人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂制造技术

一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，试剂包括人类免疫缺陷病毒(Human?Immunodeficiency?Virus，HIV)抗体试纸、洗涤液、显色系统、阳性对照品、阴性对照品和免疫层析结果判读仪；HIV抗体反应试纸上包被了10条蛋白条带，分别是HIV1?gp160、gp120、P66、p51、gp41、p24、p17、HIV2?gp36和2条不同浓度的人IgG条带；胶体金标记的抗人IgG或SPA，或是生物素标记的抗人IgG或SPA、胶体金标记的亲和素组成显色系统。检测时将样本加在HIV抗体试纸上，洗涤去除无关蛋白，用显色系统进行显色，用免疫层析结果判读仪或肉眼根据条带显色情况进行结果判定，具有操作简便、快速、适合现场检测和经济实用等优点。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术是涉及生物应用
，特别是涉及用于一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂的体外诊断试剂。
技术介绍
自人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的艾滋病在20世纪80年代发现以来，已传遍全球。据联合国艾滋病总署(UNAIDS)报告，至2010年底，全球感染艾滋病人数达3700万。我国目前大约有HIV感染者70余万。迄今为止尚无有效的药物及疫苗来治疗和预防艾滋病，因而HIV感染已成为当今全球威胁最为严重的传染病及公共卫生问题。正由于此，HIV感染的监测受到世界各国的高度重视，WHO、美国FDA及许多发达国家已于1985年相继制定了有关供血者、血液制品等筛选检查的法规，其中HIV抗体的检测被列为常规。我国在1987年就颁布了《艾滋病监测管理的若干规定》，在1990年和1994年又制定了有关献血员检查HIV抗体及加强供血员血样检验用体外免疫诊断试剂的质量控制，实行了批批检定的规定，确保HIV检测试剂盒有稳定的质量，从而有效的控制了 HIV感染的传播。由于HIV病毒的易变性，目前还没找到有效的疫苗，也没有有效药物进行有效治疗。当前控制HIV病毒传播的最有效手段就是尽早发现病毒携带者，尽早隔绝传染源。对HIV感染者的诊断主要以检测抗体为主。检测方法有凝聚法、间接免疫荧光法、ELISA、金标试剂、蛋白印迹法等。第一个获得美国FDA批准用于检测HIV抗体的试剂盒是美国Abbott (亚倍)公司的ELISA试剂盒，之后许多国家的ELISA试剂盒也相继投入市场，我国检测HIV抗体的ELISA试剂盒是1989年问世的。间接免疫荧光法和凝聚法由于操作过程繁琐，受影响因素较多，已较少采用。胶体金法是近年来发展起来的常用的检测方法。目前应用最为普遍的是采用ELISA或胶体金人群进行初步筛选，然后对有感染可疑的样本用蛋白印迹(Western Blot, WB)法进行确认，称为抗体确认试剂。目前WB法国内外只有少数几个公司生产，并且反应时间长，操作烦琐。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，具有操作简便、快速、适合现场检测和经济实用等优点。本专利技术提供一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，其特征在于，试剂包括HIV抗体试纸洗涤液、显色系统、阳性对照品、阴性对照品和免疫层析结果判读仪；所述HIV抗体试纸上包被了 10 条蛋白条带，分别是 HIVlgpl60、gpl20、P66、p51、gp41、p24、pl7、HIV2gp36和2条不同浓度的人IgG条带；胶体金标记的抗人IgG或SPA，或是生物素标记的抗人IgG或SPA、胶体金标记的亲和素显色系统。HIV抗体试纸结构为NC膜、NC膜下方紧密连接的吸样垫和装载NC膜及吸样垫的塑料外壳；NC膜从一端开始，依次包被的10条蛋白条带为高浓度人 IgG, HIVlgpl60、gpl20、P66、p51、gp41、p24、pl7、HIV2gp36 和低浓度人 IgG0 胶体金直径为20-100nm。其中，所述HIV抗体抗确认试剂的反应结果通过免疫层析结果判读仪是一种光学检测系统进行判定。所述人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，HIV抗体试纸制备方法如下:1、包被NC膜:将蛋白用0.0lM的磷酸盐缓冲液稀释成0.001_2mg/ml，优选为，高浓度人 IgG 为 0.05mg/ml,低浓度人 IgG 为 0.005mg/ml, gpl60 为 1.0mg/ml, gpl20 为 0.8mg/ml,p66 为 0.8mg/ml, p51 为 0.8mg/ml,gp41 为 0.8mg/ml, p24 为 0.5mg/ml,pl7 为 0.5mg/ml, gp36为0.6mg/ml ；NC膜选用0.45um孔径的膜，宽度为40mm,长度为300mm ;将稀释好的抗体装载在喷膜机上，按lul/cm划线，各线的间隔为2-4mm，优选为3mm ;划线完成后，将NC膜置于30%以下的湿度，干燥4小时以上。2、制备试纸:将NC膜横向切成3_8mm的宽度，优选为5臟，在NC膜下部垫上吸样垫，吸样垫为吸水材料，吸水能力不低于2ml，然后装入大小合适的塑料卡内，形成试纸。所述人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，显色系统的制备方法为:1、直接显色系统:(I)用还原法制备浓度为0.02%的20-100nm的胶体金，优选为40nm的胶体金；⑵用K2CO3将胶体金pH调节成8.0，按IOug抗人IgG或SPA每ml胶体金将蛋白加入，混匀30min，离心弃上清，将溶液用1/10体积的磷酸盐缓冲液溶解，加入微量防腐剂，即成为显色系统。2、生物素-亲和素显色系统:(I)用还原法制备浓度为0.02%的20_100nm的胶体金，优选为40nm的胶体金；(2)用无水DMSO配制10mg/ml生物素N-轻基琥拍酰亚胺酯溶液，用硼酸盐缓冲液(0.lmol/L, pH8.8)配制浓度为2mg/ml的抗人IgG或SPA溶液，按25ug/mg的比率将生物素酯加入抗体中，混合均匀并在室温下孵育4hr，将抗体溶液用PBS透析，以除去未结合的生物素，再稀释成合适的比例后，制成显色底物I ;⑶用K2CO3将胶体金pH调节成8.0,按IOug亲和素每ml胶体金将蛋白加入,混勻30min,离心弃上清,将溶液用1/10体积的磷酸盐缓冲液溶解，加入微量防腐剂，为显色底物2 ； (4)显色底物I和2构成显色系统。所述HIV抗体抗确认试剂，阳性对照品为人HIV抗体阳性血清，经处理后制成，其抗 HIV-1 的8 160、8 120、？66、？51、8 41、？24、？17，抗!11￥-2 的 gp36 均为阳性；阴性对照品为人HIV抗体阴性血清，经处理后制成，抗HIV-1和HIV-2各类抗原均为阴性。洗涤液为含0.5% Tween20的0.0lM的磷酸盐缓冲液。所述HIV抗体抗确认试剂，保存条件为2_8°C，避光保存，有效期12个月。所述人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，检测方法如下:1、将试剂和待检血清(浆)平衡到室温；2-8°C保存的试剂需20_30min平衡至室温;2、将HIV抗体试纸取出，平放，向试纸的NC膜上滴加100_150ul的待检血清(浆)样本，样本将缓慢渗入NC膜，最后进入吸样垫，此过程约2-3min ；3、向NC膜上滴加100-150ul洗涤液，等洗涤液渗入进膜后，再滴加100_150ul洗涤液，重复洗涤2次，此过程约5-8min ；4、若采用直接显色系统，向NC膜上滴加100_150ul抗人IgG或SPA标记胶体金，胶体金将将缓慢渗入NC膜，最后进入吸样垫，此过程约2-3min ;若采用生物素-亲和素显色系统，向NC膜上滴加100-150ul生物素标记抗人IgG或SPA,待生物素标记抗体缓慢渗入NC膜后，再滴加100-150ul洗涤液，参照步骤3，洗涤3次，此过程约5-8min，再加入100_150ul胶体金标记的亲和素，胶体金将缓慢渗入NC膜，最后进入吸样垫，此过程约2-3min ；5、向NC膜上滴加100-150ul洗涤液，等洗涤液渗入进膜后，再滴加100_150ul洗涤液，重复洗涤I次,此过程约4-6min ；6、此时NC膜上将出现胶体金显色的红色条带，用专用的检测仪器或肉眼判定检测结果。进行上述检测时需同时平行做阳性和阴性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，其特征在于：试剂包括HIV抗体试纸、洗涤液、显色系统、阳性对照品、阴性对照品和免疫层析结果判读仪；所述HIV抗体试纸上包被了10条蛋白条带，分别是HIV1gp160、gp120、P66、p51、gp41、p24、p17、HIV2?gp36和2条不同浓度的人IgG条带；胶体金标记的抗人IgG或SPA，或是生物素标记的抗人IgG或SPA、胶体金标记的亲和素显色系统。

【技术特征摘要】
1.一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂，其特征在于:试剂包括HIV抗体试纸、洗涤液、显色系统、阳性对照品、阴性对照品和免疫层析结果判读仪；所述HIV抗体试纸上包被7 10 条蛋白条带，分别是 HIVlgpl60、gpl20、P66、p51、gp41、p24、pl7、HIV2 gp36 和 2 条不同浓度的人IgG条带；胶体金标记的抗人IgG或SPA，或是生物素标记的抗人IgG或SPA、胶体金标记的亲和素显色系统。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐明山，吴澜，
申请(专利权)人：齐明山，吴澜，
类型：实用新型
国别省市：