表达的特征模式并且已表明诸如角膜的组织在损伤或移植以后会改变连接蛋白的表达模式(Qui, C.et al.，(2003)Cur本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗受治疗者的角膜穿透性眼外伤的药物组合物，包括连接蛋白43下调量的连接蛋白43反义化合物。

【技术特征摘要】
2003.12.03 NZ 5299361.一种用于治疗受治疗者的角膜穿透性眼外伤的药物组合物，包括连接蛋白43下调量的连接蛋白43反义化合物。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述眼外伤为化学外伤。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述眼外伤为机械外伤。4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述眼外伤导致角膜上皮损伤。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述连接蛋白43反义化合物被给予具有羊膜移植的受治疗者。6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述反义化合物选自包括反义寡核苷酸和反义多核苷酸的组。7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，所述反义化合物包括选自SEQID NO: 1-3的核酸碱基序列。8.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，所述反义化合物靶向核酸分子的至少8个核酸碱基，其中所述核酸 分子编码具有SEQ ID NO: 12的核酸碱基序列的连接蛋白。9.根据权利要求1-8中任一项所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是长度在15和35个核酸碱基之间的反义寡核苷酸。10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是包括天然存在的核酸碱基和未修饰的核苷间键的反义寡核苷酸。11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是包括至少一种修饰的核苷间键、至少一种修饰的糖部分、和/或至少一种修饰的核酸碱基的反义寡核苷酸。12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中，所述修饰的核苷间键是硫代磷酸酯键。13.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是通过表面方式来给予。14.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是通过局部方式来给予。15.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是通过眼内注射来给予。16.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物用普卢兰尼克凝胶配制。17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中，所述普卢兰尼克凝胶包括普卢兰尼克F127。18.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物被给予一次。19.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，所述反义化合物被给予多于一次。20.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述受治疗者为人类。21.一种用于治疗受治疗者的眼的后段病症的药物组合物，包括连接蛋白43下调量的连接蛋白43反义化合物。22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述后段病症包括黄斑裂孔、黄斑变性、视网膜撕裂、糖尿病视网膜病变、和玻璃体视网膜病变。23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中，所述后段病症是黄斑变性。24.根据权利要求22所述的药物组合物，其中，所述后段病症是糖尿病视网膜病变。25.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述反义化合物选自包括反义寡核苷酸和反义多核苷酸的组。26.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述反义化合物包括选自SEQIDNO: 1-3的长度不超过40个核苷酸的核酸碱基序列。27.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述反义化合物靶向核酸分子的至少8个核酸碱基，其中所述核酸分子编码具有SEQ ID NO: 12的核酸碱基序列的连接蛋白。28.根据权利要求21-27中任一项所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是长度在15和35个核酸碱基之间的反义寡核苷酸。29.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是包括天然存在的核酸碱基和未修饰的核苷间键的反义寡核苷酸。30.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物是包括至少一种修饰的核苷间键、至少一种修饰的糖部分、和/或至少一种修饰的核酸碱基的反义寡核苷酸。31.根据权利要求30所述的药物组合物，其中，所述修饰的核苷间键是硫代磷酸酯键。32.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述反义化合物适合于通过眼内注射来给予。33.根据权利要求32所述的药物组合物，其中，所述反义化合物被给予一次。34.根据权利要求32所述的药物组合物，其中，所述反义化合物被给予多于一次。35.根据权利要求21所述的药物组合物，其中，所述受治疗者为人类。36.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物包括选自SEQID NO:1的长度不超过40个核苷酸的核酸碱基序列。37.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物与具有选自SEQIDNO: 1-3的序列的多核苷酸具有至少80%的同源性。38.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物与具有选自SEQIDNO: 1-3的序列的多核苷酸具有至少90%的同源性。39.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物与具有选自SEQIDNO: 1-3的序列的多核苷酸具有至少95%的同源性。40.根据权利要求26所述的药物组合物，其中，所述反义化合物与具有选自SEQIDNO: 1-3的序列的多核苷酸具有至少97%的同源性。41.一种用于在受治疗者中促进与眼科操作有关的角膜伤口愈合的药物组合物，包括普卢兰尼克酸或凝胶、以及连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物，其中所述连接蛋白43反义化合物或连接蛋白31.1反义化合物以结合所述操...

【专利技术属性】
技术研发人员：维尔达·劳克斯，科林·R·格林，
申请(专利权)人：科达治疗新西兰有限公司，
类型：发明
国别省市：