一种胎儿7号染色体异常疾病的筛查试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种胎儿7号染色体异常疾病的筛查试剂盒，它包括检测孕妇血清或尿液PLGF水平的试剂。本发明专利技术还公开了检测孕妇血清或尿液PLGF水平的试剂在制备胎儿7号染色体异常筛查试剂中的用途。本发明专利技术试剂盒可以对胎儿的7号染色体是否异常进行评估，临床应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种试剂盒，特别涉及一种胎儿7号染色体异常疾病的筛查试剂盒。
技术介绍
人类的7号染色体是23对染色体的其中之一，正常状况下每个细胞拥有两条，此染色体含有约1000到1400个基因，占细胞内所有DNA的5%到5.5%。7号染色体的异常，如臂间倒位，可产生不平衡的配子，进而导致Turner综合征。Turner综合征患者在出生的头2 3年生长速度正常，以后就低于正常女性，在青春发育期，正常女性有一个生长加速，而Turner综合征患者仍生长低下，正常女性大约15 16岁身高基本停止生长，而Turner综合征缓慢生长至18岁左右。Turner综合征成人平均身高仅139.1cm，生长早期应用基因重组人生长激素，可以提高其终身高。因此，在怀孕早期进行检测，确定胎儿的7号染色体是否异常对胎儿出生后的及时治疗具有极为重要指导意义。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种胎儿7号染色体异常疾病的筛查试剂盒，以及检测孕妇血清或尿液PLGF水平的试剂在制备胎儿7号染色体异常疾病筛查试剂中的用途。本专利技术胎儿7号染色体异常疾病的筛查试剂盒，它包括检测孕妇血清或尿液PLGF水平的试剂。其中，所述试剂为ELISA检测用试剂。所述ELISA检测用试剂为ELISA直接法、ELISA间接法、ELISA双抗体夹心法或者ELISA竞争法检测用试剂。所述ELISA双抗体夹心法检测用试剂包括抗人PLGF抗体、人PLGF标准品、ELISA检测用酶和ELISA检测用底物。优选地，所述抗人PLGF抗体包括抗人PLGF单克隆抗体和生物素标记的抗人PLGF多克隆抗体；所述ELISA检测用酶是辣根过氧化物酶标记链霉亲和素；所述ELISA检测用底物为TMB。本专利技术还提供了检测孕妇血清或尿液PLGF水平的试剂在制备胎儿7号染色体异常疾病筛查试剂中的用途。其中，所述检测孕妇血清或尿液PLGF水平的试剂为ELISA检测用试剂。所述ELISA检测用试剂为ELISA直接法、ELISA间接法、ELISA双抗体夹心法或者ELISA竞争法检测用试剂。所述ELISA双抗体夹心法检测用试剂包括抗人PLGF抗体、人PLGF标准品、ELISA检测用酶和ELISA检测用底物。优选地，所述抗人PLGF抗体包括抗人PLGF单克隆抗体和生物素标记的抗人PLGF多克隆抗体；所述ELISA检测用酶是辣根过氧化物酶标记链霉亲和素；所述ELISA检测用底物为TMB。本专利技术筛查试剂盒和方法可以有效筛查胎儿的7号染色体是否异常，并且操作简单，仅需对孕妇进行血液或尿液检查，患者依从性高，具有良好的应用前景。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。具体实施例方式实施例1样本采集1、采集对象:2011年10月-2012年4月在四川大学华西第二医院门诊及成都中医药大学第二附属医院门诊就诊的孕早期孕妇共35例。2、早期妊娠诊断标准:参考全国高等医学院校教材《妇产科学》第7版记载的方法(包括①停经史；@HCG阳性；③确诊为宫内妊娠(B型超声见到宫腔内有妊娠囊)。3、纳入标准:①符合上述诊断标准者；②孕周:5周-13+6周；③知情同意，志愿受试。4、排除标准:有心血管、肝、肾和造血系统等并发症，或其他原发性疾病及精神病患者。5、脱落标准:①纳入后发现不符合纳入标准或伴有排除标准的病例予以剔除因其他原因失访的病例患者自行退出；④纳入后发现无法从受试者处获得真实、全面的临床资料。6、样本人口特征:纳入孕妇年龄范围21岁-43岁，平均年龄31.96±6.1岁。7、胎儿7号染色异常检测方法:羊水穿刺后G显带分析。检测结果:34例正常，I例为7号染色体臂间倒位。8、样本采集(I)血液样本:采用含有EDTA的试管采集孕妇静脉血(空腹)4ml,经4°C低温离心(4000rpm, IOmin)后将其上清液，编号保存于_80°C冰箱冷冻待测。(2)尿液样本:留取受试者中段尿6ml，经4°C低温离心(4000rpm, IOmin)后将其上清液，编号保存于_80°C冰箱冷冻待测。实施例2PLGF水平的检测方法1、主要仪器(I)酶标仪:Molecular Devices 公司，Spectra Max5(2)冷冻离心机:BECKMAN 公司，AllegraTMMR(3)_2CTC冰箱:Electrolux 公司(4)超低温冰箱:Thermo 公司，SK501(5)电热恒温培养箱:上海森信实验仪器有限公司，DRP-91622、实验试剂及材料(I) Capture Antibody:鼠抗人 PLGF 单克隆抗体 Human PLGFAntibody (Monoclonal Mouse IgGl),购自 R&D 公司，MAB264 ;(2) Detection Antibody:生物素标记的羊抗人PLGF多克隆抗体HumanPLGFBiotinylated Antibody (Ployclonal Goat IgG)，购自 R&D 公司，BAF264 ;(3)PLGF 标准品:重组人 PLGF Recombinant Human PLGF,购自 R&D 公司，264-PG-10 ；(4)辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素Streptavidin-horseradish peroxidase:R&D 公司，DY998 ；(5)TMB:Sigma 公司，T0440-1L ;(6) PBS:自配，ρΗ7.4，137mM NaCl, 2.7mM KCl, 8.1mM Na2HPO4,1.5mMKH2P04, pH7.2-7.4, 0.2 μ m filtered ；(7) Tween-20:上海生工； (8)包被缓冲液:自配，ρΗ9.6、50mM 碳酸盐缓冲液，Na2CO3L 59g，NaHC032.93g，加蒸馏水至IL ；(9)洗涤液:自配，PBS-T (PBS，含 0.02%Tween-20)(10)终止液:自配，2MH2S04 ；(11)脱脂奶粉:伊利集团；(12)牛血清白蛋白(BSA):罗氏公司；(13)胎牛血清(FBS):GIBC0 公司；(14)可拆式 96 孔 ELISA 板:C0STAR 公司。3、实验方法(I)将所测样本放在室温下复苏后，再进行检测；(2)包被 Capture Antibody, 4 μ g/ml, 100 μ 1/well, 4°C放置过夜(约 16_20h);(3)3%BSA溶液、3%FBS溶液或为5%脱脂奶粉溶液封闭，100 μ 1/well，37 °C孵育2h ；(4)PBS-T洗板三次；分别加入8个不同浓度PLGF标准品(浓度分别为2000pg/ml、1000pg/ml、500pg/ml、250pg/ml、125pg/ml、62.5pg/ml、31.25pg/ml、15.625pg/ml)及待测样品，100μ 1/well，均设置两个复孔，同时设置两个空白孔，37°C孵育2h ；(5)PBS_T 洗板三次;分别加入 Detection Antibody, I μ g/ml, 100 μ 1/well, 37°C孵本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胎儿7号染色体异常疾病的筛查试剂盒，其特征在于：它包括检测孕妇血清或尿液PLGF水平的试剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陆华，高小平，刘小章，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：