本发明专利技术公开了快速定量检测尿样中促卵泡生成素(FSH)的方法，所述方法首先测定FSH含量，然后结合免疫层析判读仪中的标准曲线或比色卡读取试剂卡上显示的数值范围。该判断方法操作简便，设计合理，患者可随时、随地对其FSH含量进行检测，以了解垂体内分泌功能，亦可间接了解下丘脑及卵巢的功能状态，这对垂体或下丘脑型闭经的鉴别诊断很有帮助。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医疗器械体外诊断试剂的
，具体是涉及一种快速定量检测尿样中促卵泡生成素(FSH)的方法。
技术介绍
促卵泡生成素(FSH)由垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种激素,成分为糖蛋白。主要作用为促进卵泡成熟。促卵泡生成素调控人体的发育、生长、青春期性成熟、以及生殖相关的一系列生理过程，特别是刺激生殖细胞的成熟。促卵泡生成素(FSH)由促进卵泡颗粒层细胞增生分化，促进整个卵巢长大。作用于睾丸曲细精管可促进精子形成。注射FSH只增加卵泡数目，对卵泡成熟并无作用。下丘脑分泌的促卵泡激素释放激素控制卵泡刺激素的分泌。在月经周期中，血中FSH浓度及每日由尿排泄的FSH的量随周期变化而变化。在停经后，血和尿中FSH排出量增加。在男性则促进生精管形成和生精作用，其功能是促进睾丸曲细精管的成熟和精子的生成；在女性，FSH的功能是促进卵泡发育和成熟，及协同促黄体生成素(LH)促使发育成熟的卵泡分泌雌激素和排卵，参与正常月经的形成。它的产生受下丘脑促性腺释放激素的控制，同时受卵巢雌性激素(E2)的反馈调控。FSH对男女两性的性、生殖功能起决定性作用。血FSH的浓度在排卵前期为1.5 10mIU/ml，排卵期为8 20mIU/ml，排卵后期为2 10mIU/ml。一般以5 40mIU/ml作为正常值。通过对FSH测定，可以了解垂体内分泌功能，亦可间接了解下丘脑及卵巢的功能状态。这对垂体或下丘脑型闭经的鉴别诊断很有帮助。促卵泡生成素检测异常的临床意义FSH水平增高见于a)男性睾丸精原细胞瘤；b)提示女性卵巢功能高度低下，如先天性无卵巢或卵巢发育不全(如Turner综合征等)、原发性闭经、原发性性腺功能低下、中枢神经性及垂体性早熟、卵巢性(性机能减退)肥胖等；c)更年期综合征或绝经期妇女。FSH水平降低见于a)提示病变可能在垂体回下丘脑，如席汉氏综合征、垂体嫌色细胞瘤、嗜碱性细胞瘤(库欣综合征)、嗜酸粒细胞瘤(肢端肥大症)以及原发性垂体促性腺功能低下等；b)肥胖性生殖无能综合征、下丘脑病变(如闭经泌乳综合征、多囊性卵巢综合征)坐寸οc)长期服用避孕药，大量应用性激素。免疫层析试剂由于它的操作简便、具有直观、快速、检测效率高、方法简便、无污染、费用低廉、灵敏度高、特异性强等优点，被广泛应用于临床诊断、野外现场及家庭自我检测。免疫层析检测FSH的试剂运用双抗体夹心法。当测试液浸泡或滴入试纸条的样品垫后，通过吸水纤维的毛细作用，测试液迅速湿透金标结合垫，金标结合垫上的胶体金结合物被溶解，并随测试液一起沿层析材料向前移动。若测试液中存在待测抗原Ag，则它就会和胶体金结合物中的抗体发生特异性免疫反应，形成胶体金结合物-待测抗原的免疫复合物。然后随测试液一起流经固定在Ne膜上T线的捕获试剂。T线的捕获试剂捕获胶体金结合物-待测抗原免疫复合物，即与该免疫复合物发生特异性免疫反应，形成胶体金结合物-待测抗原-捕获试剂的免疫复合物，从而使胶体金结合物-待测抗原免疫复合物滞留在T线处。测试液继续前移，在流经Ne膜上固定有羊抗鼠I gG抗体的C线时，未与待测抗原Ag发生反应的胶体金结合物与C线上羊抗鼠抗体发生免疫反应，从而使得游离的胶体金结合物滞留在C线处。此时T线和C线处均有胶体金结合物滞留，即T线和C线处均能观察到颜色(红色或紫色)，则表示检测结果为阳性结果，即测试液中有待测抗原；若仅C线处观察到颜色，而T线处未观察到颜色，则表示检测结果为阴性结果，即测试液中无待测抗原；待测液中FSH含量不同，所产生的T线颜色深浅也不相同，随着FSH含量的增加，T线颜色就会越深。然而，在一些样品中高浓度FSH则可导致高水平的“钩状效应(hook effect) ,即FSH浓度远远大于胶体金试纸条的检测上限时，FSH测得结果反而随浓度的增加而下降，T线颜色反而变浅，在临床诊断中这就造成FSH低水平的假象，使对病人的诊断出现意想不到的问题。当这种病人的尿液稀释后，则会发现其HCG水平实际很高。为克服钩状效应产生的误判、假阴性结果，样本稀释成为本领域的一种常用手段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速定量检测尿样中促卵泡生成素(FSH)的方法。实现上述目的本专利技术的技术方案为，一种快速定量检测尿样中促卵泡生成素(FSH)的方法，所述方法首先测定FSH含量，然后结合免疫层析判读仪中的标准曲线或比色卡读取试剂卡上显示的数值范围。其中，FSH含量的测定是通过本领域已知的方法进行测定，包括用FSH试剂卡、试剂条或试剂笔进行测定。所述的比色卡通过以下的方法进行绘制:以国家参考品为参比，将FSH标准品溶液用正常人尿液(阴性)或牛血清稀释成浓度为0mIU/ml、5mIU/ml、10mIU/ml、25mIU/ml、40mIU/ml，平衡至室温，将制备好的试剂条平放，加入待检标准品，静止10分钟，按照检测结果显示的颜色绘制成FSH比色卡同时，免疫层析判读仪中的标准曲线通过以下的方法进行绘制:以国家参考品为参比，将FSH标准品溶液用正常人尿液(阴性)或牛血清稀释成浓度为0mIU/ml、5mIU/ml、10mIU/ml、15mIU/ml、20mIU/ml、30mI U/ml、40mIU/ml 系列标准品，平衡至室温，将制备好的试剂条平放，加入待检标准品，静止10分钟后放入配套的免疫层析判读仪中进行读数，以测得的GOD值(X)作为横坐标，以FSH含量(y)作为纵坐标，绘制仪器内存的标准曲线。其中，FSH含量的测定可通过与比色卡相对比，得出含量；或是通过免疫层析判读仪中的读数，将该读数与免疫层析判读仪中的标准曲线上的横坐标相匹配，标准曲线上的纵坐标读数就是FSH的含量。本专利技术与现有技术相比，该判断方法操作简便，设计合理，患者可随时、随地对其FSH含量进行检测，以了解垂体内分泌功能，亦可间接了解下丘脑及卵巢的功能状态，这对垂体或下丘脑型闭经的鉴别诊断很有帮助。附图说明图1为比色卡。具体实施例方式为便于本专利技术技术方案的理解，下面结合具体的实施方式进行介绍。FSH试剂条包括上样垫、记物垫、硝酸纤维素(NC)膜、吸样垫和衬板，同时标记物垫上包被胶体金标记的鼠抗FSH-β单克隆抗体，NC膜上分别包被有鼠抗FSH-α抗体构成的检测线和羊抗鼠IgG抗体构成的质制线。所述试剂条通过以下的方法进行制备:(I)胶体金标记鼠抗FSH-β单克隆抗体标记物垫⑵的制备用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，制备完成后取三份胶体金，分别用0.2MK2C03可将溶液pH调到pH7.5、pH8.5、pH9.5、然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每IOOml溶液0.5mg、l.0mgU.5mg鼠抗FSH-β单克隆抗体缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌I小时，再加入终浓度为0.2% BSA,0.1%聚乙二醇20000进行封闭30分钟，12000转离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至76.5ml，按Iml溶液铺16cm2的比例均匀地铺在无纺布上，再置温度20 25°C，湿度小于30%的干燥间干燥2 4小时，制成标记物垫，备用。(2)鼠抗FSH-α抗体包被用0.0lM pH7.2PBS 将鼠抗 FSH-α 抗体分别稀释成 1.0mg/mlU.5mg/ml、2.0mg/ml，然后用喷膜仪本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速定量检测尿样中促卵泡生成素(FSH)的方法，其特征在于，所述方法首先测定FSH含量，然后结合免疫层析判读仪中的标准曲线或比色卡读取试剂上显示的数值范围。
【技术特征摘要】
1.一种快速定量检测尿样中促卵泡生成素(FSH)的方法，其特征在于，所述方法首先测定FSH含量，然后结合免疫层析判读仪中的标准曲线或比色卡读取试剂上显示的数值范围。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中FSH含量的测量是通过FSH试剂(卡或条或笔)进行测定。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的比色卡通过以下的方法进行绘制:以国家参考品为参比，将FSH标准品溶液用正常人尿液(阴性)或牛血清稀释成浓度为0mIU/ml、5mIU/ml、10mIU/ml、25mIU/ml、40mIU/ml,平衡至室温,将制备好的试剂平放,加入待检标...
【专利技术属性】
技术研发人员：李洲，陈培培，
申请(专利权)人：天津中新科炬生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。