本发明专利技术公开一种测定烟草中麦草畏残留量的方法，该方法包括以下步骤：提取烟草中的目标物、N-丙基乙二胺纯化、标准储备液和标准工作液的配制和液相色谱-串联质谱测定。本发明专利技术的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，针对烟草样本优化了前处理条件，并对LC-MS/MS的相关检测条件进行了优化，主要优化了离子源条件，色谱柱以及流动相体系。与传统的气相色谱比较，采用基质分散固相萃取法来检测麦草畏。简化了前处理过程，提高了分析灵敏度。与HPLC方法相比，由于选取了超高效液相色谱柱RP18，使得柱子的分离度明显提高，分析时间显著缩短。串联质谱的使用使得方法的选择性和灵敏度提高，更有利于低含量的除草剂残留的测定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及属于农药残留检验
，具体涉及烟草中麦草畏残留量的测定方法。
技术介绍
麦草畏是第一类投入商业生产的选择性除草剂，广泛施用于禾谷类作物田、针叶树林和牧草场等。麦草畏都为低毒除草剂，通过植物叶面、茎杆和根系吸收传导，阻碍植物激素的正常传导，从而使其死亡。但在使用过程中，结果表明此类物质可以引起人类软组织恶性肿瘤，对动物体表现出胎盘毒性。C0RESTA的农用化学品咨询委员会(ACAC)在2008年制定的118种农用化学品指导性残留限量表中将麦草畏的限量定为0.20mg/kg。对于水、土壤、蔬果以及纺织品中麦草畏残留的检测已有相关报道，而对于烟草中麦草畏残留的检测报道较少。iKlkl、me;vV.等利用在线的液相色谱-气相色谱联用法测定了烟草中的麦草畏，酯化后的烟草样品进入液相色谱分离，选取合适的保留时间段切入气相色谱再次分离，然后通过电子捕获检测器检测。刘惠民等研究开发了非水相毛细管电泳法测定烟草中的麦草畏，2,4-D和2,4, 5-T残留,其中麦草畏的检出限为0.5 μ g/mL,烟草样品经乙酸乙酯超声萃取，凝胶渗透色谱净化后，进入毛细管电泳仪检测分析。宋娟梅等改进报道的毛细管电泳法，采用正交法设计实验，优化毛细管电泳法，并将优化好的方法应用于烟草中2，4-D、2，4，5-T、麦草畏的测定。烟草行业也于2004年制定了相应的行业标准，其中麦草畏、2，4-D、2，4，5-T选取盐酸水溶液萃取，旋转蒸发浓缩，三甲基氢氧化锍衍生化，GC-MS分析，其前处理复杂费时，检测时间较长，不利于高通量样品的快速准确检测。非水毛细管电泳法的检出限较高，且分离度效果不如色谱方法。超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)在农残检测的灵敏度以及选择性方面都明显优于传统方法，在分析速度方面优于普通的HPLC方法，而目前未见该检测方法应用检测烟草中的麦草畏残留量。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术目的在于提供一种前处理简单、检测时间短，利于高通量样品的快速准确的麦草畏残留量的测定方法。为解决以上技术问题，本专利技术提供的技术方案是，提供一种测定烟草中麦草畏残留量的方法，该方法包括以下步骤:I)提取烟草中的目标物称取烘干磨好的烟叶样品，加入纯水浸润，依次加入氘代内标，乙腈和甲酸，涡漩混合振荡。放入冰箱冷冻后取出，依次加入无水硫酸镁，氯化钠，柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，润旋振汤后尚心。2) N-丙基乙二胺(PSA)纯化移取上清液于新的离心管中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，于漩涡振荡混合，然后高速离心。吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用乙腈和超纯水稀释后待测。3)标准储备液和标准工作液的配制用乙腈配置麦草畏标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，-20°C保存。取一定量的储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合标准储备液(10g/mL)。用乙腈准确配置麦草畏-d3氘带内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，_20°C保存。取一定量的内标储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合内标标准储备液(IOg/mL)。所有的储备液于冰箱_20°C，使用前将其恢复到室温。用国际烟草科学研究合作中心(C0RESTA)空白烟叶的萃取基质配制不同浓度的麦草畏标准工作溶液；4)液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定:吸取空白烟叶溶液和配制好的不同浓度的麦草畏标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，按内标法以峰面积计算出样品待测液中麦草畏含量。优选地,所述烟叶的重量为2g。优选地，步骤I)中所述冷冻时间为lOmin，冷冻温度为-18至_15°C。优选地，步骤I)中提取过程依次加入的超纯水，氘代内标(10g/mL)，乙腈和甲酸(49-51%)的体积分别为10mL，20L，10mL和200L。涡旋振荡(2000rpm) lmin。离心管在-10°C条件下保持lOmin。依次加入的无水硫酸镁，氯化钠，柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠的质量分别为4g, lg, Ig和0.5g。然后镟润混合振荡的速率为2000rpm,振荡时间为2min,离心(4000rpm)时间为 IOmin。优选地，步骤2)中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂的质量为150mg和25mg。优选地，所述步骤(2)中移取滤液体积为200L，加入乙腈和超纯水的体积为IOOL和 700L。优选地，步骤4)中选取70%甲酸水(体积分数0.05%)和30%乙腈初始流动相体系，分析时间为4min,进样量为10 μ L。优选地，步骤4)中梯度洗脱条件为梯度洗脱条件:(T2min，70%A^10%A ；2^3.5min,10%A 10%A ；3.5 3.51min, 10%A 70%A ；3.51 4.0Omin, 70%A 70%A ；流动相流速为 0.7mL/mirio优选地，步骤4)串联质谱检测器的条件:ES1-，喷雾电压(IS):2.6kV，雾化气流量:800L/Hr ;锥孔气(cone)流量50L/Hr，离子化温度350°C;碰撞气流量为0.15ml/min ;碰撞气为氩气，其余气体为氮气；驻留时间为30msec，负离子MRM模式采集。本专利技术的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，针对烟草样本优化了前处理条件，并对LC-MS/MS的相关检测条件进行了优化，主要优化了离子源条件，色谱柱以及流动相体系。与现有技术相比本专利技术方法具有如下优良效果:选取了基质分散固相萃取方式来处理样品，简化了前处理过程。在乙腈萃取过程中加入乙酸，有助于提高麦草畏这类苯氧羧酸类化合物的萃取效率。在加入硫酸镁和氯化钠之前，放入冰箱冷冻一段时间，可以防止其加入后过热结块。与传统的气相色 谱比较，采用基质分散固相萃取法来检测麦草畏。简化了前处理过程，提高了分析灵敏度。与HPLC方法相比，由于选取了超高效液相色谱柱RP18(50mmX2.1mm，1.7um)，使得柱子的分离度明显提高，分析时间显著缩短。串联质谱的使用使得方法的选择性和灵敏度提高，更有利于低含量的除草剂残留的测定。选取了氘代麦草畏对麦草畏进行定量，有效消除基质干扰和前处理过程中引起的误差，使得方法的准确性更闻。选取了两个离子对，定量离子对定量，定性离子对确认，可以提高方法的准确度。本方法具有操作简便、快速、准确、灵敏度及重复性好的优点。附图说明图1是麦草畏的子离子质谱图。图2是麦草畏-d3的子离子质谱图。图3是加标样品的选择离子流色谱图(50ng/mL，定量离子对)。图4是加标样品的选择离子流色谱图(50ng/mL，定性离子对)。图5是麦草畏-d3的选择离子流色谱图(IS20ng/mL)。具体实施例方式下面结合附图与具体实施例进行说明。参见图1至图5。1.仪器与试剂Waters Xevo TQ超高效液相色谱-串联质谱仪(美国Waters公司)，配备电喷雾电离源(ESI);VtexMixer230VeU振荡器(美国Labnet公司);Sigma3K15离心机(德国Sigma公司)。甲酸为HPLC级(浓度为49-51%，德国Sigma公司)；乙腈，甲醇均为色谱纯(美国Thermo-Fisher 公司);麦草畏标准品来自于 Labor Dr.Ehrenstorfer-Schafers(化学纯度:98.5%, Augsburg,德国)，内标麦草畏-d3 来自于 Labor 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种测定烟草中麦草畏含量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1）提取烟草中的目标物称取烘干磨好的烟叶样品，加入纯水浸润，依次加入氘代内标，乙腈和甲酸，涡漩混合振荡；放入冰箱冷冻后取出，依次加入无水硫酸镁，氯化钠，柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，涡旋振荡后离心；2）N?丙基乙二胺纯化移取上清液于新的离心管中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，于漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用乙腈和超纯水稀释后待测；3）标准储备液和标准工作液的配制用乙腈配置麦草畏标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，?20℃保存；取一定量的储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合标准储备液；用乙腈准确配置麦草畏?d3氘带内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，?20℃保存；取一定量的内标储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合内标标准储备液；所有的储备液于冰箱?20℃，使用前将其恢复到室温；用国际烟草科学研究合作中心空白烟叶的萃取基质配制不同浓度的麦草畏标准工作溶液；4）液相色谱?串联质谱（LC?MS/MS）测定：吸取空白烟叶溶液和配制好的不同浓度的麦草畏标准工作溶液，注入LC?MS/MS系统，按内标法以峰面积计算出样品待测液中麦草畏含量。...
【技术特征摘要】
1.一种测定烟草中麦草畏含量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: 1)提取烟草中的目标物 称取烘干磨好的烟叶样品，加入纯水浸润，依次加入氘代内标，乙腈和甲酸，涡漩混合振荡；放入冰箱冷冻后取出，依次加入无水硫酸镁，氯化钠，柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，涡旋振汤后尚心； 2)N-丙基乙二胺纯化 移取上清液于新的离心管中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，于漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用乙腈和超纯水稀释后待测； 3)标准储备液和标准工作液的配制 用乙腈配置麦草畏标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，-20°C保存；取一定量的储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合标准储备液； 用乙腈准确配置麦草畏-d3氘带内标标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，_20°C保存；取一定量的内标储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合内标标准储备液；所有的储备液于冰箱_20°C，使用前将其恢复到室温； 用国际烟草科学研究合作中心空白烟叶的萃取基质配制不同浓度的麦草畏标准工作溶液； 4)液相色谱-串联质 谱(LC-MS/MS)测定:吸取空白烟叶溶液和配制好的不同浓度的麦草畏标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，按内标法以峰面积计算出样品待测液中麦草畏含量。2.根据权利要求1所述的测定烟草中麦草畏含量的方法，其特征在于，所述烟叶的重量为2g。3.根据权利要求2所述的测定烟草中麦草畏含量的方法，其特征在于，步骤I)中所述冷冻时间为lOmin，冷冻温度为-18至-15°C。4.根据权利要求3所述的测定烟草中麦草畏含量的方法，其特征在于，步骤I)中提取过程依次加入的超...
【专利技术属性】
技术研发人员：熊巍，陶晓秋，韶济民，杨雪，庞夙，张海燕，黄玫，
申请(专利权)人：中国烟草总公司四川省公司，
类型：发明
国别省市：
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