一种检测细胞内硫化氢的荧光探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种检测细胞内硫化氢的荧光探针及其制备方法和应用，将Cy7荧光染料、乙酸钠溶解在无水DMF中，在Ar气保护下加热回流2-4h，得到的混合物冷却后抽滤，母液在-4～20℃低温结晶，抽滤得酮式花菁红棕色晶体；将邻甲酰基苯甲酸、草酰氯溶解在无水CH2Cl2中然后加入少量DMF，在0℃搅拌2-6h，得邻甲酰基苯甲酰氯；将酮式花菁、三乙胺溶于无水CH2Cl2，冷却至0℃，逐滴加入邻甲酰基苯甲酰氯并在0℃下搅拌10-30min，混合物加热至室温，搅拌过夜，抽滤，旋干，用色谱柱进行分离，旋干得绿色固体，结构式如下。本发明专利技术荧光探针合成简单，检测速度快，检测过程中不需要长时间的孵育，灵敏度高，可以检测到细胞内源性的硫化氢。

【技术实现步骤摘要】

:本专利技术涉及一种荧光探针，特别涉及一种花菁类染料荧光探针、其合成方法及其在检测细胞内硫化氢的应用，属于检测

技术介绍
:长久以来，硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)这一具有臭鸡蛋气味的气体，多年来，人们一直认为H2S仅是一种有毒气体，人们对于它的研究仅限于其毒性作用。20世纪90年代中期，人们发现机体可以内源性产生H2S气体，它在体内主要由胱硫醚-β -合成酶(cystathionine-β -synthase, CBS)、胱硫醚-Y —裂解酶(cystathionine- Y -lyase,CSE)，催化L-半胱氨酸产生H2S。CSE基因在主动脉、肺动脉、肠系膜动脉、尾动脉和门静脉中均有表达，而CBS基因主要表达于中枢神经系统中。H2S具有调节神经、心血管和消化系统功能的作用，参与肺动脉高压、动脉硬化、内毒素休克、出血性休克及心肌缺血性受损等的病理生理过程，被认为是继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后的一种新的气体信号分子。内源性气体信号分子因其具有持续产生、传播迅速等特点。目前的硫化氢检测技术，如比色法，电化学法，气相色谱法，和金属诱导的硫化物沉淀，往往需要延后处理或破坏的组织或产生细胞裂解物。近年用于检测体内硫化氢的突光探针，比较少见。如突光素为母体(HanjingPeng,YunfengCheng, Chaofeng Dai,Adrienne L.King, Benjamin L.Predmore, DavidJ.Lefer，and Binghe Wang, Angew.Chem.1nt.Ed.2011, 50, 9672-9675)的探针，选择性好，检测前后荧光增强到原来的55-70倍，但是此探针反应时间长(lh)，激发波长在可见光区(488nm)；以 BODOPY 为母体和(Yong Qian, Jason Karpus, OmerKabil,Shu-Yu Zhang, Ha1-Liang Zhu, Ruma Banerjee, JingZhao,Chuan He,NatureCommunications.2011, 2, 495)以罗丹明为母体的(AlexanderR.Lippert, ElizabethJ.New, and Christopher J.Chang, J.Am.Chem.Soc., 2011, 133:10078-10080)突光探针，虽然选择性好，但是反应时间长(20min或lh);部分检测硫化氢的荧光探针因为波长短，溶解性差等因素不能用于活体内，如(Hanjing Peng, Yunfeng Cheng, Chaofeng Dai, AdrienneL.King, Benjamin L.Predmore, David J.Lefer, and Binghe Wang, Angew.Chem.1nt.Ed.2011, 50, 9672-9675)，此探针虽是个快速反应，但是所选的丹酰为母体，激发为340nm，波长短，如果用于活体会造成损伤。总的来说以上荧光探针一般水溶性不好，而且激发发射波长多处于紫外可见光区，从而限制了它们在生物体内的应用。这就需要研制一种荧光波长长的，水溶性好的荧光探针。而花菁类荧光探针发射波长在近红外区，不易被生物介质基质吸收，对组织损伤小且穿透力强，能很好的用于活体
技术实现思路
: 本专利技术的目的在于克服目前硫化氢检测荧光探针的不足，提供一种检测细胞内硫化氢的荧光探针及其制备方法和应用，该类荧光探针结构新颖、灵敏度、选择性好、光稳定性好。本专利技术采取的技术方案为:一种检测细胞内硫化氢的荧光探针，其结构式如下:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测细胞内硫化氢的荧光探针，其结构式如下：FDA00002499719300011.jpg

【技术特征摘要】
1.一种检测细胞内硫化氢的荧光探针，其结构式如下:2.权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法，其特征是，包括步骤如下: (1)将Cy7荧光染料、乙酸钠溶解在无水DMF中，在Ar气保护下加热回流2_4h，得到的混合物冷却后抽滤，母液在-4 20°C低温结晶，抽滤得酮式花菁红棕色晶体； (2)将邻甲酰基苯甲酸、草酰氯溶解在无水CH2Cl2中然后加入少量DMF，在0°C搅拌2-6h，得邻甲酰基苯甲酰氯； (3)将酮式花菁、三乙胺溶于无水CH2Cl2，冷却至0°C，逐滴加入邻甲酰基苯甲酰氯并在(TC下搅拌10-30min，混合物加热至室温，搅拌过夜，抽滤，旋干，用色谱柱进行分离，旋干得绿色固体。3.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法，其特征是，步骤(I)中所述的Cy7荧光染料、乙酸钠的质量比为2.3:1 ;无水DMF用量为每克乙酸钠用200-300 毫升。4.根据权利要求1所述的检测细胞内硫化氢的荧光探针的制备方法，其特征是，步骤(2)中邻甲酰基...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐波，王栩，孙娟，马晓旭，吕建政，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：