一种溶菌酶制剂、其制备方法及用途技术

本发明专利技术属于酶学和药物制剂学领域，涉及一种溶菌酶制剂、其制备方法及用途。具体地，所述溶菌酶制剂通过如下方法制得：1)将溶菌酶溶于注射用水，得到溶菌酶溶液；2)向步骤1)中的溶菌酶溶液中加入稳定剂盐类；3)调节pH至4.6-9.0。本发明专利技术的溶菌酶制剂能够用于眼用制剂，并且能够保持良好的稳定性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶学和药物制剂学领域，涉及一种溶菌酶制剂、其制备方法及用途。
技术介绍
近年来，大量的眼科药物制剂的临床数据和研究资料表明，在眼部疾病的治疗过程中产生的副作用或不良反应有很多时候都是由于抑菌剂造成的。例如，眼部手术后使用药物进行术后治疗时，由于抑菌剂的影响而造成的角膜上皮细胞脱落等现象时有发生。并且，随着电脑、空调等的普及，干眼症患者人群也在不断增加，这类患者的治疗往往需要长期辅以人工泪液，而化学抑菌剂的长期使用会造成不同程度的角膜损伤。因此，眼用制剂中的抑菌剂带来的副作用已成为社会普遍关注的问题，也是目前全球眼科药物开发研究的热点。现有技术中采用多种方法来避免抑菌剂对眼部带来的伤害，如制成不含抑菌剂的眼科单剂量产品:如日本参天公司的可乐必妥滴眼液；也可以使用除菌的眼用制剂容器如:日本点眼剂研究所开发的乌诺前列酮异丙酯滴眼液。但这些包装方面的改善并不能保证完全无菌，且成本高，对于长期使用的人群来说，无疑会增加患者的经济负担。也有人尝试过在喹诺酮类滴眼液中不加抑菌剂，直接依靠药物的抗菌作用维持制剂的无菌状态。但由于喹诺酮类药物的抗菌谱及抑菌效力有限，其抑菌效果也不尽理想，不具备普遍应用性。溶菌酶(Lysozyme)是分子量为14.4kDa 的酶类，1922 年 Alexander Fleming 在寻找抗生素的过程中发现了溶菌酶。作为人体自身的抗感染天然屏障之一，它能够通过催化肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和 N-乙酰氨基葡萄糖残基间和壳糊精中N-乙酰葡糖胺残基间的1，4-β链的水解，而破坏细菌的细胞壁，达到杀死细菌的目的，因此可以作为抑菌剂，已经在食物领域中得到应用。溶菌酶作为酶类具高效性，其抗菌活性为同类化学物质的几十倍甚至上千倍；且作为人体固有活性物质，对人体无任何副作用，可应用于各类人群。除此之外，溶菌酶成本低廉、获取途经多、来源广阔，在蛋清、乳汁中都含有大量的溶菌酶，特别是近年来随着克隆技术的广泛应用，使得微生物提取溶菌酶也成为溶菌酶大量生产的一大途径。然而，溶菌酶在水中的稳定性较差，不能长时间保存。并且眼用制剂大多是水溶性制剂，因此溶菌酶应用于眼用制剂受到一定限制。
技术实现思路
本专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，获得了一种溶菌酶制剂。本专利技术人惊奇地发现，该溶菌酶制剂能够用于眼用制剂，并且溶菌酶在本专利技术的体系(包括合适的PH和稳定剂盐类浓度)中能够保持良好的稳定性。由此提供了下述专利技术:本专利技术者综合以上问题，寻找到一种对眼部安全、无刺激且高效的抑菌剂一溶菌酶，该抑菌剂可适用于各类人群，且成本低廉。溶菌酶作为一种眼用制剂的抑菌剂用量范围为 0.001%-25% (w/w)，优选范围为 0.01%-20% (w/w)，更优选为 0.1 %-15% (w/w)；进一步优选为0.3% -10% (w/w)，特别优选为0.5% -5% (w/w)。且在与其他抑菌剂联合使用，可以使两种抑菌剂的浓度同时降低，用量减小，降低其他抑菌剂对眼表的损害。过去虽有人考虑到以其作为眼用制剂的抑菌剂，但由于其在水溶液中的稳定性不佳，使得溶菌酶在此方面的应用未能得到发展。为保证溶菌酶的稳定性，专利技术人通过大量的实验，处理溶菌酶原料，使获得的精制溶菌酶可在水溶液中保持3-5年稳定，攻克了这个难题。处理工艺如下:I)将溶菌酶溶于注射用水，得到溶菌酶溶液；2)向步骤I)中的溶菌酶溶液中加入稳定剂盐类；3)调节 pH 至 4.6-9.0。在本专利技术的一个实施方案中，还包括步骤4)静置，使溶菌酶与稳定剂盐类充分接触后过滤；在本专利技术的一个实施方案中，还包括5)加入吸附性物质对溶液中的杂质进行吸附，获得澄清透明的溶液，吸附后过滤除去吸附性物质后备用。在本专利技术的一个实施方案中，还包括6)得到的溶液可采用冷冻干燥、喷雾干燥等方式，使其以固体形式保存以备制剂用；亦可调节至等电点后，收集固体，采用真空干燥等方式，收集固体；亦可以液体形式加入其他药物、渗透压调节剂、保湿增稠剂等原辅料直接投料制成眼用制剂，例如滴眼液、眼膏剂、眼用凝胶剂、眼用固体制剂等剂型。下面是对上述工艺的详细解释:专利技术中所涉及到的眼用制剂的剂型可以为滴眼液、眼膏剂、眼用凝胶剂、眼用固体制剂等眼科常用的液体、半固体、固体剂型。专利技术中所涉及到的pH值调节剂，以调节注射用水的pH值，此时用到物质可以为稀盐酸、醋酸、氢氧化钠等常用的酸碱调节剂，亦可以是一些具有酸碱度调节功能的盐类，如枸橼酸、硼酸，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等。本领域技术人员能够理解，pH值是眼用制剂中非常重要的技术控制指标，关系到本专利技术所述眼用制 剂的稳定性、有效性及眼刺激性。此外，PH值对于蛋白质亦是一个重要的控制指标，众所周知，蛋白质具有一个特性指标——等电点。蛋白质的水溶液PH值离等电点越近，其在水溶液中的稳定性越差，相反越远则越稳定。且蛋白质容易在强酸强碱中发生不可逆的变性反应，也就是我们通常所说的蛋白质变质。溶菌酶作为一种蛋白类的酶，同样具有蛋白质的共同性质。本专利技术为含有溶菌酶的眼用制剂，在制备过程中需同时兼顾溶菌酶与眼用制剂的特点，因此pH值的控制在本品中可以说是关键中的关键。在以往溶菌酶纯化的过程中，pH值均在4.6以下，其主要原因是在保证溶菌酶稳定的前提下，提高溶菌酶的收率。但专利技术人发现，在此PH值条件下，得到的溶菌酶制剂对人眼刺激过强，但将PH值增大后，其稳定性又降低。本专利技术人通过大量的实验发现溶液pH值、盐浓度及处理溶菌酶浓度在溶菌酶原料处理过程中至关重要，通过精密控制这三项参数值可实现在与人体接近的PH值下，获得更为稳定的溶菌酶溶液，且可将溶菌酶在处理过程中得到更高的收率。通过一系列实验，专利技术者将含溶菌酶的眼用制剂处理过程中的PH值控制在4.6-10.0间有利于提高溶菌酶的稳定性，优选为4.7-9.0 ;更优选为4.8-8.5 ;特别优选为5.0-8.0 ;进一步优选为5.0-7.0 ;更进一步优选为5.5-6.5，例如5.5,5.6,5.7,5.8、5.9、6.0、6.I>6.2、6.3、6.4、或 6.5。本专利技术中所涉及的稳定剂，多为盐类，包括但不限于碳酸钠、碳酸氢钠、枸橼酸钠、硼酸、硼砂、磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钙等中的一种或多种盐类，优选为选自硼酸、硼砂、枸橼酸钠、以及磷酸氢二钾中的任一种或者多种。不拘于理论的限制，硼酸、硼砂、枸橼酸钠、以及磷酸氢二钾同时兼具PH调节的作用。不拘于理论的限制，溶菌酶可能会与一些盐作用产生沉淀，或者是溶菌酶的空间构象发生改变，从而导致溶菌酶活性和/或稳定性的改变。不拘于理论的限制，上述稳定剂盐类兼具两种功效:其一为调节溶液渗透压，保证眼用制剂与泪液的渗透压相同而减少眼刺激。另一作用为，盐类的存在可以驱使溶菌酶的构型中同性电荷的分子以斥力在溶液中保持稳定，而异性电荷的分子则会相互聚集而沉淀，从溶液中分离。盐类的存在可有效的除去溶液中的不稳定因素，从而保证溶菌酶稳定性。本专利技术通过大量试验获得稳定剂的以上作用机理，打破以往普遍使用的氯化钠等盐类的单纯局限，得到了更适合溶菌酶的稳定剂盐类，并且增加了稳定剂盐类的种类，使制剂的制备组方上更为多样化。专利技术人在对比处理与未处理过溶菌酶原料的活性时，惊奇地发现，稳定剂盐类的加入可以保持或增强溶菌酶原料的活性。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种溶菌酶制剂的制备方法，包括下述步骤：1)将溶菌酶溶于注射用水，得到溶菌酶溶液；2)向步骤1)中的溶菌酶溶液中加入稳定剂盐类；3)调节pH至4.6?9.0。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘继东，王宁利，唐海，王征月，
申请(专利权)人：沈阳兴齐眼药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：