针对HER2的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术公开了结合人表皮生长因子受体2(HER2)的分离的单克隆抗体，以及基于相关抗体的组合物和分子。本发明专利技术还公开了包含所述抗体的药物组合物和使用所述抗体的治疗和诊断方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对HER2的单克隆抗体专利
本专利技术涉及针对人表皮生长因子受体2(HER2)的单克隆抗体，和这类抗体的用途，尤其是它们在治疗癌症中的用途。专利技术背景HER2是185-kDa的细胞表面受体酪氨酸激酶，是表皮生长因子受体(EGFR)家族的成员，该家族包括四种不同的受体：EGFR/ErbB-1，HER2/ErbB-2，HER3/ErbB-3和HER4/ErbB-4。EGFR家族的四个成员形成同源和异源二聚体，HER2是对于其他ErbB受体优选并且最有效的二聚体伴侣(Graus-Porta等，EmboJ1997；16：1647-1655；Tao等，JCellSci2008；121：3207-3217)。可以通过过表达或者通过与可以被配体结合而活化的其他ErbBs的异源二聚化而活化HER2(Riese和Stern，Bioessays1998；20：41-48)。对于HER2，没有鉴别到任何配体。HER2活化导致受体磷酸化，这通过多种信号通路如MAPK、磷酸肌醇3-激酶/AKT、JAK/STAT和PKC触发下游信号的级联，这最终导致多种细胞功能如生长、生存和分化的调控(Huang等，ExpertOpinBiolTher2009；9：97-110)。对HER2在肿瘤中的很多注意力集中在其在乳腺癌中的作用，其中报道了HER2在约20％的病例中过表达并且HER2过表达与预后较差相关(Reese等，StemCells1997；15：1-8；Andrechek等，ProcNatlAcadSciUSA2000；97：3444-3449；和Slamon等，Science1987；235：177-182)。除了乳腺癌，HER2表达还与其他人肿瘤类型，包括前列腺癌，非小细胞肺癌，膀胱癌，卵巢癌，胃癌，结肠癌，食管癌和头部和颈部的鳞状细胞癌相关(GarciadePalazzo等，IntJBiolMarkers1993；8：233-239；Ross等，Oncologist2003；8：307-325；Osman等，JUrol2005；174：2174-2177；Kapitanovic等，Gastroenterology1997；112：1103-1113；Turken等，Neoplasma2003；50：257-261；和Oshima等，IntJBiolMarkers2001；16：250-254)。曲妥珠单抗是重组的人源化的单克隆抗体，其针对HER2蛋白的结构域IV，从而在高HER2过表达的细胞中阻断配体非依赖性HER2同源二聚化，导致在更小的程度上HER2与其他家族成员的异源二聚化(Cho等，Nature2003；421：756-760和Wehrman等，ProcNatlAcadSciUSA2006；103：19063-19068)。在具有适度HER2表达水平的细胞中，发现曲妥珠单抗(trastuzumab)抑制HER2/EGFR异源二聚体的形成(Wehrman等，(2006)，同上；Schmitz等.，ExpCellRes2009；315：659-670)。曲妥珠单抗介导抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)并防止胞外结构域脱落，否则胞外结构域脱落可以导致HER2过表达细胞中截短的组成型活性的蛋白的形成。对于曲妥珠单抗也已经报道了表达高水平的HER2的肿瘤细胞的体外和体内增殖的抑制(Nahta和Esteva的综述，Oncogene2007；26：3637-3643)。已经批准了用于HER2过表达的转移性乳腺癌第一线和辅助治疗，或与化疗相结合，或作为遵循一个或多个化疗方案的单一药物。已经发现曲妥珠单抗仅在20-50％的HER2过表达的乳腺癌肿瘤患者中是有效的，许多初始应答者在几个月后表现复发(Dinh等，ClinAdvHematolOncol2007；5：707-717)。帕妥珠单抗(OmnitargTM)是另一种人源化单克隆抗体。它针对HER2蛋白的结构域II，导致配体诱导的异源二聚化(即，HER2与已经被配体结合的ErbB家族的另一个成员的二聚化)的抑制；据报道不严格地要求高HER2表达水平的机制(Franklin等.，CancerCell2004；5：317-328.)。尽管帕妥珠单抗也介导ADCC，帕妥珠单抗的作用的主要机制依赖于其二聚化阻断(Hughes等，MolCancerTher2009；8：1885-1892)。此外，发现帕妥珠单抗增强EGFR内化并通过抑制EGFR/HER2异源二聚体的形成而增强下调，否则使EGFR拴系(tether)于质膜(Hughes等，2009，同上)。这与EGFR二聚体比EGFR/HER2二聚体更有效地内化这一观察结果相关(Pedersen等，MolCancerRes2009；7：275-284。据报道，当在以前的曲妥珠单抗治疗期间进展的患者中组合时，帕妥珠单抗和曲妥珠单抗的作用的互补机制导致增强的抗肿瘤效果和有效性(Baselga等，JClinOncol2010；28：1138-1144)，评价在以前未治疗的HER2阳性转移性乳腺癌中这种抗体与多西他赛(Docetaxel)共同组合的III期试验正在进行中。改进靶向抗体治疗的另一种方法是通过将细胞毒性细胞或药物特异性递送至表达抗原的癌细胞。例如，所谓的三功能性抗体是双特异性抗体，具有一个靶向肿瘤细胞上的抗原的臂以及另一个靶向T细胞上的抗原例如CD3的臂。结合后，形成结合Fc的T细胞、肿瘤细胞和效应物细胞的复合物，导致杀死肿瘤细胞(Muller和Kontermann，BioDrugs2010；24：89-98)。Ertumaxomab就是这种针对HER2的三功能性抗体，其在低HER2表达的细胞系中诱导细胞毒性，在转移性乳腺癌的II期临床开发中(Jones等，LancetOncol2009；10：1179-1187和Kiewe等，ClinCancerRes2006；12：3085-3091)。HER2抗体药物缀合物(ADC)目前在临床开发中。T-DM1由与真菌毒素maytansine缀合的曲妥珠单抗组成。Burris等，2011，JClinOncol29：398-405和LewisPhillips等，CancerRes2008；68：9280-9290)报道了在II期试验中严重预处理患者组群(包括以前的曲妥珠单抗和/或拉帕替尼(lapatinib)治疗)中的应答。报道了来自II期试验的初步数据，其测定了T-DM1比曲妥珠单抗联合多西他赛在没有以前用于转移性疾病的化疗的her2-阳性转移性乳腺癌患者中的疗效和安全性(Perez等，AbstractBA3，EuropeanSocietyforMedicalOncologymeeting2010)。III期试验正在进行中，其中评价T-DM1比卡培他滨+拉帕替尼在以前接受曲妥珠单抗治疗的HER2-阳性的局部晚期或转移性乳腺癌的患者中的疗效和安全性。尽管许多因素参与选择用于HER2靶向治疗的合适的抗体，如果HER2-抗体复合物在抗体结合后有效地内化，这对于ADC方法通常是一种优势。对于小鼠HER2抗体的研究显示，抗体的某些组合促进HER2内吞作用(Ben-Kasus等，PNAS2009；1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.27 DK PA201000467;2011.04.20 DK PA201100311.单克隆抗体，所述单克隆抗体结合人表皮生长因子受体2(HER2)，所述单克隆抗体包含VH区和VL区，其中所述VH区包含SEQIDNO：2的CDR1、SEQIDNO：3的CDR2和SEQIDNO：4的CDR3；且所述VL区包含SEQIDNO：6的CDR1、DAS的CDR2和SEQIDNO：7的CDR3。2.权利要求1的抗体，其中所述VH区源自IgHV1-18-1种系，所述VL区源自IgKV3-11-01。3.单克隆抗体，所述单克隆抗体结合人表皮生长因子受体2(HER2)，所述单克隆抗体包含VH区和VL区，其中所述VH区包含序列SEQIDNO：1，且所述VL区包含序列SEQIDNO：5。4.权利要求1-3中任一项的抗体，当如实施例12中所述测定时，所述抗体对于结合表达HER2的细胞具有低于0.80µg/ml的EC50值。5.权利要求4的抗体，当如实施例12中所述测定时，所述抗体对于结合表达HER2的细胞具有低于0.50µg/ml的EC50值。6.权利要求1-3中任一项的抗体，当如实施例15中所述测定时，所述抗体诱导ADCC，实现至少30%的51Cr-释放。7.权利要求6的抗体，当如实施例15中所述测定时，所述抗体诱导ADCC，实现至少40%的51Cr-释放。8.权利要求1-3中任一项的抗体，当如实施例16中所述测定时，所述抗体抑制表达HER2的细胞的配体-非依赖性增殖。9.权利要求1-3中任一项的抗体，当如实施例17中所述测定时，所述抗体不促进表达HER2的细胞的配体-诱导的增殖。10.权利要求1-3中任一项的抗体，当如实施例18中所述测定时，当所述抗体直接或间接缀合于治疗部分时，所述抗体杀死至少49%的表达HER2的细胞。11.权利要求10的抗体，其中所述治疗部分为假单胞菌-外毒素A的截短形式。12.权利要求1-3中任一项的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体，其包括如前述权利要求中任一项所定义的抗体的抗原结合区，和具有不同结合特异性的第二抗原结合位点。13.权利要求12的抗体，其中所述不同结合特异性为对人效应细胞、人Fc受体、T细胞受体或HER2的非阻断表位的结合特异性。14.双特异性抗体，包括(i)包含根据权利要求1-13中任一项所述的抗体的抗原结合区的第一抗体和(ii)包含抗原结合区的第二抗体，其中所述第二抗体与所述第一抗体相比结合不同的表位。15.权利要求14的双特异性抗体，其中所述第二抗体选自：权利要求1-9中任一项的抗体，含有包含SEQIDNO：168的CDR3序列的VH区的抗体，和CD3抗体。16.权利要求14-15中任一项的双特异性抗体，其中所述第二抗体包含VH区，所述VH区包含SEQIDNO：166的CDR1、SEQIDNO：167的CDR2和SEQIDNO：168的CDR3。17.权利要求16的双特异性抗体，其中所述第二抗体包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQIDNO：166的CDR1、SEQIDNO：167的CDR2和SEQIDNO：168的CDR3；所述VL区包含SEQIDNO:169的CDR1、GAS的CDR2和SEQIDNO：170的CDR3。18.权利要求17的双特异性抗体，其中所述第二抗体包含VH区和VL区，所述VH区包含序列SEQIDNO：164，所述VL区包含序列SEQIDNO：165。19.权利要求15、17和18中任一项的双特异性抗体，其中所述CD3抗体包含a)包含序列SEQIDNO：171的VH区和包含序列SEQIDNO：172的VL区；或b)包含序列SEQIDNO：173的VH区和包含序列SEQIDNO：174的VL区。20.权利要求1、3和14中任一项的抗体，其中所述抗体是全长抗体。21.权利要求20的抗体，其中所述抗体是IgG1抗体。22.权利要求20的抗体，其中所述抗体是IgG1,κ抗体。23.权利要求1、3和14中任一项的抗体，其中所述抗体与另一个部分相缀合。24.权利要求23的抗体，其中所述另一个部分为细胞毒性部分、放射性同位素、药物或细胞因子。25.权利要求24的抗体，其中所述细胞毒性部分选自紫杉醇；细胞松弛素B；短杆菌肽D；溴化乙锭；依米丁；丝裂霉素；依托泊苷；鬼臼噻吩苷；长春新碱；长春花碱；秋水仙碱；多柔比星；柔红霉素；二羟炭疽菌素二酮；微管蛋白抑制剂；米托蒽醌；光神霉素；放线菌素D；1-去氢睾酮；糖皮质激素；普鲁卡因；丁卡因；利多卡因；普萘洛尔；嘌呤霉素；卡里奇霉素；抗代谢物；烷化剂；抗生素；抗有丝分裂剂；白喉毒素和相关分子及其活性片段和杂合分子、蓖麻毒蛋白毒素、霍乱毒素、志贺样毒素、LT毒素、C3毒素、志贺毒素、百日咳毒素、破伤风毒素、大豆Bowman-Birk蛋白酶抑制剂、假单胞菌外毒素、alorin、皂苷、蒴莲素、gelanin、相思豆毒蛋白A链、蒴莲素A链、α-帚曲霉素、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制剂、白树毒素、mitogellin、局限曲霉素、酚霉素和依诺霉素毒素；核糖核酸酶(RNase)；DNaseI、葡萄球菌内毒素A；美洲商陆抗病毒蛋白；白喉毒素；和假单胞菌内毒素。26.权利要求25的抗体，其中所述微管蛋白抑制剂为美登素I；所述抗代谢物为氨甲蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、氟达拉宾、5-氟脲嘧啶、达卡巴嗪、羟基脲、天冬酰胺酶、吉西他滨或克拉屈滨；所述烷化剂为氮芥、thioepa、苯丁酸氮芥、美法仑、卡氮芥(BSNU)、洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、达卡巴嗪(DTIC)、丙卡巴肼、丝裂霉素C、顺铂、卡铂、duocarmycinA、duoc...

【专利技术属性】
技术研发人员：Bd戈艾杰，Sd海杰，T里德尔，R霍埃特，O巴德斯加尔德，Jvd温克尔，D萨蒂恩，P帕伦，AF拉布里恩，J梅斯特斯，J舒尔曼，ENvd布林克，
申请(专利权)人：根马布股份公司，
类型：
国别省市：