本发明专利技术提供了一种采用SPE-HPLC/UV检测烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留的方法，包括以下步骤：(1)标准溶液的配制：称取甲噻诱胺标准品，用有机溶剂溶解定容，制成标准储备液，将甲噻诱胺标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液；(2)提取烟叶和果蔬试样中残留；(3)净化：以丙酮-正己烷混合溶液溶解洗涤，转入到预先以正己烷、丙酮-正己烷活化的Florisil柱中，以丙酮-正己烷混合溶液洗脱；(4)液相色谱检测；(5)建立标准曲线；(6)计算分析甲噻诱胺残留量。本发明专利技术的检测方法能够快速、灵敏、准确的测定烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留量，为甲噻诱胺的检测提供了一种新的检测技术。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于痕量分析
，具体涉及一种采用SPE-HPLC/UV检测烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留的方法。
技术介绍
甲噻诱胺由南开大学研发，为杂环类杀菌剂，持效期较长，是植物诱导抗病激活齐U。主要用于防治子囊菌、担子菌等病原菌引起的多种病害，对白粉病、锈病、黑星病、灰斑病、褐斑病具有很好的防效，是一种前景较好的杀菌剂。但是作为一种新药，在农业上其使用还存在较大的盲目性。由于国内外对甲噻诱胺的相关研究较少，所以需对甲噻诱胺的检测方法及残留行为等方面开展深入和广泛的研究，为规范用药，保障农业生产和人民健康给予技术上的支持。目前对甲噻诱胺的残留分析国内外尚未见相关报道，在国内外还处于空白阶段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作较简单、对目标物干扰少，准确检测烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留的检测方法。该方法具有简便迅速、准确可靠的特点，对指导甲噻诱胺的安全合理使用，控制烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留具有重要价值。本专利技术是通过以下技术方案实现的: 一种采用SPE-HPLC/UV检测烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留的方法，包括以下步骤:(I)标准溶液的配制:称取甲噻诱胺标准品，用有机溶剂溶解定容，制成标准储备液，将甲噻诱胺标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液；(2)提取:称取烟叶或果蔬试样于锥形瓶中，加入甲醇溶液，震荡过滤；滤液加入NaCl溶液和石油醚混合溶液进行液液分配，重复萃取一次，合并上层有机相，水浴减压浓缩近干；(3)净化:浓缩瓶中残留物以丙酮-正己烷混合溶液溶解洗涤，转入到预先以正己烷、丙酮-正己烷活化的Florisil柱中，以丙酮-正己烷混合溶液洗脱，收集；合并流出液，水浴减压浓缩近干，以甲醇溶液溶解并定容；(4)仪器检测:待仪器状态稳定后，用第(I)步中的系列标准工作液进样，液相色谱检测，在此基础上，对第(3)步收集的净化样品进行液相色谱检测；(5)标准曲线的建立:采用峰面积定量，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；(6)结果分析:按以下公式计算试样中甲噻诱胺的含量Γ CixVixSixViR=- VsxSixWR—样品中甲噻诱胺残留量，单位mg/kg ；C1-标准溶液浓度，单位mg/L ；V1—标准溶液进样体积，单位μ L ;V2一样品溶液最终定容体积,单位mL ；V3—样品溶液进样体积，单位μ L ；S1—标准溶液的峰高，AU ；S2—样品溶液的峰高，AU ； W—样品称取质量，单位g ；进一步地，所述步骤⑴中称取甲噻诱胺标准品的重量为0.01g±0.2mg ;有机溶剂采用色谱甲醇。进一步地,所述步骤(I)中标准储备液是指制成100mg/L储备液。进一步地，所述步骤(2)中甲醇使用量为6_15mL/g试样；NaCl质量浓度为10%，使用量为0.15mL/mL浓缩液。进一步地，所述步骤(3)丙酮-正己烷混合溶液中丙酮和正己烷的体积比为2:8。进一步地,所述步骤(4)中液相色谱选用Waters Alliance e2695高效液相色谱，配2487紫外检测器；色谱柱选用Waters Sun Fine, 5.0 μ m, 4.6 X 250mm ;检测条件:测定波长:230nm；进样量:IOyL;流动相:甲醇:水=60: 40 ；流速:0.5mT ,/mi η。进一步地，所述步骤(5)中进样浓度为0.05,0.1,0.5、1.0,5.0,10.0mg/L。与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果是:1、本专利技术采用液液萃取和固相萃取相结合的方法，对提取液进行净化。与单一的液液萃取或柱层析相比，净化效果更好，能够有效去除果蔬以及复杂基质烟叶中的极性和非极性两种杂质。不仅提高了检测的准确性，而且能够有效减小杂质对色谱柱和检测器的污染，提高仪器的使用寿命。2、本专利技术选择230nm作为检测波长，甲噻诱胺在紫外区的吸收整体效果好，干扰因素少，能够准确方便、快速的检测出烟叶和果蔬中甲噻诱胺的含量，其最小检出量为1.3 X I(Γ11,最低检出浓度为0.02mg/kg。本专利技术的检测方法能够快速、灵敏、准确的测定烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留量，为甲噻诱胺的检测提供了一种新的检测技术。附图说明图1是实施例1的甲噻诱胺标准色谱图；图2是实施例1的甘蓝空白样品色谱图；图3是实施例1的添加甲噻诱胺的甘蓝样品色谱图；图4是实施例2的烟叶空白样品色谱图；图5是实施例2的添加甲噻诱胺的烟叶样品色谱图；其中，图1、3、5中标注保留时间的色谱峰代表甲噻诱胺。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。下面分别以甘蓝中甲噻诱胺残留量检测和烟叶甲噻诱胺残留量检测为例，并结合附图详述本专利技术的技术方案，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变更或改进，均属于本专利技术的保护范围。实施例1:甘蓝中甲噻诱胺残留量的检测(I)提取称取10.0g甘蓝样品于250mL磨口三角瓶中，加入60mL甲醇，震荡提取lh，滤纸过滤，再加入40mL甲醇震荡提取，合并提取液，45°C浓缩至40mL左右，加入6mL10%NaCl溶液，石油醚40、30、30ml液液分配，收集甲醇层，45°C浓缩至近干，2mL丙酮/正己烷(2:8，V/V)溶解残渣，待净化。(2)净化弗罗里硅土 SPE柱(lg/6mL)净化，先用5mL正己烷、5mL丙酮/正己烷(2:8，V/V)预淋洗SPE柱，样品浓缩液以1 2滴/秒速度过柱，151^丙酮/正己烷(2:8，V/V)分3次洗瓶后淋洗，收集流出液于IOOmL平底烧瓶中，在旋转蒸发仪上45°C减压浓缩至近干，用2mL甲醇定容,过0.45 μ m滤膜,待测定。(3)液相色谱检测 液相色谱检测条件为:高效液相色谱仪-紫外检测器(HPLC-UV)，WatersAlliance e2695/2487。色谱柱:WatersSun Fine, 5.0 μ m, 4.6 X 250mm 流动相:甲醇/水溶液(V/V，60:40)柱温:常温。测定波长:230nm。进样量:10μ L。在上述条件下所得的标准色谱图见图1。保留时间为13.5min。4.标准曲线的建立称取0.0lOOg甲噻诱胺标准品，用甲醇溶解定容至IOOmL,制成100mg/L储备液。将甲噻诱胺标准储备液逐级稀释，配制成0.05,0.1,0.5、1.0,5.0、10.0mg/L的标准工作液。以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。所得标准曲线回归方程为:y=37696x-826.31，相关系数 R=L O。5.计算公式本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种采用SPE?HPLC/UV检测烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)?标准溶液的配制：称取甲噻诱胺标准品，用有机溶剂溶解定容，制成标准储备液，将甲噻诱胺标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液；(2)?提取：称取烟叶或果蔬试样于锥形瓶中，加入甲醇溶液，震荡过滤；滤液加入NaCl溶液和石油醚混合溶液进行液液分配，重复萃取一次，合并上层有机相，水浴减压浓缩近干；(3)?净化：浓缩瓶中残留物以丙酮?正己烷混合溶液溶解洗涤，转入到预先以正己烷、丙酮?正己烷活化的Florisil柱中，以丙酮?正己烷混合溶液洗脱，收集；合并流出液，水浴减压浓缩近干，以甲醇溶液溶解并定容；(4)?仪器检测：待仪器状态稳定后，用第(1)步中的系列标准工作液进样，液相色谱检测，在此基础上，对第(3)步收集的净化样品进行液相色谱检测；(5)?标准曲线的建立：以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；(6)?结果分析：按以下公式计算试样中甲噻诱胺的含量R=????????????????????????????????????????????????R—样品中甲噻诱胺残留量，单位mg/kg；C1—标准溶液浓度，单位mg/L；V1—标准溶液进样体积，单位μL；V2—样品溶液最终定容体积，单位mL；V3—样品溶液进样体积，单位μL；S1—标准溶液的峰高，AU；S2—样品溶液的峰高，AU；W—样品称取质量，单位g。...
【技术特征摘要】
1.一种采用SPE-HPLC/υν检测烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留的方法，其特征在于包括以下步骤: (1)标准溶液的配制:称取甲噻诱胺标准品，用有机溶剂溶解定容，制成标准储备液，将甲噻诱胺标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液； (2)提取:称取烟叶或果蔬试样于锥形瓶中，加入甲醇溶液，震荡过滤；滤液加入NaCl溶液和石油醚混合溶液进行液液分配，重复萃取一次，合并上层有机相，水浴减压浓缩近干; (3)净化:浓缩瓶中残留物以丙酮-正己烷混合溶液溶解洗涤，转入到预先以正己烷、丙酮-正己烷活化的Florisil柱中，以丙酮-正己烷混合溶液洗脱，收集；合并流出液，水浴减压浓缩近干，以甲醇溶液溶解并定容； (4)仪器检测:待仪器状态稳定后，用第(I)步中的系列标准工作液进样，液相色谱检测，在此基础上，对第(3)步收集的净化样品进行液相色谱检测； (5)标准曲线的建立:以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线； (6)结果分析:按以下公式计算试样中甲噻诱胺的含量2.根据权利要求1所述检测烟叶和果蔬中甲噻诱胺残留的方法，其特征在于:所述步骤(I)中称取甲噻诱胺标准品的重量为0.01 g±0.2 mg;有机溶剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：王秀国，李义强，徐金丽，徐光军，孙惠青，郑晓，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所，
类型：发明
国别省市：
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