一种脾脏铁蛋白提取纯化的方法技术

本发明专利技术公开了一种脾脏铁蛋白提取纯化的方法，将动物脾脏绞碎，溶剂提取，热变除杂，氯化镁或氯化钙盐除杂，提取液浓缩，粗品沉淀，粗品结晶。本发明专利技术所用方法既节省了生产成本又缩短了生产周期，成本低，提取料液量小，加硫酸铵少，适合于生产的规模扩大化。并且铁蛋白的提取率有显著提高，而且所用辅料部分还可收。

【技术实现步骤摘要】

:本专利技术属生物提取领域，具体涉及。
技术介绍
:铁蛋白是一种含铁的蛋白质，具有电子致密特点，可对细胞抗原进行精确的定位且在电镜下可见。利用抗原与抗体特异性结合产生微量沉淀的原理，对组织细胞内的抗原和抗体进行超微结构鉴定和定位。因此铁蛋白在医学、生物学研究方面有着广泛的前途。铁蛋白一般来自动物，以肝、脾含量较高，其中马脾脏含量最高，因而商品铁蛋白主要从马脾脏中获得的。传统的提取的方法主要是取新鲜马脾用组织匀浆机粉碎，加水提取，热变除杂，去油脂，硫酸铵沉淀，粗品透析除盐，硫酸镉结晶。整个工艺提取周期长，成本高。特别是组织匀浆机处理效率比较低，加热后保温使很多铁蛋白变性失活，提取料液量大，加硫酸铵多且添加过程易使铁蛋白失活，透析处理耗时更不适合于生产的规模扩大化
技术实现思路
:本专利技术提供，该方法解决传统工艺周期长、成本高的问题。本专利技术的目的通过 以下技术方案实现:—种脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于将动物脾脏绞碎，溶剂提取，热变除杂，氯化镁或氯化钙盐除杂，提取液浓缩，粗品沉淀，粗品结晶。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于该方法具体包括以下按步骤:I)将动物脾脏粉碎成匀浆；2)将所述的匀浆与水混合，并再粉碎以便于铁蛋白的溶出；3)将步骤2)中再粉碎后的匀浆加热至60°C 85°C，立即降温至25°C以下；4)将步骤3)所得匀浆加入CaCl2或MgCl2除杂得提取液；5)将步骤4)所得提取液离心后取上清液超滤浓缩后得浓缩液；6)将步骤5)所得浓缩液中加丙酮进行分级沉淀铁蛋白得粗品铁蛋白，或者加硫酸铵沉淀铁蛋白得粗品铁蛋白；7)将步骤6)所得的粗品铁蛋白用水或/和硫酸铵溶液溶解得粗品铁蛋白溶解液并用硫酸镉结晶，得精品铁蛋白。可以用水溶解粗品铁蛋白并用硫酸镉结晶，重复进行几次得到精品铁蛋白；也可以用硫酸铵溶液溶解粗品铁蛋白并用硫酸镉结晶，重复进行几次得到精品铁蛋白；或者用水和硫酸铵溶液结合使用溶解粗品铁蛋白并用硫酸镉结晶，得精品铁蛋白。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于步骤I)中将动物脾脏绞碎后用胶体磨粉碎至粒度2 50 μ m的匀浆。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于步骤2)中将所述的匀浆与水混合并用胶体磨再粉碎f 2遍。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于步骤4)中氯化镁或氯化钙的添加量为勻衆的1°/T5% (w/v,即每IOOml勻衆中加入5g氯化镁或氯化I丐)。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于步骤5)中所述的上清液经超滤浓缩至原体积的1/2 1/6。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于步骤6)浓缩液中加丙酮进行分级沉淀，分级沉淀的过程为:(I)初沉:向浓缩液中加入丙酮得初沉溶液，静置，离心留上清液；(2)复沉:向上清液中加丙酮得复沉溶液，离心得粗品铁蛋白。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于初沉时所述初沉溶液中丙酮的体积百分浓度为59Γ18%，复沉时所述复沉溶液中丙酮的体积百分浓度为52°/Γ69%。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于步骤6)浓缩液中加硫酸铵沉淀铁蛋白时，硫酸铵的添加量为浓缩液的30°/Γ40% (w/v,即每IOOml浓缩液中加入3(T40g硫酸铵)，优选为35%。上述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其在于步骤7)中用来溶解粗品铁蛋白的硫酸铵溶液的质量百分浓度为0.5^1.5%，优选为1%，硫酸镉的添加量为粗品铁蛋白溶解液的29TlO% (w/v，每IOOml粗品铁蛋白溶解液中加入2 10g硫酸镉)，优选为5%。本专利技术的有益效果:本专利技术所用方法既节省了生产成本又缩短了生产周期，成本低，提取料液量小，力口硫酸铵少，适合于生产的规模扩大化。并且铁蛋白的提取率有显著提高(与现有方法相比铁蛋白的提取率可提高约20%左 右)，而且所用辅料部分还可收。附图说明:图1为本专利技术实施例方法所得精品铁蛋白经电泳检测的铁蛋白活性铁染色。图2为铁蛋白活性考马斯亮蓝染色。图3为铁蛋白SDS-page变性电泳。具体实施方式:以下通过实施实例对本专利技术作进一步说明，但其并不限制本专利技术的保护范围。实施例1:取马脾脏2.7 kg，绞碎后用胶体磨粉碎至粒度为疒50 μ m的匀浆，加水4.0 L后继续胶体磨匀浆2遍以便于铁蛋白溶出，加热至75°C，立即降温至20°C以下，得匀浆约6.2L，加入氯化镁186 g除杂得提取液，将提取液离心得上清液4.0 L，将上清液100KD超滤浓缩至1400 ml得浓缩液，向浓缩液中加入硫酸铵固体490 g (硫酸铵的添加量为浓缩液的35%，即每IOOml浓缩液中加入35g硫酸铵)，静置，离心得粗品铁蛋白121.5 g，将粗品铁蛋白用1600ml水溶解得粗品铁蛋白溶解液，加硫酸铺(硫酸铺添加量为粗品铁蛋白溶解液的5%,即每IOOml粗品铁蛋白溶解液中加入5g硫酸铺)，静置结晶，结晶完全后尚心取晶体以质量百分浓度为1%的硫酸铵水溶液溶解，加硫酸镉结晶2次，得精品铁蛋白5.6 g (湿重，约含水50%)，以质量百分浓度为1%硫酸铵溶液反复溶解后加硫酸铵固体沉淀除镉后加半饱和硫酸铵溶液保存。实施例2:取马脾脏2.7 kg，绞碎后用胶体磨粉碎至粒度为疒50 μ m的匀浆，加水4.0 L后继续胶体磨匀浆2遍以便于铁蛋白溶出，加热至80°C，立即降温至20°C以下，得匀浆约6.4 L，加入氯化钙128g除杂得提取液，将提取液离心得上清液4.2 L，将上清液100 KD超滤浓缩至1100 ml得浓缩液；向浓缩液中加丙酮进行分级沉淀，分级沉淀的过程为:(1)初沉:向浓缩液中加入丙酮150 ml得初沉溶液，静置，离心留上清液1250ml ; (2)复沉:向上清液中加丙酮1500 ml得复沉溶液，离心得粗品铁蛋白。将粗品铁蛋白以1700 ml质量百分浓度为1%的硫Ife按水溶液溶解得粗品铁蛋白溶解液，加硫Ife铺(硫Ife铺添加量为粗品铁蛋白溶解液的5%,即每IOOml粗品铁蛋白溶解液中加入5g硫酸铺),静置结晶，结晶完全后尚心取晶体以质量百分浓度为1%的硫酸铵水溶液溶解，加硫酸镉结晶2次，得精品铁蛋白5.5 g(湿重，约含水50%),以质量百分浓度为1%硫酸铵溶液反复溶解后加硫酸铵固体沉淀除镉后加半饱和硫酸铵溶液保存。对比实施例:取马脾脏2.7 kg，绞碎后用胶体磨粉碎至粒度为疒50 μ m的匀浆，加水4.0 L，加热至651:，降温至201:以下，得匀浆约4.4 L，离心得上清液3.1 L，向上清液中加硫酸铵1085 g，静置，离心得粗品铁蛋白83.2 g，用1200 ml水溶解得粗品铁蛋白溶解液，加硫酸铺(硫Ife铺添加量为粗品铁蛋白溶解液的5%,即每IOOml粗品铁蛋白溶解液中加入5g硫酸镉)，静置结晶，结晶完全后离心取晶体以质量百分浓度为1%的硫酸铵水溶液溶解，加硫酸镉结晶2次，得精品铁蛋白4.4 g (湿重，约含水50%)，以质量百分浓度为1%硫酸铵溶液反复溶解后加硫Ife按固体沉淀除铺后加半饱和硫Ife按溶液保存。上述实施例和对比实施例所得精品铁蛋白经电泳检测如图1铁蛋白活性铁染色、图2铁蛋白活性考马斯亮蓝染色及图3铁蛋白SDS-page变性电泳所示。实施例1与对比实施例对比可知，超滤后硫酸铵用量仅是传统工艺的一半以下，且料液量少，处理方便；实施例2与对比实施例对比本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其特征在于将动物脾脏绞碎，溶剂提取，热变除杂，氯化镁或氯化钙盐除杂，提取液浓缩，粗品沉淀，粗品结晶。

【技术特征摘要】
1.一种脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其特征在于将动物脾脏绞碎，溶剂提取，热变除杂，氯化镁或氯化钙盐除杂，提取液浓缩，粗品沉淀，粗品结晶。2.根据权利要求1所述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其特征在于该方法具体包括以下按步骤: 1)将动物脾脏粉碎成匀浆； 2)将所述的匀浆与水混合，并再粉碎以便于铁蛋白的溶出； 3)将步骤2)中再粉碎后的匀浆加热至60°C 85°C，立即降温至25°C以下； 4)将步骤3)所得匀浆加入CaCl2或MgCl2除杂得提取液； 5)将步骤4)所得提取液离心后取上清液超滤浓缩后得浓缩液； 6)将步骤5)所得浓缩液中加丙酮进行分级沉淀铁蛋白得粗品铁蛋白，或者加硫酸铵沉淀铁蛋白得粗品铁蛋白； 7)将步骤6)所得的粗品铁蛋白用水或/和硫酸铵溶液溶解得粗品铁蛋白溶解液并用硫酸铺结晶，得精品铁蛋白。3.根据权利要求2所述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其特征在于步骤I)中将动物脾脏绞碎后用胶体磨粉碎至粒度2 50 μ m的匀浆。4.根据权利要求2所述的脾脏铁蛋白提取纯化的方法，其特征在于步骤2)中将所述的匀浆与水混合 并用胶体磨再粉碎f 2遍。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冰峰，刘练，管增东，余利灯，
申请(专利权)人：南京化工职业技术学院，马鞍山汇智生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：