免疫抑制性多肽与核酸制造技术

本发明专利技术涉及免疫抑制性多肽与核酸。本发明专利技术提供了免疫抑制性多肽以及对此类多肽进行编码的核酸。在一个方面，本发明专利技术提供了突变CTLA-4多肽以及对突变CTLA-4多肽进行编码的核酸。还提供了组合物以及使用此类多肽连同核酸的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术总体上涉及结合⑶80和/或⑶86的新颖多肽类，编码此类多肽的核酸，以及制备并使用此类多肽及核酸的方法。本专利技术的背景T细胞在免疫应答的起始及调控中发挥重要作用。为了产生T细胞的完全活化，要求至少两个不同的信号传导事件。一个第一信号是通过表达于T细胞表面上的T细胞受体与(TCR)与在表达于抗原呈递细胞(APC)上的主要组织相容性复合物(MHC)分子的环境中存在的特定抗原(Ag)之间的 相互作用而产生。一个第二 (共刺激)信号是由表达于APC上的共刺激性配体与它们的表达于T细胞上的对应受之体间的相互作用而产生。一种优势共刺激通路涉及在表达于APC上的⑶80 (B7-1或B7.1)以及⑶86 (B7-2或B7.2)配体与主要表达于T细胞上的⑶28以及CTLA-4 (也称为⑶152)之间的相互作用。CTLA-4 (细胞毒性T淋巴细胞抗原4)以及⑶28充当这些⑶80以及⑶86配体的受体。正向信号传导是通过⑶28受体介导的。这种或这些⑶80和/或⑶86配体与CD28的结合通过促进免疫突触的形成而降低了 T细胞活化的阈值(Viola A.etal., Science283:680-682 (1999))。此外，CD28的共刺激活化或增强了对于T细胞的增殖以及存活具有重要性的因子的形成，如，白介素-2 (IL-2)、NF-K B,以及Bcl-XL(Norton S.D.et at., J.1mmunol.149: 1556-1561 ( 1992 ) ; Vel la A.T.et al., J.1mmunol.158:4714-4720 (1997))。在体内，⑶28-缺陷的小鼠是严重免疫妥协的，并且显示了不良的抗原特异的 T 细胞应答(Green, J.M.et al., Immunityl: 501-508 (1994))。当T细胞在这种共刺激性信号的缺失下被活化时，可造成T细胞的无反应性或耐受。负向信号传导是通过CTLA-4受体介导的。这些⑶80以及⑶86配体各自以高亲和力结合到CTLA-4上，并且衍生自⑶28信号传导的平衡免疫增生性反应。CTLA-4信号传导的潜在机制包括竞争性结合共刺激性分子⑶80/⑶86 (Masteller, Ε.M.et al.，J.1mmunol.164:5319 (2000))、通过将磷酸酶诱导至免疫突触上而抑制TCR信号传导(LeeK.M.et al.，Science282:2263 (1998))、以及破坏这种免疫突触(Pentcheva-Hoang T.etal., Immunity21:401 (2004) ;Chikuma S.et al., J.Exp.Medl97:129 (2003) ;SchneiderH.et al., Science313:1972 (2006))。在体内，CTLA-4缺陷的小鼠显示了深度的自身免疫表型，其特征为大量的组织浸润以及器官破坏(Waterhouse P.et al.，Science270:985(1995))。设计成拮抗这种⑶80/⑶86共刺激通路的治疗剂(如，可溶性人类CTLA-4-1g)具有用于治疗自身免疫疾病以及紊乱的可能。本专利技术提供了具有改进的能力以调整或阻抑经由这种⑶80/⑶86共刺激通路的信号传导的的有利分子，以及将此类分子用于所选择且不同的T细胞应答的操纵的方法。此类分子在如以下详细讨论的不同应用中具有有益的用途。本专利技术的概述在第一个方面，本 专利技术提供了一种分离或重组的CTLA-4多肽，该多肽包括一个多肽序列，该多肽序列与在SEQ ID NO: 159中所示的人类CTLA-4细胞外结构域的多肽序列具有达到15个氨基酸残基差异，其中该分离或重组的CTLA-4多肽具有结合⑶80或⑶86或二者之一的一个细胞外结构域的能力，和/或具有阻抑或抑制一种免疫应答的能力。根据本专利技术第一方面的一种多肽可与SEQ ID NO:36的多肽序列具有至少90%的序列一致性，或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性。根据本专利技术第一方面的一种多肽可包括SEQ ID N0:36的多肽序列。根据本专利技术第一方面的一种多肽可与SEQ ID NO:50的多肽序列具有至少90%的序列一致性，或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性。根据本专利技术第一方面的一种多肽可包括SEQ ID N0:50的多肽序列。根据本专利技术第一方面的一种多肽可具有结合人类⑶80或人类⑶86或二者之一的一个细胞外结构域的能力。根据本专利技术第一方面的一种多肽可包括长度为124个氨基酸残基的一个多肽序列。根据本专利技术第一方面的一种多肽可包括一个氨基酸取代，该取代在选自下组的一个氨基酸位置上，该组的构成为:对应于相对SEQ ID N0:159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的多个氨基酸位置根据本专利技术第一方面的一种多肽可包括二、三、或四个氨基酸取代，这些取代在选自下组的多个氨基酸位置上，该组的构成为:对应于相对SEQ ID N0:159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的氨基酸位置。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置70上的一个氨基酸取代，如取代S70F。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置104上的一个氨基酸取代，如取代L104E。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置30上的氨基酸取代，如取代T30N/D/A或取代T30N。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置64上的一个氨基酸取代，如取代S64P。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置50上的一个氨基酸取代，如取代A50M。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置54上的一个氨基酸取代，如取代M54K/V或取代M54K。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置65上的一个氨基酸取代，如取代I65S。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置56上的一个氨基酸取代，如取代N56D。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置55上的一个氨基酸取代，如取代G55E。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置85上的一个氨基酸取代，如取代M85A。本专利技术第一方面的一种多肽可包括在相对SEQ ID NO: 159的位置24上的一个氨基酸取代，如取代A24E/S或取代A24E。本专利技术第一方面的一种多肽可具有对于⑶86或它的一根细胞外结构域的一种结合亲和力，该结合亲和力是大约等于或大于一种单体人类CTLA-4细胞外结构域对于CD86或CD86细胞外结构域的结合亲和力。本专利技术第一方面 的一种多肽可具有对于⑶80或它的一个细胞外结构域的一种结合亲和力，该结合亲和力大于一种单体人类CTLA-4细胞外结构域对于CD80或CD80细胞外结构域的结合亲和力。本专利技术第一方面的一种多肽可具有阻抑一种免疫应答的能力。本专利技术第一方面的一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离或重组的融合蛋白二聚体，该融合蛋白二聚体包括经由至少一个二硫键连接的两个单体融合蛋白，该二硫键在每个单体突变融合蛋白中存在的两个半胱氨酸残基之间形成，其中每个单体融合蛋白包括：(a)一种多肽，该多肽包括一种多肽序列，该多肽序列与SEQ?ID?NO:50具有不超过6个氨基酸残基的差异且在位置24、30、32、41、50、54、55、56、64、65、70、85、104和106上包括的残基与在SEQ?ID?NO:50中对应位置上的氨基酸残基相同，以及(b)一种Ig?Fc多肽，并且其中该融合蛋白二聚体结合人类CD80或人类CD86或二者之一的细胞外结构域且与一种LEA29Y?Ig融合蛋白二聚体相比具有阻抑一种免疫应答的更大的能力，其中该LEA29Y?Ig融合蛋白二聚体包括两个单体LEA29Y?Ig融合蛋白，各自包括SEQ?IDNO:166的多肽序列。

【技术特征摘要】
2007.11.01 US 60/984,631;2008.05.07 US 61/051,2151.一种分离或重组的融合蛋白二聚体，该融合蛋白二聚体包括经由至少一个二硫键连接的两个单体融合蛋白，该二硫键在每个单体突变融合蛋白中存在的两个半胱氨酸残基之间形成，其中每个单体融合蛋白包括:(a) —种多肽，该多肽包括一种多肽序列，该多肽序列与SEQ ID N0:50具有不超过6个氨基酸残基的差异且在位置24、30、32、41、50、54、55、56、64、65、70、85、104和106上包括的残基与在SEQ ID NO:50中对应位置上的氨基酸残基相同，以及(b) —种Ig Fe多肽，并且其中该融合蛋白二聚体结合人类CD80或人类CD86或二者之一的细胞外结构域且与一种LEA29Y-1g融合蛋白二聚体相比具有阻抑一种免疫应答的更大的能力，其中该LEA29Y-1g融合蛋白二聚体包括两个单体LEA29Y-1g融合蛋白，各自包括SEQ IDNO:166的多肽序列。2.如权利要求1所述的融合蛋白二聚体，其中所述IgFe多肽为...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克E卡勒，马登M佩邓加特，史蒂文H巴斯，玛格丽特奈格伯斯，约哈庞诺南，史蒂文J查平，斯里达维斯瓦纳撒恩，布伦特R拉森，
申请(专利权)人：珀西德治疗有限责任公司，
类型：发明
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