以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种保健食品中总皂苷的测定方法，尤其是涉及一种以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的测定方法。本发明专利技术包括标准曲线制作工序、样品处理工序、试液过柱工序、显色工序和总皂苷计算工序，标准曲线制作工序中，采用吸光度值和人参皂苷的质量做曲线，得到标准曲线，样品处理工序中，取以蜂胶为原料的保健食品0.3g得到待测试液，试液过柱工序中，采用层析柱对待测试液进行过柱操作，得到待测试液挥干蒸发皿，显色工序中，得到待测试液的吸光度值，总皂苷计算工序中，得到以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的含量。本发明专利技术提取方法简单，回收率高，准确性好，简便快速。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种保健食品中总皂苷的測定方法，尤其是涉及ー种以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的測定方法。
技术介绍
蜂胶是蜜蜂采集植物的树脂，并混以自身分泌物而成的胶粘性物质。蜂胶可以补虚弱，化浊脂，止消渴；外用解毒消肿，收敛生肌。蜂胶已经被广泛用作保健食品原料。蜂胶中组分复杂，不溶于水，提纯后的蜂胶呈褐色块状，既不方便服用，也不利于吸收，因此加工成保健食品时往往需要加入辅料保证蜂胶能够以细微粉末的状态分散在产品中。以蜂胶为原料的保健食品中，可同时配有西洋參、人參等含皂苷类化合物的原料，这类保健食品往往将总黄酮与总皂苷确定为产品的功效成分。文献报道的总皂苷测定方法有:香草醛比色法、薄层色谱法、GC法、HPLC法、LC 一 MS法，CE法等；如沈向红，任一平，陈翊.HPLC法与香草醛比色法測定保健品中的人參皂甙.中国卫生检验杂志，2004, 14(6):681-683中就公开了香草醛比色法和HPLC法。保健食品评价与技术规范(2003年版)提供的保健食品中总皂苷的測定方法，是目前保健食品中总皂苷的经典測定方法，用此法測定含有蜂胶原料的保健食品时，由于受蜂胶、崩解剂、填充剂等辅助物料的保护，产品中总皂苷难以被有效提取，总皂苷含量測定结果往往与实际配方量不符，准确度差。现在也有其他的用于测定总皂苷含量的方法，如公开日为2012年10月31日，公开号为CN102759514A的中国专利中，公开了ー种注射用益气复脉制剂中人參总皂苷的含量的測定方法，该方法包括以下步骤:1)对照品的制备分别精密称取人參总皂苷对照品，加甲醇溶解，制得溶液，2)供试品溶液的制备取注射用益气复脉药物粉末，精密称定，用水溶解，过上树脂柱，以甲醇-水冲洗后，以甲醇洗脱，洗脱液过滤，制得溶液，3)測定方法分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，紫外分光光度法测定样品中人參总皂苷的含量。该方法不能测定以蜂胶为原料的保健食品中的总皂苷。综上所述，目前还没有一种提取方法简单，回收率高，准确性好，简便快速的以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的測定方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的上述不足，而提供一种提取方法简单，回收率高，准确性好，简便快速的以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的測定方法。本专利技术解决上述问题所采用的技术方案是:该以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的測定方法，其特征在于:该测定方法包括标准曲线制作エ序、样品处理工序、试液过柱エ序、显色エ序和总皂苷计算エ序；所述标准曲线制作エ序中，分别吸取Oml、10ml、20ml、40ml、60ml、80ml、IOOml和120ml已知浓度的人參皂苷Re标准液置于八个蒸发皿中，待蒸发皿中的人參皂苷Re标准液干燥后，先加入5ml摩尔浓度为0.1M的氢氧化钠溶液,再加水20ml,摇匀后用盐酸调节pH值为6.5-7.0，从而得八份标准母液，将八份标准母液置于45-55°C的水浴中超声20_40min破乳，冷却到常温，分别采用50ml的容量瓶用水定容到50ml，摇匀后过滤，弃去5ml初滤液，取1.0ml续滤液做为标准试液，从而得到八份标准试液；采用层析柱对每份标准试液进行过柱操作，先用25mL体积百分比为70%的こ醇洗柱，弃去洗脱液,再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL标准试液，过柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性杂质，弃去洗脱液，用25mL体积百分比为70%的こ醇洗脱人參皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，放水浴中挥干，从而得到八个挥发后的蒸发皿；在已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL体积百分比为5%的香草醛冰こ酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.SmL高氯酸，混匀后移入5mL带塞刻度离心管中，放在60°C以下的水浴中加热lOmin，取出，冰浴冷却后，准确加入冰こ酸5.0mL，摇匀后，以Icm比色皿于560nm波长处与标准管一起进行比色測定，从而得到八个吸光度值；ー个吸光度值和ー个蒸发皿中含有的人參皂苷的质量相对应，采用吸光度值和人參皂苷的质量做曲线，得到标准曲线； 所述样品处理工序中，取以蜂胶为原料的保健食品0.3g置于50ml容量瓶中，加入5ml摩尔浓度为0.1M的氢氧化钠溶液来溶解保健食品,待保健食品溶解后,加水20ml，摇匀后用盐酸调节PH值为6.5-7.0，在45-55°C的水浴中超声20_40min破乳，冷却到常温，用水定容到50ml，摇匀后过滤，弃去5ml初滤液，取1.0ml续滤液做为待测试液； 所述试液过柱エ序中，采用层析柱对待测试液进行过柱操作，先用25mL体积百分比为70%的こ醇洗柱，弃去洗脱液,再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL待测试液，过柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性杂质，弃去洗脱液,用25mL体积百分比为70%的こ醇洗脱人參皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，放水浴中挥干，得到待测试液挥干蒸发皿；所述显色エ序中，在待测试液挥干蒸发皿中准确加入0.2mL体积百分比为5%的香草醛冰こ酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.SmL高氯酸，混匀后移入5mL带塞刻度离心管中，放在60°C以下的水浴中加热lOmin，取出，冰浴冷却后，准确加入冰こ酸5.0mL，摇匀后，以Icm比色皿于560nm波长处与标准管一起进行比色測定，从而得到待测试液的吸光度值，该吸光度值和以蜂胶为原料的保健食品相对应； 所述总皂苷计算エ序中，将待测试液的吸光度值代入标准曲线中，得到待测试液中含有的人參皂苷的质量，从而得到以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的含量。本专利技术采用氢氧化钠水溶液溶解以蜂胶为原料的保健食品，释放被蜂胶、崩解剂和填充剂包埋的总皂苷成分，使之溶于水中，然后用盐酸调节PH值至6.5-7.0，保证总皂苷在水中的稳定性，并使蜂胶重新析出，排除了蜂胶的干扰，从而有效地提取了总皂苷。用本方法測定含有蜂胶、崩解剂、填充剂的样品中的总皂苷，具有提取方法简单，回收率高，准确性好，简便快速的特点，可以用于以蜂胶为原料以总皂苷为功效成分的保健食品的质量控制，也可以用于一般保健食品中的总皂苷的測定。作为优选，本专利技术在标准曲线制作エ序中和试液过柱エ序中，所用的层析柱的长20cm-25cm,内径0.6cm_0.8cm,顶部接30ml的！)&液漏斗；层析柱内装6cm高的Amberlite-XAD-2大孔树脂,上加高Icm的中性氧化招。作为优选，本专利技术在样品处理工序中，使用氢氧化钠溶液来溶解保健食品时，采用振摇分散的方式或者超声辅助分散的方式进行溶解。作为优选，本专利技术在样品处理工序中，向已经溶解的保健食品中加入20ml水并摇匀后，用于调节PH值的盐酸为体积百分比为10%的盐酸。作为优选，本专利技术所述标准曲线制作エ序中，标准曲线的回归方程为y=ax+b，其中，Y表示吸光度值，X表示人參皂甙的质量，a为正数，b为任意数。作为优选，本专利技术所述标准曲线制作エ序中，标准曲线的回归方程为y=0.0036x-0.0043,表示吸光度值的y的单位为A,表示人參阜式的质量的x的单位为mg。作为优选，本专利技术所述回归方程的相关系数R2=0.9937，说明在20mg-240mg范围内呈现良好的线性关系。作为优选，本专利技术所述样品处理工序中，以蜂胶为原料的保健食品是磨成粉末状的。由此使得本专利技术能够更快本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的测定方法，其特征在于：该测定方法包括标准曲线制作工序、样品处理工序、试液过柱工序、显色工序和总皂苷计算工序；所述标准曲线制作工序中，分别吸取0ml、10ml、20ml、40ml、60ml、80ml、100ml和120ml已知浓度的人参皂苷Re标准液置于八个蒸发皿中，待蒸发皿中的人参皂苷Re标准液干燥后，先加入5ml摩尔浓度为0.1M的氢氧化钠溶液，再加水20ml，摇匀后用盐酸调节pH值为6.5?7.0，从而得八份标准母液，将八份标准母液置于45?55℃的水浴中超声20?40min破乳，冷却到常温，分别采用50ml的容量瓶用水定容到50ml，摇匀后过滤，弃去5ml初滤液，取1.0ml续滤液做为标准试液，从而得到八份标准试液；采用层析柱对每份标准试液进行过柱操作，先用25mL体积百分比为70%的乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL标准试液，过柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性杂质，弃去洗脱液，用25mL体积百分比为70%的乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，放水浴中挥干，从而得到八个挥发后的蒸发皿；在已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL体积百分比为5%的香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入5mL带塞刻度离心管中，放在60℃以下的水浴中加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，以1cm比色皿于560nm波长处与标准管一起进行比色测定，从而得到八个吸光度值；一个吸光度值和一个蒸发皿中含有的人参皂苷的质量相对应，采用吸光度值和人参皂苷的质量做曲线，得到标准曲线；所述样品处理工序中，取以蜂胶为原料的保健食品0.3g置于50ml容量瓶中，加入5ml摩尔浓度为0.1M的氢氧化钠溶液来溶解保健食品，待保健食品溶解后，加水20ml，摇匀后用盐酸调节pH值为6.5?7.0，在45?55℃的水浴中超声20?40min破乳，冷却到常温，用水定容到50ml，摇匀后过滤，弃去5ml初滤液，取1.0ml续滤液做为待测试液；所述试液过柱工序中，采用层析柱对待测试液进行过柱操作，先用25mL体积百分比为70%的乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL待测试液，过柱，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性杂质，弃去洗脱液，用25mL体积百分比为70%的乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，放水浴中挥干，得到待测试液挥干蒸发皿；所述显色工序中，在待测试液挥干蒸发皿中准确加入0.2mL体积百分比为5%的香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入5mL带塞刻度离心管中，放在60℃以下的水浴中加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，以1cm比色皿于560nm波长处与标准管一起进行比色测定，从而得到待测试液的吸光度值，该吸光度值和以蜂胶为原料的保健食品相对应；所述总皂苷计算工序中，将待测试液的吸光度值代入标准曲线中，得到待测试液中含有的人参皂苷的质量，从而得到以蜂胶为原料的保健食品中总皂苷的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周萍，
申请(专利权)人：杭州蜂之语蜂业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：