本发明专利技术公开了一种含有成纤维细胞生长因子一10的脂质体的制备方法及其在治疗脱发疾病中的应用。本法采用薄膜分散一冻干再水化法，将FGF—10包裹起来，增加了蛋白稳定性和其对皮肤渗透力，提高其在体内生物利用度。涂抹给药后可透皮吸收直接作用于毛囊生长的关键部位达到治疗效果，更有利于脱发疾病的治疗。该脂质体还可用于生物美容及烧烫伤、难愈性溃疡的治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种含有成纤维细胞生长因子一 10(FGF—10)蛋白的，用于治疗脱发疾病的脂质体的制备及应用，属生物医药领域。
技术介绍
作为皮肤的附属器官，毛发具有重要的生理学与社会学功能。毛发缺失或异常分布尽管没有生命之忧，但因其严重影响患者的外观形象，会导致患者心理负担过大，使得他们在激烈的社会竞争和人才竞争中处于非常不利的地位，对社会交往和患者心理健康的影响不容否认。随激烈的社会竞争和环境日益恶化，毛发疾病呈上升势态。据世界毛发再生协会发布的对全球80多 个国家的调查显示，全球大概有27.3%的人面临着头发再生障碍问题困扰，发达国家高于世界平均水平。欧洲最高达到44.3%，而亚洲国家中，中国比率高达36.8%，位居亚洲各国之首。脱发治疗类药物市场分析研究报告表明在全球OTC市场上，生发剂治疗用药占皮肤外用药总体市场份额的7%，已达4.8亿美元，其年均增长率达17%，高于世界OTC药物市场8%的年均增长率。目前国内外用于治疗脱发的药品主要有以下三种，米诺地尔溶液剂、安体舒通乳液、非那雄胺片。其中米诺地尔是唯一被美国FDA批准治疗脱发的OTC药物。该药物经头皮吸收后可以扩张头皮下血管，改善毛囊周围的微循环，减少毛囊周围的炎症细胞浸润，延缓上皮基质细胞的衰老，从而使萎缩的毛囊肥大并促进毛发的生长，使毳毛变成终毛。但它主要是针对雄激素性脱发有较好的疗效，且具有一定的副作用包括刺激皮肤、可能引致皮肤红疹、痕痒等。其它生发产品包括中药及化妆品类等治疗效果不明显，主要原因是药物或其他产品透皮吸收性能差，作用物质到达不了病灶部位或浓度极其微量，治疗效果甚微甚至无效。随基因工程技术的日益发展，发现成纤维细胞生长因子-10(FibrOblastGrowthFactor-10, FGF-1O)等生长因子类蛋白在人体外实验和动物体内外实验中对毛发的生长有明显的调节作用，己成为该领域研究的热点。成纤维细胞生长因子一 10是由成纤维细胞和其它间充质来源的细胞分泌，能与表达于上皮细胞激酶受体FGFR2IIIb和FGFRiIIIb相结合，通过问质上皮相互作用的旁分泌方式发挥作用。其专一靶细胞是表皮细胞，能刺激所有皮肤内的表皮基本单位包括头发毛囊、皮脂腺、汗腺生长。FGF — 10在人体外实验和动物体内外实验中对毛发的生长有明显的调节作用。但在应用时，即使毛囊细胞仍然存在的情况下，生物活性物质的作用总是不理想。主要原因是毛囊生长的关键部位在毛母质和毛乳头，但生物活性物质稳定性差，并在皮肤局部外用难以穿透皮肤角质层及毛囊细胞膜到达毛囊毛球部发挥其作用。因此，如何解决蛋白类药物的稳定性及透皮吸收达到促毛囊生长的有效部位是开发此类药物的关键性问题。毛发疾病的治疗主要存在两个重要问题，一方面病变局限于有毛部位，若全身给药到达皮肤局部的药物浓度极其有限，而若要使局部达到理想治疗浓度，势必会引起全身毒副作用；另一方面局部给药，由于透皮吸收性能差，药物到达不了病灶部位或浓度极其微量，治疗效果甚微甚至无效。因此兴起研究具有良好透皮性能的外用药物制剂如脂质体剂型，它能够介导各种分子特异性进入皮肤和细胞膜，使外源蛋白直接到达病灶部位，充分发挥其功效。本研究首次将FGF-1O制备成脂质体新剂型，用于脱发疾病的治疗，不仅可以透皮吸收直接作用于毛囊生长的关键部位毛母质和毛乳头，达到治疗效果，同时还延长外源蛋白的稳定性及在体内的作用时间。结果表明，对脱发疾病具有巨大的潜在治疗价值，可开发成为针对雄激素性脱发、斑秃、脂溢性脱发及放化疗后的脱发等修复治疗作用的产品。
技术实现思路
本专利技术通过利用脂质体制剂能介导各种分子特异性进入皮肤和细胞膜的特性，增加了脂质体结合的生物活性蛋白FGF-1O在体内外稳定性及其对皮肤渗透力，提高了其在毛囊生长的关键部位毛母质和毛乳头的生物利用度。本项目旨在提供一种制备方法简单、治疗周期短、效果显著的治疗脱发疾病的方法。本专利技术目的是提供FGF-1O脂质体制备方法。本专利技术进一步目的是在于提供FGF-1O脂质体在脱发疾病中的应用。本专利技术还可应用于生物美容及烧烫伤、难愈性溃疡的临床治疗。本专利技术的上述目的是通过如下方案予以实现的:本专利技术FGF —10脂质体成冻干粉状态，有助于生物蛋白及脂质体的稳定性。应用时加缓冲溶液使其变成脂质体溶液后涂抹，易在皮肤上滞留，并具缓释作用。同时本产品对皮肤无刺激性及无毒副作用。本专利技术提供了一种重组人成纤维细胞生长因子一 10脂质体的制备方法。按照专利技术的实施例方案， 大豆磷脂重量(g / ml) 1.0% 5.0%、胆固醇重量(g / ml)0.25% 1.25%，优选大豆磷脂2.0%,(g / ml)胆固醇0.5% (g / ml)制备磷脂膜。低分子量肝素重量(mg / ml)0.1% 1.0%，优选0.5% (mg / ml)作为保护细胞活性，并减缓其释放。作为磷脂溶解剂无水乙醇体积为(ml / ml) 100% 200%,优选100% (ml / ml)。作为冻干过程中的赋形剂和保护剂，甘露醇重量(g / ml)2% 10.0%，优选5% (g /ml)。缓冲溶液可选择pH6.5左右的0.9%生理盐水或20miVlPBS溶液。在本专利技术的脂质体剂型中，重组人成纤维细胞生长因子-10每IOOml含量为Img IOmg,优选 5mg / 100ml。本专利技术还提供了脂质体的制备方法，包括通过旋转蒸发制备磷脂膜及0.9%生理盐水或20mMPBS溶液水化洗膜后4。C孵育过夜；采用微射流法，使脂质体粒径均匀，并通过滤膜整粒，制备成空白脂质体；将空白脂质体溶液与FGF-1O、低分子量肝素混合，37°C水浴旋转孵育，0.22社m滤膜除菌过滤加入5%甘露醇作为赋形剂混和均匀，分装，冻干，制备成成纤维细胞生长因子-10脂质体剂型。本专利技术具有以下优点:1.本专利技术采用薄膜分散一冻干再水化法制备成纤维细胞生长因子-10脂质体剂型，能够提高大分子生物蛋白的包封率，更好地保持蛋白的稳定性。2.本专利技术脂质体制剂用缓冲液溶解后易在皮肤上滞留，并具有良好透皮性能，能够介导FGF-1O蛋白特异性进入皮肤和细胞膜，使其直接到达病灶部位，充分发挥其功效，并在一定程度上起到缓释作用，延长药物的半衰期，使其作用更加持久。3.本专利技术产品可直接涂抹于脱发的部位，无需进行微创导入，减轻了患者使用时的顾虑，增加患者的依从性和便于使用。4.本专利技术配伍合理，可达到稳定负载FGF-1O蛋白于脂质体中，并保持其生物活性、延缓释放的作用，促进毛囊的生长。采用的组分均对皮肤无毒副作用、无刺激性，便于清洁。附图说明图1 C57BL / 6小鼠在给药第13天毛发生长状况图2 C57BL / 6小鼠在给药第18天毛发生长状况图3 C57BL / 6小鼠在给药第13天脱毛区皮肤组织病理学检查图4C57BL/6小鼠在给药第18天脱毛区皮肤组织病理学检查 A:正常对照组 B:rhFGF-10 脂质体组(50 μ g/ml) C:rhFGF_10 脂质体组(10 μ g/ml)D:rhFGF-10 溶液组(50 μ g/ml) E:rhFGF-10 溶液(10 μ g/ml) F:阳性对照组(5%米诺地尔溶液组) G:0.9%生理盐水对照组H:空白脂质体对照组I:rh本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种含有成纤维细胞生长因子?10(FGF一10)的治疗脱发的脂质体制备方法。以lOOml脂?质体制备量计，其组成配方为：?①大豆卵磷脂????1．Og～5．Og；?②胆固醇????0．25～1．25?g；?③低分子量肝素????100?μg～1000?μg；?④乙醇????100～200ml：?⑤FGF一10原液lmg～lOmg；?⑥甘露醇????2．Og～10．0g?⑦其余为0．9％生理盐水(或20mMPBS溶液)。
【技术特征摘要】
1.一种含有成纤维细胞生长因子-10 (FGF — 10)的治疗脱发的脂质体制备方法。以IOOml 脂 质体制备量计，其组成配方为: ①大豆卵磷脂1.0g 5.0g; ②胆固醇0.25 1.25 g ； ③低分子量肝素100 μ g 1000 μ g ； ④乙醇100 200ml: ⑤FGF — 10 原液 Img IOmg ； ⑥甘露醇2.0g 10.0g ⑦其余为0.9%生理盐水(或20mMPBS溶液)。2.根据专利要求I所述的含有成纤维细胞生长因子一10 (FGF — 10)的治疗脱发的脂质体制备优选方法，以IOOml脂质体制备量计，其组成配方为: ①大豆卵磷脂2.0g; ②胆固醇0.5 g ; ③低分子量肝素500yg; ④乙醇IOOml； ⑤FGF — 10 原液 5mg ； ⑥甘露醇5.0g ⑦其余为0.9%生理盐水(或20mMPBS溶液)。3.根据专利要求I或2说述的含有成纤维细胞生长因子一IO(FGF-1O)的治疗脱发的脂质体制备方法，其特征是所述的成纤维细胞生长因子一 10选用重组人成纤维细胞生长因子-10。4.根据专利要求I或2所述的含有成纤维细胞生长因子一IO(FGF-1O)的治疗脱发的脂质体制备方法，其特征是，所述的FGF — ...
【专利技术属性】
技术研发人员：田海山，李校堃，姜潮，金利泰，王晓杰，王泽，唐禄，
申请(专利权)人：温州医学院，浙江格鲁斯特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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