一种双酶分步水解制备甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法及其产品和应用技术

本发明专利技术涉及一种双酶分步水解制备甜高粱籽蛋白ACE抑制肽，其制备方法为：将甜高粱籽粉碎后配制成悬浮液，利用淀粉酶辅助提取甜高粱籽蛋白，然后将甜高粱籽蛋白配成溶液，调其pH后依次分别用α-胰凝乳蛋白酶和中性蛋白酶进行酶解，酶解产物经浓缩和喷雾干燥后，即得到粉末状甜高粱籽蛋白ACE抑制肽产品。本发明专利技术具有生产时间短、操作方便、原料来源广泛及价格低廉、甜高粱籽蛋白ACE抑制肽抑制活性高等优点，产品符合功能食品要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程领域，可用于功能性食品添加剂的开发，具体涉及一种双酶分步水解制备甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法及其产品和应用。
技术介绍
甜高粱是高粱的一个变种，它起源于非洲，具有抗旱、耐涝、耐盐碱、耐瘠薄等特性，因此在我国各地都有种植。中国甜高粱分布较广泛，主要分布在西北、华北、东北、东南、华东和华中地区，从云南到黑龙江，从上海到新疆都有栽培。甜高粱秸杆含有大量糖类物质，主要用于制备生物能源一酒精，该生产过程中的副产物甜高粱穗没有得到有效利用(专利“用甜高粱秸杆制取乙醇的方法，公开号CN101024848A”和“一种用甜高粱秸杆制备乙醇的方法，公开号CN101343647A”)。甜高粱穗中的籽粒含有较高的蛋白质，蛋白质含量约为13% (w/w)，必需氨基酸在总氨基酸含量中约占41% (w/w)，蛋白营养价值较高，另外，甜高粱籽蛋白中脯氨酸、芳香族氨基酸和疏水性氨基酸含量高，分别占到总氨基酸约4.4% (w/w),9.0% (w/w)和39.2% (w/w)左右，根据ACE抑制肽的构效关系，这些氨基酸在ACE抑制肽活性方面起到重要作用。由此可知，甜高粱籽蛋白能被用于生产高活性ACE抑制肽。ACE是血管紧张素转化酶，ACE抑制肽是一种生物活性肽，能够调节高血压病人的血压，且无毒副作用，是近年来天然药物研究领域的热点之一，现已有大量的食源ACE抑制肽被发现，如:草鱼蛋白ACE抑制肽(Chen J, Wang Y，Zhong Q, et al.Purification andcharacterization of a novel angiotensin-1 converting enzyme (ACE) inhibitorypeptide derived from enzymatic hydrolysate of grass carp protein.Peptides,2012，33(1): 52-58.)、鱿鱼明胶 ACE 抑制肽(Alemdn A, Gimenez B, Perez-Santin E,et al.Contribution of Leu and Hyp residues to antioxidant and ACE-1nhibitoryactivities of peptide sequences isolated from squid gelatin hydrolysate.Food Chemistry, 2011, 125(2): 334-341.)和乳清蛋白 ACE 抑制肽(Pan D, Cao J, GuoH,et al.Studies on purification and the molecular mechanism of a novel ACEinhibitory peptide from whey protein hydrolysate.Food Chemistry, 2012,130(1): 121-126.)等。而利用甜高粱籽蛋白制备ACE抑制肽的鲜见报道，特别是利用双酶分步水解制备甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的研究未见报道。
技术实现思路
专利技术目的:本专利技术的目的是提供一种双酶分步水解制备甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法，本专利技术能够克服单酶水解位点不足，混合酶水解相互干扰以及ACE抑制肽不能有效释放等缺点，而该方法国内外尚无报道。 技术方案:为了实现上述目的，本专利技术的一种双酶分步水解制备甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于包括以下步骤:1)将甜高粱籽进行粉碎，然后用蒸馏水配制成甜高粱籽粉的质量百分数为5% 10%的悬浮液； 2)将5000 10000U/g淀粉酶加入悬浮液中50°C 70°C酶解3h 4h，酶解结束后，将悬浮液的PH调至8.0 9.5，搅拌30min后离心，取上清液，调其pH至4.0 4.5，静置30min后离心，收集沉淀，将沉淀溶于蒸馏水中，调pH至中性后经真空浓缩装置浓缩和喷雾干燥得到甜高粱籽蛋白粉； 3)将甜高粱籽蛋白粉配成质量百分数为1% 4%的溶液，调pH至7.0 8.0，加入2000 4000U/ga -胰凝乳蛋白酶，在40°C 50°C下第一次酶解20 30min，第一次酶解结束后沸水浴灭酶得到混合液，将混合液的PH调至6.0 7.0，加入2000 4000U/g中性蛋白酶，在50°C 60°C下第二次酶解40 60min，第二次酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液，上清液经真空浓缩装置浓缩至固型物的质量百分数为5%-15%，用喷雾干燥后，得到粉末状甜高粱籽蛋白ACE抑 制肽。所述步骤I)中甜高粱籽粉的质量百分数为8%。所述步骤2)中将7500U/g淀粉酶加入悬浮液中60°C酶解3.5h，酶解结束后，将悬浮液的PH调至9.0，搅拌30min后离心，取上清液，调其pH至4.2，静置30min后离心，收集沉淀，将沉淀溶于蒸馏水中，调PH至中性后经真空浓缩装置浓缩和喷雾干燥得到甜高粱籽蛋白粉。所述步骤3)中取20g甜高粱籽蛋白粉，质量百分数为2%的溶液，调pH至7.5，加入3000U/ga -胰凝乳蛋白酶在45°C下第一次酶解25min，第一次酶解结束后沸水浴灭酶得到混合液，将混合液的pH调至6.5，加入3000U/g中性蛋白酶，在55°C下第二次酶解50min，第二次酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液，上清液经真空浓缩装置浓缩至固型物质量百分数为10%，用喷雾干燥，得到粉末状甜高粱籽蛋白ACE抑制肽。所述甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的IC5tl值为0.261 0.552mg/mL。所述的双酶分步水解制备的甜高粱籽蛋白ACE抑制肽在抑制肽活性研究方面的应用。采用乙酸乙酯萃取一比色法测定甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的抑制活性(MuguerzaB, Ramos M, Sanchez E, et al.Antihypertensive activity of milk fermented byEnterococcus faecalis strains isolated from raw milk .1nternational DairyJournal, 2006，16(1): 61 _69.)，具体方法如下: 将10 μ L甜高粱籽蛋白ACE抑制肽溶液与10 μ L ACE溶液在37 °C下预热5 min,加Λ 45 yL 5 mmol/L HHL (马尿酰-组氨酰-亮氨酸)溶液，在37 °C反应30 min，反应结束后立即加入85 μ L lmol/L HCl溶液终止反应；在反应液中加入I mL乙酸乙酯，振荡2min后,4 000 r/min离心10 min,取出800 μ L有机相溶液转入玻璃管中，在100 °C下蒸发30 min,蒸发后的残洛中加入800 μ L双蒸水,混勻后在228 nm下测定吸光度,每个样品重复3次。另以双蒸水代替样品作为空白。按下式计算ACE抑制活性:I =(A — C)/ (A - B) X 100% 式中，I一甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的抑制率;A—空白组的吸光度出一反应体系中没有加入甜高粱籽蛋白ACE抑制肽时的吸光度；(:一反应体系中有甜高粱籽蛋白ACE抑制肽和样品时的吸光度。有益效果:与现有技术相比，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双酶分步水解制备甜高粱籽蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于包括以下步骤：1）将甜高粱籽进行粉碎，然后用蒸馏水配制成甜高粱籽粉的质量百分数为5％～10％的悬浮液；2）将5000～10000U/g淀粉酶加入悬浮液中50℃～70℃酶解3h～4h，酶解结束后，将悬浮液的pH调至8.0～9.5，搅拌30min后离心，取上清液，调其pH至4.0～4.5，静置30min后离心，收集沉淀，将沉淀溶于蒸馏水中，调pH至中性后经真空浓缩装置浓缩和喷雾干燥得到甜高粱籽蛋白粉；3）将甜高粱籽蛋白粉配成质量百分数为1％～4％的溶液，调pH至7.0～8.0，加入2000～4000U/g的α?胰凝乳蛋白酶，在40℃～50℃下第一次酶解20～30min，第一次酶解结束后沸水浴灭酶得到混合液，将混合液的pH调至6.0～7.0，加入2000～4000U/g中性蛋白酶，在50℃～60℃下第二次酶解40～60min，第二次酶解结束后沸水浴灭酶，离心收集上清液，上清液经真空浓缩装置浓缩至固型物的质量百分数为5%?15％，用喷雾干燥后，得到粉末状甜高粱籽蛋白ACE抑制肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴琼英，贾俊强，颜辉，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：