本发明专利技术涉及一种蓝莓花色苷的制备方法，步骤如下：将蓝莓冻干后捣碎、过筛后，将蓝莓粉与乙醇按蓝莓粉和乙醇的料液比g/g为1:8~12混合，混合物在85℃条件下提取、过滤，按上述重复提取2次，合并滤液，得到蓝莓花色苷粗提液；将粗提液于3000?r/min离心10?min，上清液抽滤，将滤液经浓缩、纯化、乙醇洗脱后得洗脱液，洗脱液经过萃取，真空冷冻干燥即得蓝莓花色苷。本发明专利技术制备方法是通过有机溶剂提取法得到蓝莓花色苷粗提液，再经过离心，抽滤，浓缩，树脂纯化，石油醚萃取后，再经过真空冷冻干燥得蓝莓花色苷样品，制备方法方法简单，蓝莓花色苷的利率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于营养与免疫领域，涉及蓝莓花色苷，尤其是一种蓝莓花色苷的制备方法与所制备的蓝莓花色苷的应用。
技术介绍
随着大气臭氧层的破坏和人类生活方式改变，日光照射增加使皮肤癌发病率显著增加。紫外线作用于细胞后，其光子能量被原子或分子吸收，引起分子原子电子能级状态的改变，进而导致细胞内相关事件出现，如细胞D NA损伤、基因表达的改变、细胞周期进程的抑制、DNA-蛋白交联以及染色体畸变；影响并抑制皮肤免疫功能，使突变细胞容易逃脱机体的免疫监视，从而易于导致皮肤鳞癌和基底细胞癌的发生。蓝莓(Blueberry)又称越橘，衆果，属杜胃$花科(Ericaceae)越橘属(Vacciniumlspp)多年生落叶或常绿灌木。蓝莓原产于美国佛罗里达北部。蓝莓果实呈蓝色，近圆形，披一层白色果粉，果肉细腻，种子极小，甜酸适度，且具有清爽的香气，既可鲜食，又可加工成果汁饮料、果酒、糖果、小食品等。其果实中含有丰富的￥0￡、￥八)、叶酸、鞣质，大量的糖、果胶、钾离子、氨基酸等。此外，蓝莓果内含有多种活性物质，如原花青素、花色苷、黄酮醇、酚酸等，蓝莓是一类含花色苷极高的资源。其花色苷被认为是自然界最有效的抗氧化剂。花色苷一词是Marguart在1835年首先用来命名矢车菊花朵中的蓝色提取物时提出来的，现为同类物质的总称。花色苷具有黄酮类化合物的C6-C3-C6碳结构，即两个芳香环和一个含氧杂环，在植物中通过与黄酮类相同的生物合成途径形成。花青素作为花色苷的前体物质，其基本结构为3，5，7-三羟基-2-苯基苯并吡喃，即花色基元，花色基元与各种糖结合形成不同的配糖体。由于花`青素不稳定，所以在植物中主要以花色苷形式存在。现已知的花色素有飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵素，以及甲基化的芍药色素、锦葵色素、牵牛花色素等。大量的研究结果也表明花色苷是一类具有保健功能的活性成分，有很好的药理作用:抗氧化、抗突变、抗肿瘤、清除自由基、减少低密度脂蛋白、改善视力、保护肝脏、预防心脑血管疾病、抗菌及抗癌等功能。目前，花色苷已成为医药、保健品的重要原料，以及食品、化妆品的重要添加剂。此外，还有许多研究证明花色苷在分子水平上花色苷可能通过保护DNA结构稳定，抑制细胞中部分酶活性，促进部分激素的形成和分泌来达到改善人体其它机能。通过检索，未发现与本专利申请相关的专利公开文献。
技术实现思路
本应用的目的在于克服现有技术的不足，提供一种原料来源广泛、价格低廉、方法简单的蓝莓花色苷的制备方法，同时也提供了由该制备方法制备得到的蓝莓花色苷的应用。本专利技术实现目的的技术方案是:一种蓝莓花色苷的制备方法，步骤如下:⑴蓝莓花色苷的提取将蓝莓冻干后捣碎、过筛后，将蓝莓粉与乙醇按蓝莓粉和乙醇的料液比g/g为1: 8^12混合，混合物在85°C条件下提取、过滤，按上述重复提取2次，合并滤液，得到蓝莓花色昔粗提液；⑵蓝莓花色苷的纯化将步骤⑴中制得的蓝莓花色苷粗提液于3000 r/min离心10 min,上清液抽滤,将滤液经浓缩、纯化后得洗脱液，洗脱液经过萃取，真空冷冻干燥即得蓝莓花色苷。而且，所述步骤⑴中与蓝莓粉混合的乙醇的浓度为80%。而且，所述步骤⑴中混合物在85 °C条件下提取时间为3 h。而且，所述步骤⑴中蓝莓粉和乙醇的料液比g/g为1:10。而且，所述步骤⑵中的纯化树脂为AB-8大孔树脂，纯化条件为:吸附平衡时间为4h，解吸平衡时间为2 h，吸附平衡质量浓度为750 mg/L，在30°C，用pH3.0的60%乙醇溶液作为解吸液，吸附流速为1 mL/min，上样液浓度为3.0 mg/mL,用5倍柱床体积的60%酸性乙醇作为洗脱液，洗脱流速为1mL/min。而且，所述步骤⑵中的萃取液为石油醚。一种如上所述的蓝莓花色苷的制备方法所制备得到的蓝莓花色苷在制备保护DNA损伤的药物中的应用。而且，所述DNA损伤为紫外照射造成肝癌细胞的损伤。而且,所述蓝莓花色苷的作用浓度为75 μ g/mL。本专利技术的优点和有益效果为:1、本专利技术制备方法是通过有机溶剂提取法得到蓝莓花色苷粗提液，再经过离心，抽滤，浓缩，树脂纯，再经过真空冷冻干燥得蓝莓花色苷样品，制备方法方法简单，蓝莓花色苷的利率高。2、本专利技术制备方法使用的蓝莓，价格低廉、来源广泛，不仅扩大了蓝莓的使用范围、为以后蓝莓的研究提供了依据，提高了农副产品的应用价值，而且对研究色素类物质保护DNA损伤具有积极的意义。3、本专利技术制备方法制备得到的蓝莓花色苷处理人肝癌细胞H印G2细胞，与紫外照射组相比，蓝莓花色苷使损伤的H印G2细胞囊泡相对减少，彗星尾距降低、细胞的ROS水平显著降低、细胞p53、p21的基因的表达水平降低，免疫印迹实验检测表明p53、磷酸化p53(p-p53)、p21蛋白的相对表达量降低，表明蓝莓花色苷对UV致H印G2细胞的损伤具有一定保护作用，因此可以应用于制备保护DNA损伤的药物中。附图说明图1为本专利技术电子扫描显微镜观察细胞形态图，其中，图1-1为空白组，图1-2为紫外照射组，图1-3为蓝莓花色苷处理组；图2为本专利技术激光共聚焦显微镜检测彗星实验图；其中，图2-1为空白组，图2-2为紫外照射组，图2-3为蓝莓花色苷处理组；图3为本专利技术活性氧检测(ROS)结果图；其中，图3-1为空白组，图3-2为紫外照射组，图3-3为蓝莓花色苷处理组；图4为本专利技术使用75 u g/mL蓝莓花色苷处理H印G2细胞较紫外照射组人p21、p53基因的相对表达量图；图5为本专利技术蓝莓花色苷处理H印G2细胞后较紫外照射组相比p53、磷酸化p53(p-p53)、p21蛋白的相对表达量降低蛋白的相对表达量图。具体实施例方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。本专利技术的主要思想为:以蓝莓为原料，通过有机溶剂提取法提取蓝莓花色苷提取液，再经过纯化得到蓝莓花色苷，将所得到的蓝莓花色苷作用于人肝癌细胞H印G2细胞，观察蓝莓花色苷对紫外照射造成人肝癌细胞DNA损伤的保护作用。本专利技术利用蓝莓花色苷处理人肝癌细胞H印G2，观察蓝莓花色苷对紫外照射造成人肝癌细胞DNA损伤的保护作用。细胞实验表明与紫外照射组相比:蓝莓花色苷使损伤的HepG2细胞囊泡相对减少，彗星尾距降低、细胞的ROS水平显著降低、细胞p53、p21的基因的表达水平降低，免疫印迹实验检测表明p53、磷酸化p53 (p-p53)、p21蛋白的相对表达量降低，结果表明蓝莓花色苷对UV致HepG2细胞的损伤具有一定保护作用。一、一种蓝莓花色苷的制备方法，步骤如下:1、蓝莓花色苷提取将清洗干净的蓝莓，冻干后在组织捣碎机中捣碎并过80目筛；将粉碎后的蓝莓粉、80%乙醇以料液比g:g为1:10混合，混合物在85°C下提取3小时后趁热400目筛过滤，得滤液和滤渣；再将滤渣按上述重复提取2次，合并滤液，得蓝莓花色苷提取液。2、蓝莓花色苷纯化蓝莓花色苷提取液3000 r/min离心10 min取上清，抽滤后40°C旋转蒸发仪浓缩提取液，经AB-8大孔树脂纯化:吸附平衡时间为4 h，解吸平衡时间为2 h，吸附平衡最适质量浓度为750 mg/L，在30°C，pH3.0时吸附能力比较强，用pH3.0的60%乙醇溶液作为解吸液，吸附流速为I mL/mi本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种蓝莓花色苷的制备方法，其特征在于：步骤如下：⑴蓝莓花色苷的提取将蓝莓冻干后捣碎、过筛后，将蓝莓粉与乙醇按蓝莓粉和乙醇的料液比g/g为1:8~12混合，混合物在85℃条件下提取、过滤，按上述重复提取2次，合并滤液，得到蓝莓花色苷粗提液；⑵蓝莓花色苷的纯化将步骤⑴中制得的蓝莓花色苷粗提液于3000?r/min离心10?min，上清液抽滤，将滤液经浓缩、纯化后得洗脱液，洗脱液经过萃取，真空冷冻干燥即得蓝莓花色苷。
【技术特征摘要】
1.一种蓝莓花色苷的制备方法，其特征在于:步骤如下: ⑴蓝莓花色苷的提取 将蓝莓冻干后捣碎、过筛后，将蓝莓粉与乙醇按蓝莓粉和乙醇的料液比g/g为1:8 12混合，混合物在85°C条件下提取、过滤，按上述重复提取2次，合并滤液，得到蓝莓花色苷粗提液； ⑵蓝莓花色苷的纯化 将步骤⑴中制得的蓝莓花色苷粗提液于3000 r/min离心10 min，上清液抽滤，将滤液经浓缩、纯化后得洗脱液，洗脱液经过萃取，真空冷冻干燥即得蓝莓花色苷。2.根据权利要求1所述的蓝莓花色苷的制备方法，其特征在于:所述步骤⑴中与蓝莓粉混合的乙醇的浓度为80%。3.根据权利要求1所述的蓝莓花色苷的制备方法，其特征在于:所述步骤⑴中混合物在85°C条件下提取时间为3 h。4.根据权利 要求1所述的蓝莓花色苷的制备方法，其特征在于:所述步骤⑴中蓝莓粉和乙醇的料液比g/g为1:10。5.根据权利要求1所述的蓝莓花色苷的...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘薇，卢相义，罗成，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
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