脂肪组织衍生的基质干细胞在治疗瘘中的用途制造技术

本发明专利技术提供采用脂肪组织衍生的基质干细胞治疗瘘的新方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
脂肪组织衍生的基质干细胞在治疗瘘中的用途相关申请参考本申请是2005年2月25日提交的美国专利申请11/065，461的部分继续申请以及2005年2月14日提交的美国专利申请11/056，241的部分继续申请，在此将这些申请的内容整体通过参考明确并入本文。专利技术背景一般而言，瘘是正常情况下不连接的器官或脉管之间的异常连接或通道。瘘可以发生在身体的多个部位。例如，瘘的种类，以它们在身体中发生的区域命名，包括肛门直肠瘘或肛瘘或粪瘘(直肠或其它肛门直肠部位与皮肤表面之间)、动静脉瘘或A-V瘘(动脉和静脉之间)、胆瘘(胆管和皮肤表面之间，通常由胆囊手术造成)、子宫颈瘘(子宫颈中的异常开口)、鼻脑脊液瘘(颅内腔和鼻旁窦之间)、肠肠瘘(肠的两个部位之间)、肠皮瘘(肠和皮肤表面之间，即从十二指肠或空肠或回肠起)、肠阴道瘘(肠和阴道之间)、胃瘘(胃和皮肤表面之间)、子宫腹膜瘘(子宫和腹膜腔之间)、外淋巴瘘(中耳和内耳之间的膜之间的裂口)、肺动静脉瘘(肺的动脉和静脉之间，导致血液分流)、直肠阴道瘘(直肠和阴道之间)、脐瘘(脐和肠之间)、气管食管瘘(呼吸和饲管之间)以及膀胱阴道瘘(膀胱和阴道之间)。瘘的病因包括创伤、内科治疗的并发症和疾病。瘘的治疗随病因和瘘的程度而变，但是一般涉及外科手术。多种手术方法被经常使用，最经常的是瘘道切开术、放置泄液线(穿过瘘的通道的绳索用于保持其开放而引流)、或直肠内瓣方法(其中健康组织被拉过来置于瘘的内侧以使粪便或其它物质不会再感染该通道)。对于肛门直肠瘘的手术并非没有副作用，包括复发、再感染和失禁。诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎的炎性肠病为肛门直肠瘘、肠肠瘘、肠皮肤瘘的主要病因。在克罗恩病中所报道的瘘发生率为17%至50%。对克罗恩病患者中瘘的治疗仍代表了极有挑战性的问题，因为很多这类瘘对可用的疗法没有反应。这类瘘以及它们的复发是非常让人痛苦的并发症，它们显著地降低了受累患者的生活质量。内科疗法的最新改进(例如用Inflixinmb 治疗)和专业的手术处理已经减少了对复杂手术的需要。然而，许多患者未被治愈。瘘治愈失败可能是由于受克罗恩病影响的组织的非最佳质量。实际上，克罗恩瘘为一些最坏的可能条件下的伤口愈合提供了模式系统。瘘的另一主因是诸如由强奸或由分娩期间持续损伤引起的对阴道和膀胱和/或直肠的创伤，导致直肠阴道瘘和膀胱`阴道瘘。在发展中国家每年大约有100，000妇女在梗阻性分娩期间遭受这类瘘(也称为产科瘘)。梗阻性分娩期间，婴儿的头对母亲骨盆的压力切断了对该区域脆弱组织的血液供应。死组织脱落，该妇女留下膀胱阴道瘘，有时还有直肠阴道瘘。这种孔导致永久性的尿和/或粪便失禁。联合国人口基金会(UNFPA)估计产科瘘受害者的全球人数超过两百万。这个计算结果可能是显著的低估。首次手术修补的成功率在88%至93%，但随后的尝试的成功率会降低。因此，大比例的妇女具有不能通过手术修复的产科瘘。亟需瘘的新疗法。
技术实现思路
除了其它方面以外，本专利技术提供新的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物。本文描述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物具有独特的表型，并表现出比以前描述的脂肪组织衍生的基质干细胞组合物更好的表型同质性，因此使得它们比以前描述的组合物更适合用于治疗瘘和伤口。含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物可以与溶液或其它物质一起配制，以用作药物或医疗用具，例如缝线或粘合剂。此外，还提供采用脂肪组织衍生的基质干细胞治疗瘘和伤口的新方法以及用于实施该方法的试剂盒。本专利技术的这些实施方案、其它实施方案以及它们的特点和特征将会由于以下的说明、附图和权利要求而显而易见。附图简要说明附图说明图1显示了由实施例1的方法分离的细胞通过免疫荧光染色的表征结果。免疫阳性细胞的频率表示如下:-,小于 5% ；+/-, 6-15% ；+, 16-50% ；++, 51-85% ；以及 +++，86-100%。P，传代次数。图2显示了脂肪组织衍生的基质干细胞的间接免疫荧光表征。来自患者#001的细胞在植入n0.6后传代6细胞。蓝色表示DAPI染色的核。(A)⑶90; (B)c-Kit; (C)波形蛋白。图3总结了采用本专利技术的一些方法和组合物获得的临床结果。F，女性；M，男性；NI，未植入；NA，未分析。图4显示了脂抽吸物衍生的细胞在不同FBS浓度(0.5,2.5和10%，如所指明的)时的生长曲线。人滑液成纤维细胞在5%或10%FBS存在下培养。以595nm处的吸光度显示细胞数目土SD。数据来自三个重复孔的有代表性试验。图5显示在靠近缝合的内开口处注射细胞后直肠粘膜中的泡。图6显示注射细胞之前(A)和8周后⑶瘘的照片。图7A显示了突光免疫细胞计量的直方图，其对应于从参与本项研究的患者的吸脂样品分离的细胞在传代6次时获得的表面标志物谱(⑶3、⑶9、⑶10、⑶lib、⑶13、⑶14、CD 15、CD16、CD18、CD19、CD28、CD29、CD31、CD34、CD36、CD38、CD44、CD45、CD49a、CD49b、CD49c、CD49d、CD49e 和 CD49f)。图7B显示了突光免疫细胞计量的直方图，其对应于从参与本项研究的患者的吸脂样品分离的细胞在传代6次时获得的表面标志物谱(⑶50、⑶51、⑶54、⑶55、⑶56、⑶58、CD59、CD61、CD62E、CD62L、CD62P、CD90、CD95、CD102、CD104、CD105、CD106、CD133、CD166、glicoforina、β 2 微球蛋白、HLA 1、HLA II 和 NGFR)。专利技术详细说明1.定义:用在本文时，以下的术语和短语应具有以下指出的意义。除非另有说明，在此使用的所有科技术语都与本专利技术所属领域普通技术人员所通常理解的意义相同。冠词“a”和“an”指该冠词语法对象的一个或多个(即至少一个)。举例而言，“anelement”指一个或多个元件。“脂肪组织”指任何脂肪组织。脂肪组织可以是衍生自皮下、网膜/内脏、乳房、生殖腺或其它脂肪组织部位的棕色或者白色脂肪组织。优选地，该脂肪组织为皮下白色脂肪组织。这类细胞可以包含原代细胞培养物或永生细胞系。该脂肪组织可以来自任何具有脂肪组织的器官。优选地，该脂肪组织是哺乳动物脂肪组织，最优选的脂肪组织是人脂肪组织。方便的脂肪组织源来自吸脂手术，但是脂肪组织源或分离脂肪组织的方法对本专利技术并不关键。如果基质细胞为向个体自体移植所需，则脂肪组织分离自该个体。“脂肪组织衍生的基质干细胞”指源自脂肪组织的间充质干细胞。术语“粘合剂”指将表面联合或结合在一起的任何物质，例如胶。术语“细胞组合物”指细胞制剂，该制剂除了细胞之外还可以包括非细胞组分，例如细胞培养基，如蛋白、氨基酸、核酸、核苷酸、辅酶、抗氧化剂、金属等等。此外该细胞组合物可具有不影响该细胞组分生长或存活力的组分，但是它们用于将细胞以特定形式提供，例如，作为聚合物基质用于包囊或药物制剂。术语“培养(culture) ”指培养基中的细胞、生物体、多细胞实体或组织的任何生长。术语“培养(culturing)”指实现这种生长的任何方法，可以包括多个步骤。术语“进一步培养(further culturing) ”指培养细胞、生物体、多细胞实体或组织至某个生长本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其中所述组合物包含的所述脂肪组织衍生的基质干细胞的至少约85%表达CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49A、CD51、CD54、CD55、CD58、CD59、CD90和CD105标志物。

【技术特征摘要】
2005.06.24 US 11/167,0611.含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其中所述组合物包含的所述脂肪组织衍生的基质干细胞的至少约 85% 表达 CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49A、CD51、CD54、CD55、CD58、CD59、CD90 和 CD105 标志物。2.如权利要求1所述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其中所述组合物包含的所述脂肪组织衍生的基质干细胞的至少约95%表达⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、CD49A、CD51、CD54、CD55、CD58、CD59、CD90 和 CD105 标志物。3.如权利要求2所述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其中所述组合物包含的所述脂肪组织衍生的基质干细胞的至少约99%表达⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、CD49A、CD51、CD54、C D55、CD58、CD59、CD90 和 CD105 标志物。4.如权利要求3所述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其中所述组合物包含的所述脂肪组织衍生的基质干细胞的少于约5%表达⑶34、⑶lib、⑶14、⑶15、⑶16、CD31、CD34、CD45、CD49f、CD102、CD104、CD 106 和 / 或 CD 133 标志物。5.如权利要求1所述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其还包含林格溶液和 HSA。6.如权利要求5所述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其中所述组合物包含的所述脂肪组织衍生的基质干细胞的浓度为至少约IOx IO6细胞/mL。7.如权利要求6所述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其中所述组合物包含的所述脂肪组织衍生的基质干细胞的浓度为至少约20xl06细胞/mL。8.如权利要求1所述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其还包含粘合剂。9.如权利要求8所述的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物，其中所述粘合剂为纤维蛋白胶或凝胶。10.包含权利要求1的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物的支持物。11.如权利要求10所述的支持物，其中所述支持物为缝线。12.如权利要求10所述的支持物，其中所述支持物为贴片。13.制备用于瘘修复的粘合剂的方法，包括用基于纤维蛋白的聚合物悬浮权利要求1的含有脂肪组织衍生的基质干细胞的组合物。14.脂肪组织衍生的基质干细胞，其表达⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、⑶49A、⑶51、CD54、CD55、CD58、CD59、CD90 和 CD1...

【专利技术属性】
技术研发人员：马里亚赫马·费尔南德兹米格尔，曼努埃尔安赫尔·冈萨雷斯德拉培尼亚，罗萨阿尼娅·加西亚卡斯特罗，马里亚诺·加西亚阿兰斯，达米安·加西亚奥尔莫，
申请(专利权)人：塞勒里克斯有限公司，马德里自治大学，
类型：发明
国别省市：