本发明专利技术公开了一种五肽、以其为活性中心的多肽、环肽衍生物和化合物以及以其为活性中心的免疫抑制药物，以及其用于免疫抑制药物中的应用。本发明专利技术的五肽TIPP(thymic?immunosuppressive?pentapeptide)，来源于LMW-TISE-c（低分子量牛胸腺免疫抑制提取物），它是如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列：Ala-Glu-Trp-Cys-Pro。本发明专利技术是多年来首次从胸腺免疫抑制组分中获取结构确定的成分。该五肽来源于胸腺免疫抑制提取物（TISE），本发明专利技术可用于制备免疫抑制药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种五肽、以其为活性中心的多肽、环肽衍生物和化合物以及以其为活性中心的免疫抑制药物，以及其用于免疫抑制药物中的应用。
技术介绍
胸腺是哺乳动物重要的中枢免疫器官。胸腺除了提供一个T细胞发育所需的细胞微环境外，还产生多种多肽激素，这些激素影响T细胞的分化和成熟，也有调节成熟T细胞功能的作用，对机体免疫学功能的发挥具有重要意义。目前，国内外对胸腺中增强机体免疫能力的提取物或因子已有较深刻的认识和研究，如胸腺素和胸腺五肽，但对胸腺中免疫抑制作用的因子研究报道较少。I960年，Bullough及Laurence自上皮细胞分离得到了一种上皮细胞分裂的抑制物质，并提出了抑素(Chalone)的概念。抑素是一类内源性的细胞生长抑制因子。自20世纪70年代，人们陆续从牛、猪和人胚胸腺中提得了抑制淋巴细胞分裂的抑素样物质，研究表明其有免疫抑制活性且无细·胞毒性。国外研究胸腺来源具有免疫抑制功能的物质主要是指抑素样物质。因从胸腺中提取得到的抑素样物质均为未知混合物，研究者对其的成分及性质进行了研究。Houck等曾分离出分子量为30kD 50kD的免疫抑制物，含有核酸，具有热敏感性，后来，他们将其经核糖核酸酶水解后超滤，回收具有免疫抑制活性的组分并推测抑素为分子量在5kD左右的荷正电的糖肽。法国的Kiger等通过凝胶过滤和离子交换层析制得淋巴细胞抑制因子，经分析推测其可能为一种具有热稳定性、结合于核苷酸的碱性多肽。Alien等认为淋巴细胞抑制因子的生物活性物质为精胺，分子量只有202D，在提取物中与一种组织特异性物质结合成紧密的精胺复合物而显示特异的免疫抑制活性。Rijke等发现淋巴细胞抑制因子是精胺与蛋白质结合的复合物，在淋巴细胞转化抑制试验中，真正起抑制作用的是精胺，但在以精胺为对照的研究中发现它并不能抑制淋巴细胞转化。Patt等证明淋巴细胞转化抑制因子为分子量500D 600D、疏水、酸性、含有巯基的肽。Blazsek证明淋巴细胞转化的抑制物为PI5.9的组分，加热、加入蛋白质变性剂(4mol/L去离子脲)或蛋白酶，都能使其活性受到破坏，但用核糖核酸酶消化对其活性没有影响。虽然早期研究者对胸腺来源的免疫抑制物的性质进行了研究，但近来对其的研究未见报道，也未见自其中发现结构明确的单一化合物。
技术实现思路
本专利技术的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种五肽、以其为活性中心的多肽、环肽衍生物和化合物以及以其为活性中心的免疫抑制药物，以及其用于免疫抑制药物中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案:一种胸腺免疫抑制五妝 TIPP (thymic immunosuppressive pentapeptide),来源于LMW-TISE-c (低分子量牛胸腺免疫抑制提取物)，它是如SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列:Ala-Glu-Trp-Cys-Pro。以所述五肽为活性中心，从其N端或C端添加L-氨基酸、D-氨基酸、羟基氨基酸、甲基化氨基酸或杂环氨基酸中的一个或多个得到的多肽。所述杂环氨基酸为色氨酸、组氨酸或脯氨酸。所述五肽的N端和C端连接成环得到的环肽衍生物。所述五肽的N端经乙酰化、甲酰化、烷基化或C端经氨酰化或酯化得到的化合物，较所述五肽的生物活性、半衰期、稳定性等有了很大提高。所述烧基化为甲基化、乙基化、丙基化或丁基化。所述酯化为与甲醇、乙醇、丁醇或己醇酯化反应。一种免疫抑制药物，其活性成分包括上述五肽、多肽、环肽衍生物或化合物在制备免疫抑制药物中的应用。上述五肽、多肽、环肽衍生物或化合物在制备免疫抑制药物中的应用。本专利技术的五肽可采用现有技术中的公知方法获得。既可以用多肽自动合成仪进行化学合成，又可以将短肽序列推导成核苷酸序列，然后克隆到表达载体中进行生物合成。本专利技术提供了一种免疫抑制药物，其活性成分包括所述的五肽、以其为活性中心的多肽、环肽衍生物和化合物。上述免疫抑制药物中还可含有一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，必要时还可以加入香味剂、甜味剂等。本专利技术的免疫抑制药物可以制成注射剂、粉针剂、吸入剂、片剂、粉剂、胶囊、口服液等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。本专利技术还提供了所述五肽、以其为活性中心的多肽、环肽衍生物和化合物在制备免疫抑制药物中的应用。特别是，所述五肽在制备用于自身免疫性疾病、器官移植、变态反应性疾病以及炎症性疾病的药物中的应用。山东医科大学(现山东大学)药学院于20世纪80年代中期进行胸腺素开发研究时发现，用酸性提取方法制备的胸腺免疫抑制药物以免疫促进活性为主，而用碱性提取方法制备的胸腺制剂以免疫抑制活性为主。因制备方法与已报道的胸腺来源的免疫抑制药物的不同，申请人将用碱性提取法制备的提取物命名为胸腺免疫抑制提取物(thymicimmunosuppressive extract, TISE)。通过对TISE的生物活性和药理作用及不同动物胸腺来源的TISE活性的异同的研究发现，TISE对细胞免疫和体液免疫均有抑制作用，对非特异性免疫功能也有抑制作用，可以有效地抑制皮肤移植的排斥反应，还有抗I型变态反应和III型变态反应的作用，且TISE的活性没有种属特异性。这提示申请人TISE作为一种新型的免疫抑制药物的可能性。本专利技术的有益效果是:为减少异种来源的TISE用于人体引起过敏反应的可能，运用超滤技术，将小牛胸腺来源的TISE (TISE-c)制备成了分子量较 小、且生物活性较强的低分子量TISE-c (LowMolecular Weight TISE_c，LMW-TISE-c)。在此基础上，进一步采用微球菌核酸酶降解LMW-TISE-c及RP-HPLC分离，结合酸水解，最终纯化出一个分子量为604.95D的由5个氨基酸残基组成的多肽，其结构为K -AEWCP-C' (Ala-Glu-Trp-Cys-Pro)。本专利技术是多年来首次从胸腺免疫抑制组分中获取结构确定的成分。该五肽来源于TISE，基于之前对TISE的活性研究，本专利技术可用于制备免疫抑制药物。附图说明图1为不同药物浓度对ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用。##表示与空白组相比，P〈0.01，有显著性差异；#表示与Con A组相比，p〈0.01，有显著性差异。图2为不同药物浓度对LPS刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用。##表示与空白组相比，p〈0.01,有显著性差异；**表示与Con A组相比，p〈0.01,有显著性差异。图3为不同浓度药物对小鼠脾淋巴细胞的毒性。图4为不同药物浓度对RAW264.7细胞的活力的影响。**表示与空白组相比， p〈0.01,有显著性差异。图5为不同浓度药物对LPS刺激的RAW264.7细胞吞噬作用的影响。#表示与空白组相比，p<0.05,有差异，##表示与空白组相比，P < 0.01,有显著性差异；*表示与模型组相比，P < 0.05，有差异，**表示与模型组相比，P < 0.01，有显著性差异。图6为不同浓度药物在卵清蛋白(OVA)诱导的小鼠哮喘模型中肺组织学影响(HE染色);a.空白组(X 100)，b.模型组(X 10本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种胸腺免疫抑制五肽，其特征在于，它是如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列：Ala?Glu?Trp?Cys?Pro。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王凤山，王爱军，廉倩倩，曹吉超，程艳娜，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：
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