一种适用于双向电泳的甘蔗蛋白质提取方法技术

本发明专利技术涉及一种适用于双向电泳的甘蔗蛋白质提取方法。本发明专利技术对甘蔗蛋白质提取体系进行优化，将冰浴超声与漩涡震荡交替使用，提高了蛋白质得率。本发明专利技术的方法具有药品配制简单、操作方便、蛋白得率高、杂质少的优点。该方法比较适用于稀有材料或蛋白质提取纯化较困难的材料。使用本方法得到的蛋白占粗蛋白粉末的48%-60%，显著高于传统方法的8%-15%，同时所得粗蛋白粉末质量好，完全满足双向电泳的要求，对甘蔗蛋白质组学的研究具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种适用于双向电泳的甘蔗蛋白质提取方法，其特征在于操作步骤如下：（1）取甘蔗正一叶位的新鲜叶片，清洗干净后剪碎，秤取2.0?g，置于盛有液氮的研钵中，加入0.2?g?PVP，研磨成粉末；（2）将粉末全部转入50?mL离心管中，加入4?℃预冷的提取缓冲液5?mL，使用时加入0.2?mL?β?巯基乙醇；所述提取缓冲液配制方法为：取蔗糖150?g，SDS?7.5?g，用pH8.8的Tris?HCl?缓冲液定容至500?mL；?（3）漩涡振荡5?min后，冰浴条件下重复超声2次，每次超声处理?5?10?min，期间摇匀，超声强度为0.4??0.6w/cm2；?（4）加入5?mL?pH8.8的Tris饱和酚，漩涡5?min，冰浴条件下重复超声2次，每次超声处理5?10?min，期间摇匀，超声强度为0.4??0.6?w/cm2；??（5）静置30?min后分层，12000?rpm离心25?min，取上层酚相加5倍体积的?20?℃预冷甲醇?醋酸铵溶液，混匀，?20℃处理10?16?h；?（6）4?℃?12000?rpm离心30?min弃上清液，加入5?mL??20?℃预冷的甲醇?醋酸铵溶液洗涤，收集沉淀，置于?20?℃冰箱3?5?h；?（7）用?20?℃预冷的丙酮洗涤沉淀3次，?0?℃条件下真空干燥1.5?h，获得粗蛋白粉末。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐景升，朱海龙，林庆良，董萌，阙友雄，郭晋隆，高世武，许莉萍，陈如凯，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：