一种突变型隐色素基因1和突变型隐色素基因1的转基因猪制造技术

本发明专利技术属于基因工程领域。涉及一种突变型隐色素基因1和突变型隐色素基因1的转基因猪。本发明专利技术还涉及突变型隐色素基因1的核苷酸、核酸构建体、转基因动物细胞或其培养物以及制备非人转基因动物的方法。具体地，所述突变型隐色素基因1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2或SEQ?ID?NO：3所示。本发明专利技术制得的转基因猪出现了明显的生物节律紊乱和炎症因子高表达，具有作为筛选治疗和/预防和/或辅助治疗和/或调节生物节律紊乱的药物或者筛选治疗和/预防和/或辅助治疗炎症的药物的潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域。涉及一种突变型隐色素基因I和突变型隐色素基因I的转基因猪。本专利技术还涉及突变型隐色素基因I的核苷酸、核酸构建体、转基因动物细胞或其培养物以及制备非人转基因动物的方法。
技术介绍
从细菌到人，其生活系统中生物进程由昼夜节律控制着。在动物中，通过昼夜节律所调节的最明显的功能就是每天的睡觉和苏醒。此外后，还有其它很多生理过程是通过昼夜节律调节的，例如体温、进食行为、激素分泌、新陈代谢、葡萄糖平衡、细胞周期进展。当昼夜周期被破坏，无论是遗传还是环境所致，将发生不同的生理过程中的疾病。节律生理和其它生理是相互联系的，因此，当人的生物钟受到影响时，生物钟基因的遗传变化将极大地推动生理变化。在现代社会中，人们越来越忽视自然节律的重要性，所以，了解我们的生理节律是如何影响我们的 生理学和疾病的易感性和了解疾病的发展进程并确定新的治疗目标是相当重要的。最近的研究已经从分子水平解释生物节律是如何影响生理进程以及导致人类疾病的相关性，揭示了昼夜节律在神经、遗传、和分子水平对生理调控的生物模式，。从人类昼夜节律的遗传研究中发现，在模式生物和人类中，生物钟基因功能变异得到很好的保存。最近研究揭露了大量的惊人的细胞周期、新陈代谢、行为紊乱的分子联系，为人类疾病和治疗包括再生医学和癌症，肥胖，糖尿病，和心理健康提供了基础。时钟突变小鼠食欲增加并患肥胖，不但核心时钟基因的表达失去节奏，而且下丘脑分泌素水平较低。因此，时钟小鼠表现出代谢综合征，伴有炎症，高脂血症，脂肪肝，高血糖和膜岛素水平过低症。昼夜节律生物钟是动物机体内在的时间测量系统,能够使机体许多生理生化和行为过程维持一种近似24h的昼夜节律。目前，已在哺乳动物中陆续识别了 8个时钟基因(Clock、Bmal1、Timeless、CRYl、Cry2、Perl、Per2、Per3),研究表明这些时钟基因对于维持哺乳动物生物节律具有重要作用(King D P, Takahashi JS.Molecular genetics ofcircadian rhythms in mammals.Annu Rev Neurosci, 2000, 23:713 - 742.X隐色素基因1(Cryptochromel，CRYl)是哺乳动物已知生物钟基因之一，在维持昼夜节律和周期长短方面起到关键作用，同时也通过昼夜节律调控机体的生理节律维持机体稳态(Sanjin Zvonic, Andrey A.Ptitsyn, Steven A.Conrad, et al.Characterizationof Peripheral Circadian Clocks in Adipose Tissues.DIABETES, APRIL2006;55:962-970.)。目前尚需要深入研究和开发隐色素基因I在制备或筛选防治调节生物节律紊乱或炎症的药物的应用潜力。
技术实现思路
本专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种突变型隐色素基因1，并且获得了表达突变型隐色素基因I的转基因猪。本专利技术人惊奇地发现，该转基因猪出现了明显的生物节律紊乱和炎症因子高表达，具有作为筛选治疗和/预防和/或辅助治疗和/或调节生物节律紊乱的药物或者筛选治疗和/预防和/或辅助治疗炎症的药物的潜力。由此提供了下述专利技术:本专利技术的一个方面涉及一种分离的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3所示。所述多肽为突变型隐色素基因I。根据本发 明的实施例，突变型人源CRYl基因所突变的部分的氨基酸序列，是要将人隐色素基因I蛋白414位半胱氨酸(C)突变为丙氨酸(A)。来源于人的CRYl基因的氨基酸序列如下(野生型，其发生突变的位点以加框标出，下划线部分为第8个外显子的氨基酸序列):MGVNAVHWFRKGLRLHDNPALKECIQGADTIRCVYILDPWFAGSSNVGINRWRFLLQCLEDLDANLRKLNSRLFVIRGQPADVFPRLFKEWNITKLSIEYDSEPFGKERDAAIKKLATEAGVEVIVRISHTLYDLDKIIELNGGQPPLTYKRFQTLISKMEPLEIPVETITSEVIEKCTTPLSDDHDEKYGVPSLEELGFDTDGLSSAVWPGGETEALTRLERHLERKAWVANFERPRMNANSLLASPTGLSPYLRFGCLSCRLFYFKLTDLYKKVKKNSSPPLSLYGQLLWREFFYTAATNNPRFDKMEGNPICVQIPffDKNPEALAKWAEGRTGFPfflDAIMTQLRQEGWIHHLARHAVACFLTRGDLfflSffEEGMKVFEELLLDADWSINAGSWMWLSCSSFFQQFraCY.r* TVGFGRRTDPNGD YIRRYLP VLRGFPAKYIYDPff NAPEGIQKVAKCLIGVNYPKPMVNHAEASRLNIERMKQIYQQLSRYRGLGLLASVPSNPNGNGGFMGYSAENIPGCSSSGSCSQGSGILHYAHGDSQQTHLLKQGRSSMGTGLSGGKRPSQEEDTQSIGPKVQRQSTN (SEQ ID NO:1)。其突变后氨基酸序列如下(突变后的位点以加框标出，下划线部分为突变后出第8个外显子的氨基酸序列):MGVNAVHWFRKGLRLHDNPALKECIQGADTIRCVYILDPWFAGSSNVGINRWRFLLQCLEDLDANLRKLNSRLFVIRGQPADVFPRLFKEWNITKLSIEYDSEPFGKERDAAIKKLATEAGVEVIVRISHTLYDLDKIIELNGGQPPLTYKRFQTLISKMEPLEIPVETITSEVIEKCTTPLSDDHDEKYGVPSLEELGFDTDGLSSAVffPGGETEALTRLERHLERKAWVANFERPRMNANSLLASPTGLSPYLRFGCLSCRLFYFKLTDLYKKVKKNSSPPLSLYGQLLWREFFYTAATNNPRFDKMEGNPICVQIPWDKNPEALAKffAEGRTGFPfflDAIMTQLRQEGWIHHLARHAVACFLTRGDLfflSffEEGMKVFEELLLDADffSINAGSWMWLSCSSFFQQFFHCYr A _ PVGFGRRTDPNGDYIRRYLP VLRGFPAKYIYDPff NAPEGIQKVAKCLIGVNYPKPMVNHAEASRLNIERMKQIYQQLSRYRGLGLLASVPSNPNGNGGFMGYSAENIPGCSSSGSCSQGSGILHYAHGDSQQTHLLKQGRSSMGTGLSGGKRPSQEEDTQSIGPKVQRQSTN (SEQ ID NO:2)。突变后的第8个外显子的氨基酸序列如下:VFEELLLDADWSINAGSWMWLSCSSFFQQFFHCYAPVGFGRRTDPNGDYI (SEQ ID NO:3)根据本专利技术的实施例，与野生型隐色素基因I相比，所述突变型隐色素基因I突变了一个氨基酸的序列。借助该突变型隐色素基因I的表达，能够有效地干扰动物生物钟，从而可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2或SEQ?ID?NO：3所示。

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。2.一种分离的核苷酸，其编码权利要求1所述的多肽；具体地，所述核苷酸的氨基酸序列如 SEQ ID NO:5 或 SEQ ID NO:6 所示。3.—种核酸构建体,其包含权利要求2所述的核苷酸， 任选地，所述构建体进一步包含启动子序列，所述启动子序列与所述核苷酸可操作地相连，优选地，所述启动子为CAG启动子； 任选地，所述构建体进一步包括筛选标记基因，优选地，所述筛选标记基因为药物抗性基因，更优选地，所述药物抗性基因为新霉素抗性基因； 任选地，所述构建体呈选自质粒、噬菌体、人工染色体、粘粒以及病毒的至少一种的形式。4.一种重组宿主细胞,其含有权利要求3所述的核酸构建体。5.—种转基因动物细胞或其培养物，其含有权利要求2所述的核苷酸；具体地，所述转基因动物细胞为转基因猪细胞；更具体为转基因巴马猪细胞。6.—种组合物,其包含权利要求1所述的多肽、权利要求2所述的核苷酸、权利要求3所述的核酸构建体、权利要求4所述的重组宿主细胞或者权利要求5所述的转基因动物细胞或其培养物。7.一种制备非人转基因动物的方法，包括如下步骤: (1)提取动物细胞的细胞核； (...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，魏强，刘楚新，刘欢，杜玉涛，王俊，汪建，杨焕明，
申请(专利权)人：深圳华大基因研究院，
类型：发明
国别省市：