本发明专利技术公开了一种制备重组人干扰素α2b的发酵培养基及发酵方法，包括一种适用于组成型表达的重组人干扰素α2b工程菌的发酵培养基配方及其发酵培养方法，发酵培养基配方其按照重量份其包括以下组分：胰蛋白胨25-35份，酵母提取物15-25份，磷酸氢二钠4-8份，磷酸二氢钾2-4份，氯化铵0.4-0.6份，氯化钠0.4-0.6份，硫酸镁0.2-0.4份，氯化钙0.05-0.15份与丙三醇10-20份，发酵方法的培养过程中以丙三醇为唯一碳源，以适量磷酸盐浓度调整目的蛋白的表达速率，保证了工程菌良好的生长状态，实现了高密度培养和高效表达。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，尤其涉及一种制备重组人干扰素a 2b的发酵培养基及发酵方法。
技术介绍
随着基因工程技术的发展，工程菌的发酵工艺得到极为广泛的应用，生物工程菌发酵的目的是获得大量的外源性的基因产物，尽可能减少宿主细胞及外来因素的污染，所以高密度、高产率高表达的培养已经成为发酵工业的目标和方向。在高密度表达方面，大肠杆菌是最具代表性及应用最广的宿主菌，大肠杆菌中重组蛋白表达方式有二种，一种为组成型表达，一种为诱导性表达， 目前，在重组蛋白工程菌的高密度发酵培养中，大多为诱导性表达的菌种，其优点在于通过温度诱导或化学诱导，可使工程菌在短时间内迅速生长，达到高比生长速率，同时达到最大表达量，缺点在于在细菌迅速生长的过程中细菌的代谢产物也会迅速产生，如有机酸、二氧化碳等有害物质的迅速积累会抑制细菌的生长和产物的表达，而最大的副产物乙酸的产生，一般认为细菌在低比生长速率条件下，通过氧化代谢作用产生的能量中足以满足合成和异化作用的需求，不会产生乙酸，而在高比生长速率时，大肠杆菌仅靠氧化代谢不能提供足够的能量，必须通过乙酸生成途径储备ATP和NADH，这样就会过多产生乙酸，而酸的增加会对细菌繁殖及产物表达抑制作用，同时也会对后续提纯带来很大的负担。大肠杆菌中重组蛋白的组成型表达方式是一种缓慢表达的方式，无需诱导，在细菌生长的过程中持续生长及表达，其生长周期内因没有诱导迅速生长的过程，生长速度均匀，代谢产物中乙酸含量低，可获得理想的产物表达率，但很难实现高密度培养。因此，现有技术还有待于更进一步的改进和发展。
技术实现思路
鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种制备重组人干扰素a 2b的发酵培养基及发酵方法，通过一种特定培养基及发酵过程的控制，实现组成型表达的重组人干扰素a 2b工程菌的高密度培养及高效表达。本专利技术的技术方案如下: 一种适用于组成型表达的重组人干扰素a 2b工程菌的发酵培养基，其按照重量份其包括以下组分: 胰蛋白胨25-35份，酵母提取物15-25份，磷酸氢二钠4_8份，磷酸二氢钾2_4份，氯化铵0.4-0.6份，氯化钠0.4-0.6份，硫酸镁0.2-0.4份，氯化钙0.05-0.15份与丙三醇10-20份。所述的发酵培养基，其中，胰蛋白胨浓度为25-35 g/L，酵母提取物的浓度为15-25g/L,磷酸氢二钠浓度为4-8 g/L,磷酸二氢钾浓度为2-4 g/L,氯化铵浓度为0.4-0.6g/L，氯化钠浓度为0.4-0.6 g/L，硫酸镁浓度为0.2-0.4g/L，氯化钙浓度为0.05-0.15 g/L与丙三醇浓度为10-20g/L。一种制备重组人干扰素a 2b的发酵方法，其包括以下步骤: A、按照重量份将胰蛋白胨25-35份，酵母提取物15-25份，磷酸氢二钠4_8份，磷酸二氢钾2-4份，氯化铵0.4-0.6份，氯化钠0.4-0.6份，硫酸镁0.2-0.4份，氯化钙0.05-0.15份与丙三醇10-20份加入发酵罐中，并向所述发酵罐中加入注射用水充分混合得到培养基; B、再向所述发酵罐中加入磷酸与50%的氢氧化钠溶液，调节所述培养基的PH值到7.0±0.2，然后再将工程菌菌种接种到所述培养基进行培养，所述发酵罐中培养温度为37°C，得到发酵产物； C、将所述发酵产物采用低温离心法得到菌体，并对所述菌体进行裂解及一系列提纯，获得重组人干扰素a 2b蛋白。所述的发酵培养方法，其中，所述步骤B还包括: B1、向所述发酵罐中加入所述磷酸，将所述培养基的PH值调节至4.2±0.2，并在121°C条件下灭菌15分钟； B2、将灭菌后的所述培养基温度控制在37°C，然后向所述发酵罐中加入50%的氢氧化钠溶液，将所述培养基的PH值调整至7.0±0.2 ; B3、发酵培养过程中向所述发酵罐中适时加入磷酸与50%的氢氧化钠溶液，控制所述培养基的PH值为7.0±0.2 ;随着细菌生长培养基的溶解氧自90%逐渐降低至零。本专利技术提供了一种制备重组人干扰素a 2b的发酵培养基及发酵方法，以丙三醇为唯一碳源，以适量磷酸盐浓度调整目的蛋白的表达速率，并将培养基于酸性条件下灭菌，减少灭菌时间以减少培养基营养成分的流失，培养过程中以50%的磷酸及50%氢氧化钠作为酸碱调节剂来调节发酵液的PH值，保证了工程菌良好的生长状态，实现了高密度培养和高效表达，本专利技术工艺简单，代谢副产物少，有利于表达产物的后续提纯，降低了重组人干扰素a 2b的制造成本。附图说明图1为本专利技术中发酵方法的流程示意 图2为本专利技术中工程菌生长曲线与目的蛋白表达的动态 图3为本专利技术中发酵产物的电泳图谱的示意图。具体实施例方式本专利技术提供了一种制备重组人干扰素a 2b的发酵培养基及发酵方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术提供了一种适用于组成型表达的重组人干扰素a 2b工程菌的发酵培养基配方，其按照重量份其包括以下组分:胰蛋白胨25-35份，酵母提取物15-25份，磷酸氢二钠 4-8份，磷酸二氢钾2-4份，氯化铵0.4-0.6份，氯化钠0.4-0.6份，硫酸镁0.2-0.4份，氯化钙0.05-0.15份与丙三醇10-20份。更进一步的，胰蛋白胨浓度为25-35 g/L，酵母提取物的浓度为15-25 g/L，磷酸氢二钠浓度为4-8 g/L,磷酸二氢钾浓度为2-4 g/L,氯化铵浓度为0.4-0.6g/L，氯化钠浓度为0.4-0.6 g/L,硫酸镁浓度为0.2-0.4g/L，氯化钙浓度为0.05-0.15 g/L与丙三醇浓度为10-20g/L。以丙三醇为唯一碳源，以适量磷酸盐浓度调整目的蛋白的表达速率，并将培养基于酸性条件下灭菌，减少灭菌时间以减少培养基营养成分的流失，培养过程中以50%的磷酸及50%氢氧化钠作为酸碱调节剂来调节发酵液的PH值，保证了工程菌良好的生长状态，实现了高密度培养和高效表达。本专利技术提供了一种制备重组人干扰素a 2b的发酵方法，如图1所示的，其包括以下步骤: 步骤101:按照重量份将胰蛋白胨25-35份，酵母提取物15-25份，磷酸氢二钠4_8份，磷酸二氢钾2-4份，氯化铵0.4-0.6份，氯化钠0.4-0.6份，硫酸镁0.2-0.4份，氯化钙0.05-0.15份与丙三醇10-20份加入发酵罐中，并向所述发酵罐中加入注射用水充分混合得到培养基； 步骤102:再向所述发酵罐中加入磷酸与50%的氢氧化钠溶液，调节所述培养基的PH值到7.0±0.2，然后再将工程菌菌种接种到所述培养基进行培养，所述发酵罐中培养温度为37°C，得到发酵产物； 步骤103:将所述发酵产物采用低温离心法得到菌体，并对所述菌体进行裂解提纯，获得重组干扰素a 2b蛋白。其更为具体的: 先按照重量份将胰蛋白胨25-35份，酵母提取物15-25份，磷酸氢二钠4_8份，磷酸二氢钾2-4份，氯化铵0. 4-0.6份，氯化钠0.4-0.6份，硫酸镁0.2-0.4份，氯化钙0.05-0.15份与丙三醇10-20份加入发酵罐中，并向所述发酵罐中加入规定数量的注射用水充分混合溶解上述培养基。然后以50 %磷酸调整PH至4.2±0.2，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备重组人干扰素α2b的发酵培养基，其按照重量份其包括以下组分：胰蛋白胨25?35份，酵母提取物15?25份，磷酸氢二钠4?8份，磷酸二氢钾2?4份，氯化铵0.4?0.6份，氯化钠0.4?0.6份，硫酸镁0.?2?0.4份，氯化钙0.05?0.15份与丙三醇10?20份。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭德本，刘芃实，刘长春，贺永山，卡特琳娜·阿尔瓦斯，
申请(专利权)人：长春海伯尔生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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