本发明专利技术公开了一种山绿茶种苗的快速繁育方法，包括外植体灭菌、初代诱导、继代增殖、生根移栽等技术环节，使山绿茶迅速增殖，短时间内生产大量优质种苗，所得种苗可直接用于大田生产，缓解山绿茶原料来源紧张、供不应求的局面。本发明专利技术快速繁育方法生产成本低、操作简便、增殖速度快、周期短，可大量、快速、持续获得高质量的山绿茶试管苗，而且全年皆可进行，便于大规模工业化生产应用。利用本发明专利技术繁殖山绿茶，移栽成活率高，种苗遗传特性稳定，不会发生变异，有利于保持种苗的优良性状，提高种苗使用的安全性，对药用植物资源再生和持续利用具有十分积极的影响，可广泛适用于商业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养
，尤其是涉及一种。
技术介绍
山绿茶为冬青科植物海南冬青(Ilex hainanensis Merr.)的干燥叶经加工炮制而成。山绿茶疗效明确、使用历史悠久，已收载于《广西中药材标准》(1990年版)。山绿茶具有清热解毒、消肿止痛、活血通脉的功效，主要用于降血压、降血脂、降胆固醇及冠心病、脑血管意外所致的偏瘫，以及风热感冒、肺热咳嗽、咽喉水肿、扁桃体炎、痢疾等病症。药理研究还表明山绿茶中的三萜类化合物具有抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗肝病毒抗炎和抗AIDS等活性。以山绿茶为主要原料制成的制剂作为降压、降脂的常用中成药，具有使用量较大、疗效确切、毒副作用小、产品独特等优点，在全国各地销路很好，市场占有率高，有较好的经济效益和持续发展前景。据《新华本草纲目》记载:“山绿茶，又名海南冬青，性寒，味苦，经入肝、脾、肺、肾，平息肝风，用于肝风头痛及肝阳上亢头痛、头晕等症”。申请人广西万寿堂药业有限公司生产有决明山绿茶、山绿茶降压胶囊等主导产品，在市场同类产品中销量领先。山绿茶的原植物海南冬青是冬青科冬青属植物，主要分布于广西、广东、海南和云南一带，在广西区内主要分布在大明 山附近各县海拨超过600-800m的山上，目前企业收购的山绿茶药材均来自于大明山附近的上林、武鸣、宾阳、马山等地，均为野生的药材资源，迄今尚未有栽培历史。随着山绿茶制剂新产品市场销量的逐年增加，山绿茶药材需求量也不断增大，但经过多年采集，有限的野生资源已面临枯竭，原料供不应求，致使药材价格不断上扬。为了满足企业的生产需求，必须进行大面积的人工栽培，为药材原料提供新的来源。目前，野生山绿茶主要通过种子繁殖，其种子胚组织发育不良，兼受季节、生长环境等因素的影响，种子繁殖率低，发芽率低于2% ;此外，繁育期长，繁殖后代变异大，成活率低，繁殖受自然条件限制等诸多问题，不能满足大面积人工栽培的需要。经检索，迄今为止，国内未见有关于山绿茶相关育种及栽培研究的报道，国外也无相关的研究记录。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种成本低廉、操作简便、增殖速度快、实用有效的，该法借助培养基和附加成份对山绿茶进行快速繁殖，增殖培养形成的种苗可直接用于大田种植，生产山绿茶药材速度快、效果好、成活率高。为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案:，包括以下步骤:( I)外植体选择与灭菌取山绿茶成熟的浆果，消毒处理后剥开果皮取种子接种在种子萌发培养基中进行萌发培养，培养室温度为24 28°C ；(2)初代诱导待子叶展开后，将无菌苗的根系切去，转接到丛生芽诱导培养基中进行培养，培养20d ；(3)继代增殖将初代诱导培养获得的丛生芽切下单芽丛转接到继代培养基中进行增殖培养，培养 20d ；(4)生根当继代增殖芽苗长至2cm以上，从基部切成单个芽，转接到生根培养基进行生根培养，培养周期25d;(5)炼苗移栽把生根的瓶苗搬到炼苗棚，打开瓶盖炼苗3 5d，将瓶苗取出，清洗后移栽到细河沙上，移栽后IOd内保持相对湿度95%左右，温度控制在20 26°C，无直射光，移栽15d后即可上杯种植，30d后可进行大田栽培。种子萌发培养基为MS (Murashige and skoog (1962)培养基)+0.5 3.0mg.Ll-BA (6-苄基腺嘌呤)+0.1 1.0mg.T1NAA (萘乙酸)+ 蔗糖 25 30g.Γ1+琼脂 5g.I71, pH6.0。丛生芽诱导培养基为MS+0.5 3.0mg.L_16-BA+0.8 1.8mg.L-1KT (激动素)+0.1 1.0mg.L 1NAA+ 鹿糖 25 30g.L1+ 琼脂 5g.L \ pH6.0。继代培养基为M S+0.5 3.0mg Γ^-ΒΑ+Ο.1 1.0mg L^KT+0.1 1.0mg.L-1TDZ(喔苯隆)+0.1 1.0mg.L 1NAA+ 鹿糖 25 30g.L1+ 琼脂 5g.L S pH6.0。生根培养基为1/2MS+0.5 2.0mg.L-1IBA (吲哚丁酸)+0.1 1.0mg.L-1NAA+ 蔗糖 25 30g.L-1+ 琼脂 5g.L-1, pH6.0。初代诱导、继代增殖与生根的培养条件为温度24 28°C，光照强度2000LX 3000Lx、光照时间 I Oh/d。步骤(I)中消毒处理是0.l%HgCl2溶液消毒处理5 IOmin。为缓解山绿茶原料来源紧张、供不应求的局面，专利技术人以山绿茶的种子为外植体，采用植物组织细胞繁殖法，建立了一种。该法包括外植体灭菌、初代诱导、继代增殖、生根移栽等技术环节，使山绿茶迅速增殖，短时间内生产大量优质种苗，所得种苗可直接用于大田生产。本专利技术快速繁育方法生产成本低、操作简便、增殖速度快、周期短(I 2个月)，可大量、快速、持续获得高质量的山绿茶试管苗，而且全年皆可进行，便于大规模工业化生产应用。利用本专利技术繁殖山绿茶，移栽成活率高(84.1%以上)，种苗遗传特性稳定，不会发生变异，有利于保持种苗的优良性状，提高种苗使用的安全性，对药用植物资源再生和持续利用具有十分积极的影响，可广泛适用于商业化生产。具体实施例方式实施例1( I)外植体选择与灭菌取山绿茶成熟的浆果，用0.05%洗洁精溶液浸泡lOmin，再经流水冲洗15min，接着用0.1ffigCl2溶液消毒处理lOmin，然后用镊子剥开果皮取种子接种在种子萌发培养基中进行萌发培养，培养室温度为24 26°C，利用该法灭菌种子无污染；种子萌发培养基为MS+1.5mg -Γ^-ΒΑ+Ο.5mg -L^1NAA+ 蔗糖 25g -Γ1+ 琼脂 5g. ΛρΗ6.00(2)初代诱导种子20d开始萌发(萌发率为83.2%)，待子叶展开后，将无菌苗的根系切去，转接到丛生芽诱导培养基中进行培养，培养IOd (温度24 26°C，光照强度2000LX、光照时间10h/d)，丛生芽从无菌苗的下部叶腋处长出，继续培养至20d转接，诱导率为100% ;丛生芽发生过程不经过愈伤组织阶段。丛生芽诱导培养基为MS+1.5mg.L 1B-BA+1.2mg.L ^T+0.5mg.L 1NAA+ 鹿糖25g.L-1+ 琼脂 5g.L-1, pH6.0。(3)继代增殖将初代诱导培养获得的丛生芽切下单芽丛转接到继代培养基中进行增殖培养，培养20d(温度24 26°C，光照强度2000Lx、光照时间10h/d)，丛生芽生长快，无玻璃化现象，增殖倍数为12.4 ;·继代培养基为MS+1.5mg.L_16-BA+0.5mg.L_1KT+0.5mg.L_1TDZ+0.5mg.L-1NAA+ 蔗糖 25g.I71+ 琼脂 5g.I71, pH6.00(4)生根当继代增殖芽苗长至2cm以上，从基部切成单个芽，转接到生根培养基进行生根培养，培养周期25d (温度24 26°C，光照强度2000Lx、光照时间10h/d)，7d开始长根原基，25d后开盖炼苗，生根率为91% ；生根培养基为1/2MS+1.2mg.Γ' ΒΑ+Ο.5mg.T1NAA+ 蔗糖 25g.Γ1+ 琼脂 5g. ΛρΗ6.00(5)炼苗移栽把生根的瓶苗搬到炼苗棚，打开瓶盖炼苗5d，用镊子将瓶苗取出，用清水洗去粘附在根部的培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种山绿茶种苗的快速繁育方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体选择与灭菌取山绿茶成熟的浆果，消毒处理后剥开果皮取种子接种在种子萌发培养基中进行萌发培养，培养室温度为24～28℃；（2）初代诱导待子叶展开后，将无菌苗的根系切去，转接到丛生芽诱导培养基中进行培养，培养20d；（3）继代增殖将初代诱导培养获得的丛生芽切下单芽丛转接到继代培养基中进行增殖培养，培养20d；（4）生根当继代增殖芽苗长至2cm以上，从基部切成单个芽，转接到生根培养基进行生根培养，培养周期25d；（5）炼苗移栽把生根的瓶苗搬到炼苗棚，打开瓶盖炼苗3～5d，将瓶苗取出，清洗后移栽到细河沙上，移栽后10d内保持相对湿度95%左右，温度控制在20～26℃，无直射光，移栽15d后即可上杯种植，30d后可进行大田栽培。
【技术特征摘要】
1.一种山绿茶种苗的快速繁育方法，其特征在于包括以下步骤: (1)外植体选择与灭菌 取山绿茶成熟的浆果，消毒处理后剥开果皮取种子接种在种子萌发培养基中进行萌发培养，培养室温度为24 28°C ； (2)初代诱导 待子叶展开后，将无菌苗的根系切去，转接到丛生芽诱导培养基中进行培养，培养20d ； (3)继代增殖 将初代诱导培养获得的丛生芽切下单芽丛转接到继代培养基中进行增殖培养，培养20d ； (4)生根 当继代增殖芽苗长至2cm以上，从基部切成单个芽，转接到生根培养基进行生根培养，培养周期25d ； (5)炼苗移栽 把生根的瓶苗搬到炼苗棚，打开瓶盖炼苗3 5d，将瓶苗取出，清洗后移栽到细河沙上，移栽后IOd内保持相对湿度95%左右，温度控制在20 26°C，无直射光，移栽15d后即可上杯种植，30d后可 进行大田栽培。2.根据权利要求1所述的山绿茶种苗的快速繁育方法，其特征在于:所述种子萌发培养基为 MS+0.5 3.0mg.L ^-BA+0.1 1.0mg.L 1NAA+ 鹿糖 25 30g.L1+ 琼脂 5g.L SρΗ6.003.根据权利要求1所述的山绿茶种苗的快速繁育方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒙永业，谭文明，利荣欢，覃爱环，
申请(专利权)人：广西万寿堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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